靶向APRIL基因小干扰RNA对鼠肠癌细胞生长与迁移能力的影响

目的 制备并筛选靶向鼠结直肠癌细胞株CT-26增殖诱导配体(APRIL)基因小干扰RNA(siRNA),通过检测APRIL siRNA抑制肠癌细胞生长及迁移等指标,为体内递送APRIL siRNA靶向治疗小鼠结直肠癌原位模型奠定基础.方法 分别设计、合成4种不同位点的APRIL siRNA,同时以合成无序序列作为阴性对照,再用LipofectAMINE 2000转染高表达APRIL的鼠结直肠癌细胞株CT-26,荧光显微镜下计数评价6-FAM标记的APRIL siRNA转染效率与筛选转染浓度;FQ-RT-PCR检测APRIL mRNA水平,Western印迹分析APRIL蛋白表达,筛选沉默效率最高的APRIL siRNA片段;细胞损伤修复法检测APRIL siRNA抑制肠癌细胞迁移的能力;CCK-8(cell counting kit-8)法检测细胞增殖情况;RT-PCR检测基质金属蛋白酶MMP-2及TIMP-1 mRNA水平.结果 4种不同siRNA瞬时转染CT-26细胞后APRIL mRNA和蛋白表达有明显差别(P＜0.05).APRIL siRNA组与对照组相比,细胞生长与迁移能力明显减弱(P＜0.05),MMP-2及TIMP-1 mRNA水平均有显著性差别(P＜0.05).结论 成功筛选靶向鼠结肠癌细胞株CT-26增殖诱导配体APRIL siRNA,其中APsi737敲低效率可达到90%.靶向APRIL基因小干扰RNA可有效降低肠癌细胞的生长与转移能力,可能与MMP-2及TIMP-1的调节有关.可用于后续的靶向治疗结直肠癌研究.

Abstract：

Objective To construct and screen siRNA targeting a proliferation-inducing ligand (APRIL) gene in a mouse colorectal cancer celline, CT-26. To investigate the effects to the cell growth and migrant capacity of CT-26 after knockdown APRIL gene, lay the foundation for molecular targeted therapy to colorectal cancer. Methods Four pairs of APRIL siRNA were designed and chemically synthesized. And disorder sequences were synthesized as a negative control. These sequences were transfected with LipofectAMINE 2000 into CT-26 cells, which high-expressed APRIL gene. The transfection efficency rate of 6-FAM labelled control siRNA was detected by fluorescence microscope. The inhibition effectiveness of APRIL mRNA and protein was analyzed by FQ-RT-PCR and Western blot, respectively. Cell proliferation activity was analyzed by cell counting kit-8, cell migration capacity was detected by the repair of cell damage, and MMP-2 together with TIMP-1, two important regulatory genes in cell metastasis, were measured by RT-PCR.Results The different kinds of APRIL siRNA effectively suppressed the level of APRIL mRNA and the protein expression in CT-26 (P ＜ 0.05 ). Cell proliferation and metastasis ability were repressed after APRIL siRNA transfection( P ＜ 0.05 ), compared with random siRNA control and nontransfected control. The mRNA levels of MMP-2 and TIMP-1 genes wre significantly altered among APRIL siRNA groups and two control groups ( P ＜ 0.05). Conclusion We have constructed and screened a kind of siRNA (APsi737) targeting APRIL gene in a mouse colorectal cancer cell line, CT-26. APRIL siRNA can effectively inhibit the cell growth and migration capacity, maybe be regulated by MMP-2 and TIMP-1.     

齐墩果酸对顺铂耐药胃癌SGC-7901细胞增殖及细胞凋亡的影响

目的 探讨齐墩果酸(OA)对顺铂耐药胃癌 SGC-7901(SGC-7901/CDDP)细胞增殖及细胞凋亡的影响.方法 体外诱导建立人胃癌顺铂耐药细胞株 SGC-7901 /CDDP,MTT 比色法检测OA对 SGC-7901/CDDP 细胞增殖的抑制作用;琼脂糖凝胶电泳检测基因组 DNA 的降解;蛋白质免疫印迹检测凋亡相关蛋白酶的激活.结果 MTT实验证明OA对SGC-7901/CDDP 细胞的生长有抑制作用,100 μmol/L OA作用72 h对SGC-7901/CDDP细胞的抑制率达62%,并表现为时间和剂量依赖性;琼脂糖凝胶电泳实验证明100 μmol/L的OA处理SGC-7901/CDDP细胞48 h后基因组DNA被降解,可见较典型的DNA梯形带;蛋白质免疫印迹分析表明,100 μmol/L的OA处理SGC-7901/CDDP细胞48 h后,细胞内凋亡相关的蛋白酶caspase-3被激活.结论 OA在体外能够诱导SGC-7901/CDDP细胞凋亡,诱导凋亡的途径可能是线粒体途径.     

