抗人CD20纳米抗体的筛选、表达及特性分析

目的筛选出抗人CD20纳米抗体序列,并获得具有高亲和力与特异性的抗CD20-人IgG Fc纳米抗体。方法利用天然噬菌体纳米抗体库,以生物素化的CD20抗原为靶标进行4轮液相亲和筛选,采用ELISA鉴定阳性克隆;将筛选到的阳性克隆基因序列与人IgG Fc片段偶联,构建到原核表达载体pCZN1中,并转化至大肠杆菌Arctic Express,经异丙基-β-D-硫代半乳糖苷(IPTG)低温诱导重组蛋白的表达,利用Ni柱进行亲和纯化;ELISA和Western blot法鉴定纯化产物。结果筛选得到了一条重复性高且亲水性好的CD20纳米抗体序列,纯化获得了纯度高达85%以上的抗CD20-人IgG Fc纳米抗体。ELISA结果显示其与CD20抗原具有较高亲和力, Western blot结果表明该抗体能特异性识别CD20抗原。结论利用天然噬菌体纳米抗体库成功获得了抗CD20纳米抗体序列,经纯化的抗CD20-人IgG Fc纳米抗体具有高亲和力与特异性。     

胎猪胰腺干细胞扩增及诱导

目的 寻找胰腺干细胞扩增方法,为研究糖尿病的细胞治疗提供种子细胞.方法无菌采集胎猪胰腺,经胰酶消化,以含10%血清的RPMI1640培养基培养.细胞长满皿底85%时,用胰酶消化传代,传代5～6次后细胞活力下降,细胞大量死亡漂浮,留下少数贴壁的小圆细胞.将培养基中的血清浓度提高到15%,贴壁的小圆细胞能快速增殖并形成细胞克隆,4～6d便可融汇成单层.采用免疫组织化学方法对所获得的的细胞进行胰腺干细胞特征检测.结果经上述方法处理的细胞具有旺盛的增殖能力,可以连续传代,目前已传至64代.采用免疫组织化学检测细胞表达胰腺干细胞特征性标志物,胰肠同源域因子1(PDX-1)、葡萄糖转运子2(GLUT-2)、巢蛋白、波形蛋白;经诱导后细胞表达胰腺内分泌细胞的标志为胰高血糖素、胰岛素、生长抑索、胰多肽.结论通过该方法可以获得大规模扩增的胰腺干细胞,该细胞在体外诱导可分化形成胰腺内分泌部4种主要细胞.     

IL-6基因结构和功能生物信息学预测

目的以白细胞介素(IL)-6为研究对象,对其基因结构和功能进行生物信息学分析。方法采用生物信息学软件对基因编码的蛋白质结构、理化性质、信号肽、跨膜结构、亚细胞定位、二级结构及高级结构进行生物信息学分析。结果 IL-6为稳定亲水性跨膜蛋白,定位于细胞外,二级结构以α-螺旋和无规则卷曲为主,有2个Ser和2个Thr可成为蛋白激酶磷酸化位点。结论分析预测IL-6,在研究其参与高血压、炎性反应等方面有重要意义。     

前列腺增生大鼠模型的建立

目的:探讨丙酸睾酮对去势和不去势SD大鼠前列腺增生的影响.方法:8周龄雄性SD大鼠25只,随机分为正常对照组(n=5)、不去势模型组(n=15)及去势模型组(n=5);不去势模型组按注射丙酸睾酮剂量又分为不去势低剂量组、中剂量组和高剂量组,注射剂量分别为1.25,2.5,5 mg/(kg·d);去势模型组无菌切除双侧睾丸1周后注射丙酸睾酮5 mg/(kg·d);去势模型组和不去势模型组均连续注射丙酸睾酮4周,于末次给药后分离大鼠前列腺,检测其湿重、体积和脏器系数;组织切片HE染色,光镜下观察前列腺组织变化.结果:不去势小剂量组和中剂量组的前列腺湿重、体积和脏器系数增加,与正常对照组相比差异有统计学意义(P＜0.05),不去势高剂量组和去势组的前列腺体积和脏器系数与正常对照组相比,差异均具有统计学意义(P＜0.01);去势组和不去势组大鼠前列腺体积和腺腔大小均较正常对照组增大,且不去势组前列腺腺体与周围组织界限更清楚,腺腔内乳头状突起也比去势组更加明显.结论:使用不去势、皮下注射5 mg/(kg·d)丙酸睾酮的方法可有效的建立前列腺增生大鼠模型.     

