Ad-vcam-1-gfp重组腺病毒转染人脐血源基质细胞的实验研究

本研究探讨血管细胞黏附分子（vcam-1）修饰的人脐血源基质细胞（human umbilical cord blood derived strom cells，CBDSC）在造血调控中的作用。采用DNA重组技术，将目的基因vcam-1克隆至含有报告基因gfp的穿梭质粒；在BJ5183细胞中与pAdeasy—1质粒进行同源重组，产生重组腺病毒载体转染人脐血源基质细胞并进行鉴定。结果表明：vcam-1基因与pAdTrack—CMV载体成功连接，经NotⅠ／XhoⅠ双酶切后电泳可见2个大小约为9kb和2kb左右条带，经PCR法扩增后电泳可见1个600bp左右条带，证明pAdTrack—CMV—vcam-1重组质粒构建成功。pAdTrack—CMV—vcam-1质粒与pAdeasy—1质粒同源重组后，产物经PACⅠ酶切后电泳可观察到2个大小约为31kb、4kb左右条带，与预期结果相符。腺病毒载体转染人脐血源基质细胞后免疫化学、RT—PCR、荧光显微镜等方法均检测到目的基因vcam-1的表达。结论：构建ad—vcam-1-gfP重组腺病毒载体可成功转染人脐血源基质细胞并使其vcam-1表达增高。     

DC-CIK细胞输注治疗急性髓细胞白血病50例分析

目的观察自体外周血移植联合自身白血病细胞冻融抗原负载的树突状细胞-细胞因子诱导的杀伤细胞(DC-CIK)细胞输注治疗急性髓细胞白血病的安全性和临床疗效。方法 50例初发急性髓细胞白血病患者抽取未缓解的骨髓细胞制备自身白血病细胞冻融抗原,在自体外周血干细胞采集时留取部分单个核细胞培养DC-CIK细胞,利用制备好的白血病冻融抗原共培养激活扩增DC-CIK细胞。待患者自体外周血造血干细胞移植后30～60d输注自身白血病细胞冻融抗原负载的DC-CIK细胞,每例每疗程回输细胞总数大于7×109,同时给予白细胞介素-2(IL-2)200万单位皮下注射,每天1次,连续10d皮下注射。观察患者接受细胞输注治疗的安全性及临床疗效,并与既往接受自体外周血移植但未输注DC-CIK细胞治疗的52例急性髓细胞白血病患者在临床疗效方面进行比较分析。结果接受自身白血病细胞冻融抗原负载的DC-CIK细胞输注治疗的50例患者中,4例在DC-CIK细胞输注过程中出现一过性畏寒发热反应,但最高体温均低于39℃(37.8～38.5℃),经物理降温后恢复正常。其他患者均未出现异常不适反应。患者接受DC-CIK治疗结束后随访6～24个月,总体生存率(OS)、无病生存率(DFS)均高于同期未输注DC-CIK细胞治疗的对照组患者,其中随访24个月时OS、DFS均显著高于未输注DC-CIK细胞治疗的对照组患者(P<0.05)。结论对急性髓细胞白血病患者采用自体外周血移植联合自身白血病细胞冻融抗原负载的DC-CIK细胞输注治疗不良反应小,有助于清除移植后微小残留病和提高患者生存率,提示该治疗方法对急性髓细胞白血病具有良好的治疗应用前景。     

自体外周血干细胞移植治疗血液恶性肿瘤231例临床观察

目的观察自体外周血干细胞移植(APBSCT)治疗血液恶性肿瘤的疗效。方法2001年3月至2007年2月对第三军医大学新桥医院231例血液恶性肿瘤患者施行APBSCT,其中急性淋巴细胞白血病(ALL)45例,急性髓性白血病(AML)34例,非霍奇金淋巴瘤(NHL)100例,霍奇金淋巴瘤(HD)31例,多发性骨髓瘤(MM)21例,观察临床疗效和并发症。结果除1例ALL外,230例患者移植后造血功能均快速重建。ALL首次完全缓解(CR1)28例患者中无病存活(DFS)13例,带病存活4例,死亡11例;ALL二次缓解(CR2)17例患者中DFS3例,带病存活4例,死亡10例。AMLCR120例患者中DFS11例,带病存活3例,死亡6例;AMLCR214例患者中DFS6例,带病存活2例,死亡6例。NHLCR159例患者中DFS43例,带病存活7例,死亡9例;NHLCR230例患者中DFS18例,带病存活5例,死亡7例;NHL未缓解(NR)11例患者中DFS2例,带病存活4例,死亡5例。HDCR110例患者中DFS10例;HD部分缓解(PR)15例患者中DFS12例,带病存活3例;HD疾病复发(RE)6例患者中DFS3例,带病存活2例,死亡1例。MM21例患者中DFS7例,带病存活6例,死亡8例。结论APBSCT是一种安全有效的血液肿瘤治疗方法。     

