β1-肾上腺素受体自身抗体对大鼠B淋巴细胞增殖的影响

目的 探讨β1-肾上腺素受体自身抗体(β1-AA)对大鼠B淋巴细胞增殖的影响.方法 本研究以主动免疫大鼠的方法获得β1-AA阳性的IgGs (pIgGs);免疫磁珠分选技术获得大鼠B淋巴细胞;CCK8法检测B淋巴细胞的增殖能力.结果 β1-AA(0.1 μmol/L pIgGs)促进LPS刺激的大鼠B淋巴细胞增殖(A值:0.739±0.036 vs 0.533±0.032,P＜0.05),且有浓度依赖性的趋势;该效应可以分别被β1/β2-肾上腺素受体(β1/β2-AR)阻断剂部分阻断,被两种阻断剂共同作用完全阻断;pIgGs对静息的大鼠B淋巴细胞无增殖作用.结论 β1-AA可能通过B淋巴细胞表面的β1-AR和/或β2-AR信号通路促进激活的B淋巴细胞增殖.     

团队意识在医学机能实验教学中的意义

团队是指有共同目标的不同人结合在一起的组织。团队中队员之间的通力协作是完成很多事件的关键因素。医学机能实验是一门独立的系统研究组织器官的功能代谢变化的实验学课程,属于融合性学科,该课程教学任务的高质量完成离不开教师与学生的团队意识。本文作者结合当代医学生的特点,探讨了在医学机能实验教学中培养团队意识的重要意义及措施。     

扩张型心肌病患者血清中的β1-肾上腺素受体自身抗体通过β1-肾上腺素受体抑制CD4＋T淋巴细胞的增殖作用

目的探讨扩张型心肌病患者血清中针对β1-肾上腺素受体细胞外第二环（ the second extracellular loop of β1-adrenoceptor ,β1-AR-ECⅡ）功能表位肽段的自身抗体（β1-AA）对大鼠CD4＋T淋巴细胞增殖能力的影响。方法采用亲和柱纯化试剂盒提纯扩张型心肌病（ DCM）患者血清中的β1-AA;利用免疫磁珠分选技术分离出大鼠外周血单核细胞中的CD4＋T淋巴细胞,流式细胞技术检测CD4＋T细胞的阳性率;采用CCK-8试剂盒检测细胞增殖能力;流式细胞术检测CD4＋/CD8＋T淋巴细胞的比值。结果经免疫磁珠分选后CD4＋T淋巴细胞的阳性率为97．7％;β1-AA可浓度依赖性抑制CD3/CD28刺激的CD4＋T淋巴细胞增殖;β1-AA被β1-AR-ECⅡ中和后,该效应消失;β1-AR特异性阻断剂美托洛尔可完全阻断该抑制效应;β1-AA作用于总T淋巴细胞24 h后,CD4＋/CD8＋T淋巴细胞比值没有发生明显改变。结论从DCM患者血清中提取的β1-AA可能通过CD4＋T淋巴细胞表面的β1-AR途径,导致该细胞增殖能力下降。提示β1-AA可能会直接减少T淋巴细胞的数量,使得T淋巴细胞功能下降,进而导致免疫系统紊乱,参与DCM的发生发展。     

过氧亚硝基阴离子分解催化剂对衰老大鼠血管舒张功能的保护作用

目的利用过氧亚硝基阴离子（ONOO^-）分解催化剂FeTMPyP探讨衰老大鼠血管舒张功能障碍的可能机制。方法选取雄性SD大鼠,随机分为成年组（3-4月,n=8）、衰老组（18-20月,n=8）及给予FeTMPyP的衰老组（n=6）;制备离体胸主动脉环,观察血管舒张功能;采用免疫组织化学法和Westernblot法测定血管组织中可代表ONOO^-生成的标记物3-硝基酪氨酸（3-NT）的表达。结果与成年组大鼠比较,衰老组大鼠胸主动脉环对10^-9-10^-5mol／L累积浓度的内皮依赖性舒张剂乙酰胆碱（ACh）的最大舒张程度显著下降[（29．74％±8．28％）vs（69．52％±5．51％）,P〈0．001];对10^-9-10^-5mol/L累积浓度的非内皮依赖性舒张剂硝普钠（SNP）的最大舒张程度也显著下降[（92．01％±3．19％）vs（99．26％±1．33％）,P〈0．001]。与成年组大鼠比较,衰老组大鼠血管组织中3-NT蛋白表达增加（P〈0．05）。给予FeTMPyP后,衰老大鼠血管组织中3-NT蛋白表达下降（P〈0．01）;抑制ONOO^-的生成后,衰老大鼠胸主动脉环对累积浓度ACh的最大舒张程度显著升高[（65．96％±11．36％）vs（29．74％±8．28％）,P〈0．001],对累积浓度SNP的最大舒张程度也显著升高[（98．15％±2．79％）vs（92．01％±3．19％）,P〈0．001]。结论FeTMPyP改善了衰老大鼠血管舒张功能,提示ONOO^-可能在衰老大鼠血管功能障碍中起重要作用。     