GSK3β抑制剂氯化锂对大鼠前列腺增生的影响

目的：探讨 GSK3β抑制剂氯化锂在大鼠前列腺增生治疗中的作用。方法通过皮下注射丙酸睾酮的方法复制前列腺增生模型,建模大鼠随机分成3组：氯化锂高剂量治疗组、低剂量治疗组和模型对照组,另设正常对照组。高剂量和低剂量治疗组分别以20mg／（ kg· d）、10mg （kg· d）的剂量腹腔注射氯化锂,连续给药30d。称量各组大鼠前列腺组织湿重、体积,计算前列腺指数;酶联免疫法测定血清中睾酮（T）、雌激素（E2）和性激素结合球蛋白（SHBG）含量。结果氯化锂治疗组的前列腺湿重、体积和脏器系数较模型对照组显著降低（P＜0．01）;氯化锂治疗组的T、E2和SHBG水平也较模型对照组降低（P＜0．05）。结论 GSK3β抑制剂氯化锂对前列腺增生具有一定抑制作用。     

细粒棘球蚴 GST 抗原表位的生物信息学预测?

目的：应用生物信息软件分析细粒棘球蚴谷胱甘肽 S-转移酶(EgGST)的蛋白二级结构并预测 B 淋巴细胞表位和 T淋巴细胞表位,为后续表位疫苗的设计研究提供基本的数据和资料。方法采用 DNAstar 软件、ProPred MHC Class-Ⅱ Binding Peptide Prediction Server 和 Biosun 软件对 EgGST 的 B 淋巴细胞表位和 T 淋巴细胞表位进行预测。结果预测 EgGST 存在8个 B 淋巴细胞表位区域和7个 T 淋巴细胞表位。结论分析预测的 EgGST 抗原表位将对后续的表位疫苗研究具有重要意义。     

临床血液检验双语教学教材建设探讨

随着世界各国医学的发展和国际交往的增加,医学检验双语教学重要性日益凸显。根据目前双语教学的状况和问题,了解了双语教材一般要求,分析了双语教材的现状,从而提出本土化双语教材,并介绍自编教材的可行性及具体方法,体现了努力探索编撰与之适应的双语教学教材的意义,以期待提高教学效果,培养高质量的检验医学人才。     

宁夏地区高血压肾损害患者肿瘤坏死因子-α-308基因多态性及其与贝那普利治疗反应的相关性研究

目的 阐明肿瘤坏死因子-α(TNF-α)-308基因多态性与宁夏地区高血压肾损害之间,及其与贝那普利治疗反应的相关性.方法 选取284例初诊高血压病患者,通过检测尿蛋白排泄率明确高血压肾损害,同时选取160例健康体检者作为正常血压对照组.所有入选对象留取血浆标本,检测TNF-α水平及其TNF-α-308基因多态性.再以贝那普利作为降压药物之一对高血压肾损害患者进行干预,观察TNF-α-308不同基因型对贝那普利的治疗反应,并进行比较分析.结果 单纯高血压病患者的TNF-α-308以GA基因型为多见,其次为GG、AA,G/A等位基因频率分别为53％/47％.高血压肾损害患者的TNF-α-308以GG基因型最为多见,其次为GA和AA,G/A等位基因频率分别为70％/30％,基因型及G/A等位基因频率比较差异有统计学意义(P＜0.05).TNF-α-308的AA基因型贝那普利治疗前后尿蛋白排泄率和TNF-α的改变幅度最大,其次是GA和GG基因型,3组间比较差异有统计学意义(P＜0.05).结论 TNF-α-308基因与高血压肾损害及其对贝那普利治疗的反应相关.     

枸杞总黄酮提取物对2型糖尿病大鼠血糖、血脂的影响

目的：研究枸杞总黄酮提取物（TFLB）对链脲佐菌素（STZ）诱导建立的糖尿病（DM）大鼠损伤模型的保护作用及其可能的分子机制。方法：采用STZ诱导建立DM大鼠损伤模型,实验分为正常对照组、DM模型组和TFLB干预组（60,90,120 mg·mL^-1）。正常对照组及DM模型组大鼠每天每只予以等量生理盐水灌胃,干预组大鼠以不同浓度TFLB灌胃4周。灌胃满4周后,以尾静脉采血测空腹血糖,胸腔采血测定血脂,摘取胰腺组织做HE染色和免疫组化。结果：与正常对照组相比较,DM模型组大鼠血糖、血脂显著升高（P<0.05,P<0.01）;胰岛形态皱缩,体积变小,状态不规则,胰岛数量及岛内分泌细胞明显减少,且细胞稀疏不均排列紊乱。与DM模型组相比,TFLB的干预可以延缓、延迟血糖升高的进程,对血脂有明显降低趋势,具有显著性差异（P<0.05,P<0.01）,随TFLB剂量的升高,大鼠胰岛数量及岛内分泌细胞数有所增多,细胞排列相对均匀规整,胰岛结构、形态基本趋于正常,细胞空泡变性相对较少。结论：TFLB可以延缓血糖升高速度,调节血脂代谢的紊乱,进而推迟DM病程的进展,能明显保护DM大鼠的胰岛功能,改善大鼠的胰岛素抵抗。