人重组钙依赖性磷脂结合蛋白V在大肠杆菌中的高效表达、纯化及细胞凋亡检测

目的：为细胞凋亡研究提供快速可靠的实验方法。方法：利用RT－PCR技术从人外周血单核细胞系U937 cDNA文库中扩增出编码钙依赖性磷脂结合蛋白V（Annexin V) cDNA,并克隆到大肠杆菌表达载体中,在大肠杆菌中表达含凝血酶识别序列的MS2 Annexin V融合蛋白。表达产物经凝血酶消化,可除去MS2细菌蛋白,再经离子交换层板纯化,可得成熟的Annexin V纯品,FITC标记后的Annexin V可用于细胞凋亡的检测。结果：在大肠杆菌表达的人重组Annexin V占菌体蛋白的56％,经纯化获得99％纯度的非融合型Annexin V,FITC标亡的Annexin V能有效地检测凋亡细胞。结论：成功地建立了批量获取Annexin V的技术路线,为推广高效检测凋亡技术提供了基础。     

抑制性底物杂交(SSH)技术研究BXSB小鼠的差异表达基因

目的：利用抑制性底物杂交技术（Ｓｕｐｐｒｅｓｓｉｏｎ ｓｕｂｔｒａｃｔｉｖｅ ｈｙｂｒｉｄｉｚａｔｉｏｎ，ＳＳＨ），以ＢＸＳＢ狼疮小鼠为模型，研究系统性红斑狼（ＳＬＥ）发病相关基因。方法：分离ＢＸＳＢ和Ｃ５７－ＢＬ－６小鼠骨髓细胞，ｍＲＮＡ，反转录构建ｃＤＮＡ文库，利用技术研究ＢＸＳＢ小鼠差异表达基因。结果：获得了１２个阳性克隆，其中有３个克隆编码ＴＣＲ、ＭＨＣⅡ类分子及逆转录病毒基因表达产物，均     

人重组IL－8在小鼠骨髓瘤细胞的表达和鉴定

人重组ＩＬ－８在小鼠骨髓瘤细胞的表达和鉴定北京医科大学免疫学系周宝宏，马大龙，袁勇，宋泉声，狄春辉，张颖妹ＩＬ－８是一种重要的细胞因子，属于趋化素（Ｃｈｅｍｏｋｉｎｅ）家族，可趋化粒细胞和Ｔ细胞，促进炎症反应。有报道局部注射人重组ＩＬ－８可促进肿瘤浸...     

乙型肝炎表面抗原″a″决定簇在大肠杆菌中的表达及鉴定

目的利用大肠杆菌系统表达乙型肝炎病毒表面抗原″ａ″决定簇。方法和结果采用ＰＣＲ技术，以ＨＢＶａｙｗ２亚型为模板，扩增ＨＢｓＡｇ″ａ″决定簇（１２３－１４７ａａ）基因片段（８５ｂｐ），经ＨｉｎｄⅢ酶切后，克隆到质粒载体ＰＭＴ－ｈＩＬ３中，成功构建了ＰＭＴ－ａ重组质粒。结论经４２℃诱导表达，表达产物占菌体总蛋白２８％，分子量１６０００，具有″ａ″决定簇抗原性。     

小鼠胸腺组织表达造血干细胞因子的mRNA

造血干细胞因子(Stem cell Factor,SCF)是1990年发现的一种细胞因子,又叫肥大细胞生长因子(MGF)或C—Kit的配体。重组可溶SCF能与多种细胞因子协同作用,刺激髓样和淋巴样造血祖细胞繁殖。Lyman和William发现外源性小     

腺病毒和腺伴随病毒基因元件提高白细胞介素-6在真核细胞中的表达效率

目的:构建高效真核表达载体以提高细胞因子在真核细胞中的表达效率.方法:利用基因克隆技术构建了两个新的白细胞介素-6(IL-6)真核表达载体pAdCIIL-6和P335ciil-6.将它们瞬时转染COS-7细胞后,利用IL-6依赖株7TD1对上清中的IL-6进行检测.结果:两种新建载体分别能提高IL-6在真核细胞中的表达效率5.5和3.4倍.结论:腺病毒的病毒相关Ⅰ和ⅡRNA(virus-associated Ⅰand ⅡRNA, VAⅠand VAⅡ)和腺伴随病毒(adeno associated virus, AAV) 的倒转末端重复序列(inverted terminal repeat, ITR)能提高细胞因子在真核细胞中的表达.     

人IL—1受体拮抗剂研究进展

白细胞介素－１（ＩＬ－１）受体拮抗剂是由单核核巨噬细胞等分泌的小分子蛋白质，通过特异地与白细胞介素－１受体结合阻粘ＩＬ－１的生物活性，在治疗败血性休克，ＡＭＬ，ＣＭＬ，移植物抗宿主反应，炎症，发热等疾病中有显著疗效，是一种很有发展前景的新型生物应签调节剂。     

白细胞介素-2-乙肝病毒前S抗原融合蛋白在真核细胞中的分泌表达

为了协同人白细胞介素-2（IL－2）与乙型肝炎（乙肝）病毒（HBV）前S抗原（preSAg）的生物学功能，探索能打破持续性感染者对HBV表面抗原（HBsAg）的免疫耐受，诱导机体对HB－sAg和preSAg产生体液和细胞免疫应答的基因免疫与治疗药物，用基因重组方法构建了IL－2和HBV完整preSAg的真核表达嵌合基因及表达质粒pCWIIP。pCWIIP转染的Cos－7细胞能分泌表达IL－2－preS融合蛋白，其表达效率与pCIIL－2转染的细胞表达IL－2一致，细胞上清中IL－2活性单位大于3×103u／ml，并用酶免疫实验法（EIA）检测了preSAg，而其细胞裂解液中IL－2活性很低，preSAg未检测到。本文结果说明preSAg2～19位氨基酸序列的滞留效应是可以克服的。该发现不仅为构建带完整preSAg的新型乙肝疫苗和特异性免疫治疗剂提供了理论与实验依据，而且对蛋白质分泌表达调控的研究也有一定意义。     

人心肌肌钙蛋白Ⅰ在大肠杆菌中的高效表达及纯化

目的:获得高纯度的人心肌肌钙重组蛋白,为临床上检测心肌损伤及预后提供新的诊断方法.方法:利用RT-PCR方法从人心肌细胞的cDNA文库中扩增编码人心肌肌钙蛋白Ⅰ的cDNA,并克隆到大肠杆菌表达载体中,表达含凝血酶识别序列的MS2-cTnI 融合蛋白,纯化后用Western-blot进行鉴定.结果:从人心肌cDNA文库中扩增出编码人cTnI的cDNA,克隆并在大肠杆菌中表达,表达量达30%以上.经离子交换柱纯化,最终产物纯度在95%以上.可与其特异性单克隆抗体反应.结论:cTnI能够在大肠杆菌中高效表达和纯化,为今后检测心血管疾病提供了一种高效快捷的方法.     

人IL-1受体拮抗剂研究进展

白细胞介素-1(IL-1)受体拮抗剂是由单核巨噬细胞等分泌的小?分子蛋白质,通过特异地与白细胞介素-1受体结合阻断IL-1的生物活性,在治疗败血性休克、AML、CML、移植物抗宿主反应、炎症、发热等疾病中有显著疗效,是一种很有发展前景的新型生物应答调节剂.