衰老心肌中Omi/HtrA2表达增加可促进心肌细胞自噬

目的探讨衰老心肌中增加的Omi／HtrA2在心肌细胞自噬中的作用。方法用D-半乳糖干预胎鼠心肌细胞系H9c2建立衰老细胞模型,B-半乳糖苷酶染色观察细胞的衰老情况,cck8试剂盒检测细胞存活率,并以分析细胞乳酸脱氢酶（Lactic Dehydrogenase,LDH）水平反映其活性;给予Omi／HtrA2特异性抑制剂ucf_101降低Omi／HtrA2活性,构建稳转Omi／HtrA2的H9c2细胞株过表达Omi／HtrA2;采用westernblot法测定心肌细胞中Omi／HtrA2、beclinl及LC3．II蛋白的表达。结果（1）与H9c2心肌细胞相比,D．半乳糖诱导的H9c2心肌细胞内B-半乳糖苷酶染色阳性率显著升高[（87．7±3．6％）VS（18．3±2_8％）,P〈0．01];cck8结果显示,两组之间无显著性差异（P〉0．05）,但D-半乳糖诱导的H9c2心肌细胞中LDH活性明显升高（7．07±0．65w5．93±0．34,P〈0．01o（2）与H9c2细胞相比,D-半乳糖诱导的H9c24心肌细胞中Omi／HtrA2蛋白表达升高（P〈0．05）,而beclinl表达下降（P〈0．01）;给予ucf-101后,衰老细胞中Omi／HtrA2蛋白表达明显下降（P〈0．05）,而beclinl表达则进一步降低（P〈0．01）。（3）与H9c2细胞相比,过表达Omi／HtrA2的H9c2心肌细胞Omi／HtrA2蛋白表达增高,LC3-Ⅱ蛋白表达也增高（P〈0．05）;给予过表达Omi／HtrA2的H9c2心肌细胞ucf-101后,LC3-Ⅱ表达下降（P〈0．05o结论衰老心肌细胞中Omi／HtrA2的表达增加可促进心肌细胞自噬。     

β_1-肾上腺素受体自身抗体通过促进肝细胞凋亡参与小鼠肝损伤

目的探讨β_1-肾上腺素受体自身抗体(β_1-AA)对小鼠肝功能的影响。方法用杂交瘤细胞株融合的方法产生具有生物活性的β_1-AA;构建β_1-AA长期被动免疫小鼠模型;血清生化仪检测肝脏血清学指标变化;超声检测小鼠肝脏结构和功能的改变;Tunel染色、annexin V/PI染色和caspase 3活性检测肝细胞凋亡水平。结果具有生物活性的β_1-AA和被动免疫模型小鼠建立成功;在被动免疫过程中,免疫组小鼠肝脏谷丙转氨酶ALT(62.00±0.01 vs37.00±0.02)和谷草转氨酶AST(290.00±0.05 vs 205.00±0.02)水平明显升高,白蛋白ALB显著下降(35.00±0.03vs 43.00±0.05);门静脉、肝静脉流速降低;β_1-AA长期存在诱导肝细胞凋亡水平增加(8.00%±0.02%vs 2.30%±0.03%,P0.05),β_1-肾上腺素受体特异性抑制剂metoprolol可以部分逆转此效应。结论β_1-AA可以通过β_1-肾上腺素受体致肝细胞凋亡,参与肝损伤的发生发展。     

衰老大鼠心肌组织中活性氮簇的改变及可能意义

目的测定衰老大鼠心肌组织凋亡程度,探讨及测定衰老大鼠心肌组织中活性氮簇的改变及其与心肌细胞凋亡的关系。方法分别选取雄性成年SD大鼠（4月龄-6月龄）和衰老SD大鼠（22月龄-24月龄）。采用Caspase-3活性测定法检测大鼠心肌组织中细胞凋亡发生情况,用Western-blot蛋白印记法检测大鼠心肌组织中血管舒张剂刺激的磷蛋白（VASP）和磷酸化VASP（pVASP）的表达水平;ELISA法检测心肌组织硝基酪氨酸含量。结果与成年大鼠相比,衰老大鼠的Caspase-3比活性显著增高（P〈0.01）,心肌组织pVASP水平明显降低（P〈0.01）,硝基酪氨酸明显升高（P〈0.05）,硝基酪氨酸含量与Caspase-3活性呈正相关。结论衰老大鼠心肌组织中一氧化氮生物利用度下降,生成大量毒性的过氧亚硝基,这可能是衰老心脏凋亡增加的原因之一。     

慢性间歇性低氧对心肌梗死急性期小鼠C1q肿瘤坏死因子相关蛋白9的表达及对心功能的影响

目的:评价慢性间歇性低氧(CIH)对心肌梗死急性期小鼠心肌组织中C1q肿瘤坏死因子相关蛋白9(CTRP9)的表达及心功能的影响。方法:将36只,雄性,C57BL/6野生型小鼠,随机分为常氧(NOR)组(n=18)和CIH组(n=18)。将CIH组小鼠放入氧气浓度在6%~21%之间循环的低氧舱内28 d,同时NOR组在常氧环境中饲养。28 d后两组小鼠均结扎左冠状动脉建立心肌梗死模型。于结扎后3 d(n=6)、7 d(n=6)和14 d(n=6)时利用多普勒超声评估小鼠左心室结构与功能,然后将其处死。在结扎后3 d、7d时分别用免疫印迹法及RT-PCR法检测心肌中CTRP9表达、ELISA法检测血浆中CTRP9浓度以及用MASSON染色比较各组心肌纤维化面积。结果:NOR组和CIH组小鼠在冠状动脉结扎后3、7及14 d时的左心室内径均逐渐增加(P<0.001),LVEF和缩短分数(FS)均逐渐降低(P<0.001)。在结扎后3 d时,与NOR组相比,CIH组小鼠心肌组织中CTRP9的表达和血浆中CTRP9浓度明显升高(P<0.05;P<0.01),纤维化面积明显减小(P<0.001),LVEF和FS显著高于NOR组(P<0.05)。结论:与NOR组相比,CIH干预可以使心肌梗死急性期小鼠的心肌组织中CTRP9的表达增加,心肌纤维化面积减小,心功能改善。CIH引起的缺氧预适应可能在心肌梗死急性期发挥保护作用。