大剂量化疗自体外周血干细胞移植生物治疗序贯疗法对67例非霍奇金淋巴瘤的疗效观察

目的评价大剂量化疗、自体外周血干细胞移植、生物治疗序贯疗法对非霍奇金淋巴瘤的疗效。方法2003年6月至2007年3月在第三军医大学新桥医院对67例中、高度恶性非霍奇金淋巴瘤(NHL)患者采用大剂量化疗、自体外周血干细胞移植、白介素-2(IL-2)生物治疗序贯治疗,观察其治疗效果和相关并发症。结果67例患者中,41例完全缓解期患者(NHL-CR),经上述序贯治疗,36例持续CR(87.8%),5例复发(RE,12.2%),其中1例死亡(2.4%);26例部分缓解患者(NHL-PR),达CR15例(57.7%),RE11例(42.3%),其中死亡5例(19.2%)。结论该序贯疗法治疗非霍奇金淋巴瘤安全有效,治疗前达到CR患者疗效更好。     

急性淋巴细胞白血病自体外周血造血干细胞移植术后髓外复发伴左侧臂丛神经损伤1例

患者,男,25岁。于2005年1月无明显诱因出现咳嗽、无咳血,吞咽时感胸痛,同年3月患者出现呼吸困难,胸闷,心慌,左侧胸部胀痛,院外骨髓穿刺检查诊断为“急性淋巴细胞白血病”,予抽胸水后感左侧胸部胀痛症状缓解,但仍有呼吸困难,咳嗽,咳白色泡沫痰,遂到我科治疗。骨髓细胞形态学提示     

自体外周血干细胞移植治疗血液肿瘤206例观察

目的:观察自体外周血干细胞移植(APBSCT)治疗血液恶性肿瘤临床疗效。方法:自2001年3月—2006年12月对206例血液肿瘤患者施行APBSCT,其中急性淋巴细胞白血病(ALL)40例,急性髓细胞白血病(AML)29例,非何杰金淋巴瘤(NHL)95例,何杰金淋巴瘤(HD)26例,多发性骨髓瘤(MM)16例,观察临床疗效和并发症。结果:除1例ALL外,205例患者移植后造血功能均快速重建。急性淋巴细胞白血病首次完全缓解(ALL-CR1)25例,其中无病存活17例,带病存活2例,死亡6例,急性淋巴细胞白血病再次完全缓解(ALL-CR2)15例,其中无病存活3例,带病存活3例,死亡9例;急性髓细胞白血病首次完全缓解(AML-CR1)17,其中无病存活10例,带病存活2例,死亡5例,急性髓细胞白血病再次完全缓解(AML-CR2)12例,其中无病存活5例,带病存活1例,死亡6例;非何杰金淋巴瘤首次缓解(NHL-CR1)57例,其中无病存活42例,带病存活6例,死亡9例,非何杰金淋巴瘤再次缓解(NHL-CR2)28例,其中无病存活18例,带病存活4例,死亡6例,非何杰金淋巴瘤未缓解(NHL-NR)10例,其中无病存活2例,带病存活3例,死亡5例;何杰金淋巴瘤首次缓解(HD-CR1)8例,其中无病存活8例;何杰金淋巴瘤部分缓解(HD-PR)13例,其中无病存活11例,带病存活2例;RE5例,其中无病存活3例,带病存活1例,死亡1例;MM16例,其中无病存活5例,带病存活4例,死亡7例。结论:APBSCT是一种治疗血液肿瘤安全有效的方法。     

Co^60γ辐照对裸鼠血像及造血微环境功能影响的动态观察

目的探索建立供移植实验使用的裸鼠造血微环境损伤动物模型。方法分别用3．5、5．0、6．5、8．0Gy4个Co^60γ辐照裸鼠，检测经过辐照后各组裸鼠1、3、5、7、14、21d血像变化，检测辐照后1、7、14、21d裸鼠骨髓基质CFU-F形成情况并用流式细胞仪检测辐照后1、7、14、21d骨髓基质细胞血管内皮细胞黏附分子-1（VCAM-1）的表达。结果8．0Gy辐照剂量裸鼠死亡率100％；3．5、5．0、6．5Gy辐照剂量组裸鼠的造血损伤均能在辐照后21d之内自我恢复；6．5Gy组骨髓CFU—F于移植7（22．00±6．00）、14d（33．00±6．00）后较3．5、5．0Gy组均显著降低（P〈0．01），VCAM-1表达于7（21．67±7．45）、14（22．33±9．07）、21d（23．33±4．51）较对照组显著降低（P〈0．01），较3．5Gy组差异有统计学意义（P〈0.05），21d（23．33±4．51）较5．0Gy组（34．00±4．36）差异有统计学意义（P〈0．05）。结论6．5Gy是裸鼠造血微环境损伤实验动物模型的适宜辐照剂量。     

大剂量化疗、自体外周血造血干细胞移植、长间歇维持化疗序贯治疗成人急性淋巴细胞白血病疗效观察

急性淋巴细胞白血病（ALL）是一种常见的血液系统恶性肿瘤，其治疗包括常规化疗和造血干细胞移植（HSCT）。常规化疗对成人ALL效果较差，据报道其长期生存率只有20％～30％，而且要进行长期维持治疗。2001年3月至2003年8月，我们对我院14例初次诱导治疗缓解的成人ALL患者进行连续3个周期大剂量甲氨蝶呤（Hi—MTX）治疗，之后行自体外周血造血干细胞移植（auto—PBSCT），移植后长间歇常规剂量化疗维持2年，取得了较好的治疗效果。