凝血酶促进结肠癌SW480细胞生长的研究

目的探讨凝血酶对结肠癌SW480细胞增殖及细胞周期的影响。方法将20 nmol/L、100 nmol/L、500nmol/L的凝血酶作用于SW480细胞48 h,以未处理组（0 nmol/L）作为对照。CCK-8（cell counting kit-8）法检测细胞增殖情况;流式细胞术检测细胞周期变化;RT-PCR检测蛋白酶活化受体-4（protease-activated receptor-4,PAR-4）的mRNA表达;Western blotting检测NF-κB p50蛋白表达。结果在20-500 nmol/L浓度范围内,凝血酶可剂量依赖性的促进SW480细胞的增殖;细胞周期显示G0/G1期细胞百分数减少,S期及G2/M期细胞百分数增加,表明凝血酶可诱导细胞从G0/G1期向G2/M期发展,从而促进细胞增殖;随着凝血酶浓度的增加,PAR-4 mRNA及NF-κB p50蛋白含量也有不同程度的增加。结论在20-500 nmol/L浓度范围内,凝血酶可促进结肠癌SW480细胞的增殖,加速细胞周期进程;其作用可经PAR-4介导,并与NF-κB信号通路活化有关。     

磁共振扩散加权成像技术在肝纤维化检查中的应用价值

肝纤维化是各种病因引起的肝脏纤维结缔组织的过度沉积,是纤维增生和分解不平衡的结果,也是各类慢性肝损伤→肝纤维化→肝硬化→肝癌渐进发展的必经的特征性病理过程。因肝纤维化是唯一可逆的过程,如何早期诊断肝纤维化、有效地阻断或干预肝纤维化的进程,正是当今研究的难点。弥散加权磁共振成像（DWI）是能反映活体组织内水分子扩散运动的成像技术,应用DWI对肝脏病变分析也是目前影像研究的热点之一。     

生脉饮对TNF-α诱导的大鼠心肌成纤维细胞胶原合成的影响

目的探讨生脉饮对肿瘤坏死因子（tumor necrosis factorα,TNF-α）诱导的新生大鼠心肌成纤维细胞（cardiacfibroblasts,CFs）胶原合成的影响及其机制。方法用不同浓度生脉饮载药血清与TNF-α处理体外培养的CFs,采用分光光度法检测细胞培养上清液中羟脯氨酸含量,采用实时定量RT-PCR检测MMP1和TIMP1 mRNA的表达水平。结果 TNF-α处理组羟脯氨酸含量较空白对照组明显升高;与TNF-α组比较,生脉饮口服液血清中羟脯氨酸含量降低。与空白对照组比较,TNF-α组MMP1和TIMP1 mRNA表达上调;生脉饮载药血清组MMP1较TNF-α组显著升高,而TIPM1显著降低,差异有统计学意义（均P〈0.05）,并呈浓度依赖性。结论生脉饮对TNF-α诱导的CFs胶原合成具有抑制作用,下调MMP1和上调TIPM1 mRNA表达可能是其作用的机制之一。     

关于提高高校科研团队人力资源管理质量的建议

目前科研团队已经成为我国高校科研创新和人才培养的重要载体,但科研团队的作用尚未得到完全发挥,管理体制和管理观念仍处于探索时期。本文从高校科研团队运作模式的关键因素和高校科研团队运作系统的高效管理两个方面探讨如何提高高校科研团队人力资源管理质量的问题。     

胰腺癌的CT诊断

胰腺癌(Pancreatic carcinoma)是胰腺最常见的肿瘤。据美国最新统计，胰腺癌已上升为仅次于肺癌、结直肠癌和乳腺癌的第四位恶性肿瘤。胰腺癌多发生于40岁～70岁的中老年人。随着影像学的发展，胰腺癌的诊断准确率得到很大提高。尤其是螺旋CT的应用，冈其无创伤、扫描速度快、分辨力高等优点，是目前最现想的检查方法。     

骨质疏松症危险评价工具研究进展与效果评价

骨质疏松症（osteoporosis，OP）是全球面临的主要公共健康问题之一。目前全世界大约有2亿人患骨质疏松症，其发病率已跃居世界各种常见病的第7位。60—70岁的妇女约有1／3患有OP，80岁以上的妇女2／3患有OP。OP的最主要后果是导致骨折，给社会、医疗卫生服务系统、家庭与个人带来沉重经济负担。1990年全世界髋部骨折约170万，到2050年将增加到630万例，这种增加将大部分发生在亚洲。随着我国老年人口的增加，患有OP的人数也在逐步增加。据调查，北京、上海、南京等地60岁以上人群OP患病率，女性为40％-50％，男性约为20％。我国人口基数最大，老龄人群增加速度最快，决定了OP及其严重后果骨折，在我国已构成一个越来越严重的公共健康问题。     

流式细胞术在白血病免疫分型中的应用

目的探讨流式细胞术CD45/SSC设门在急性白血病免疫分型中的应用。方法分别采用CD45/SSC、FSC/SSC两种设门方法对100例AL患者在确定原始细胞群和免疫分型方面进行比较。结论流式细胞术CD45/SSC设门,容易将原始/幼稚细胞与正常成熟细胞群区分开,使白血病分型结果更准确、可靠。