碱性成纤维细胞生长因子对大鼠骨髓间质干细胞增殖的影响

[目的] 研究碱性成纤维细胞生长因子( bFGF)对大鼠骨髓基质干细胞( MSC)增殖的影响.[方法] 用α- MEM冲洗骨髓腔,收集骨髓细胞悬液,接种在塑料培养瓶中,经体外扩增、纯化,观察其生长特性,用免疫组织化学 SABC法检测波形蛋白和纤粘连蛋白的表达,并研究不同浓度 bFGF对 MSC生长曲线和克隆形成率的影响.[结果] 原代培养时形成由基质干细胞组成的细胞集落,细胞集落 14 d时接近融合,传代后细胞体积变大,约 5～ 7 d传代 1次;免疫组化显示 MSC呈波形蛋白阳性,而纤粘连蛋白阴性.浓度 10 ng/mL和 20 ng/mL bFGF组的 MSC的细胞数和克隆形成率比 5 ng/mL bFGF组和对照组(无 bFGF)明显增加,具有高度显著性( P< 0.01).[结论] bFGF可明显促进 MSC的增殖.     

川芎嗪诱导大鼠骨髓间质干细胞分化为神经元样细胞的研究

目的用川芎嗪(ligustrazin hydrochloride)在体外定向诱导SD青年鼠骨髓间质干细胞(mesenchymal stem cells，rMSCs)分化为神经元样细胞。方法用低糖DMEM冲洗骨髓腔，收集骨髓细胞悬液，接种在塑料培养瓶中。经体外扩增、纯化，选用第5代后的骨髓间质干细胞进行诱导分化。用10μg／LbFcF预诱导24h，更换成含川芎嗪的无血清培养基DMEM诱导间质干细胞分化为神经元样细胞。用免疫组织化学SABC法鉴定神经丝蛋白(NF—M)、神经元特异性烯醇化酶(NSE)、巢蛋白(nestin)、微管联合蛋白-2(MAP-2)、生长相关蛋白-43(GAP-43)、胶质纤维酸性蛋白(GFAP)的表达。结果第5代间质干细胞形态达到均一，呈梭形。用川芎嗪诱导15min到3h，间质干细胞胞体逐渐增大，并伸出细长突起形似神经元样细胞。免疫组织化学显示NF-M、NSE、nestin、MAP-2和GAP-43表达阳性，而GFAP阴性。对照组上述染色均为阴性。结论川芎嗪可诱导骨髓间质干细胞分化为神经元样细胞。     

探讨神经组织的讲授方法

<正>每年对学生讲授神经组织时,他们尚未学过神经解剖学.在这种条件下,如何使学生在较短时间内从大体结构→显微结构→超微结构,以至分子水平,清楚认识神经组织的结构及功能,乃是每位讲授教师的艰巨任务.为了改进这一项教学的效果,近几年我们对教学方法,进行了一些尝试,现介绍于下.1.建立局部与整体的关系神经组织组成神经系统,神经系统又分中枢神经系统和周围神经系统,利用图1作简单介绍,神经组织是由神经元及神经胶质细胞组成,神经元的胞体在中枢及神经节内,它们的突起则组成中枢神经系统内的神经通路和神经网络以及遍布全身的神经.这样大局明了之后,讲神经元分类、分布、形态和功     

脑啡肽与生长抑素在鸡视网膜无长突细胞共存的免疫组织化学研究

本文介绍用免疫组织化学的单标和双标技术研究脑啡肽(ENK)和生长抑素(SOM)在鸡视网膜无长突细胞的定位和共存。单标的实验结果表明,一些SOM免疫反应阳性无长突细胞的形态、胞体在内核层的位置及其突起在内网层的分支式样与某些ENK免疫反应阳性无长突细胞相似,虽然其突起在内网层的第3、4亚层形成的丛网不象ENK免疫反应阳性突起那样丛密,在内网层的第5亚层也未见SOM免疫阳性突起。双标的实验结果表明,一些无长突细胞显示ENK和SOM两种免疫阳性反应,而另一些无长突细胞分别只显示ENK或SOM阳性免疫反应。文中还对视网膜神经多肽间或与经典神经递质的共存进行了讨论。     

施万细胞对大鼠脊髓半横切后背核神经元存活及其表达NOS的影响

目的：探讨移植的施万细胞对大鼠脊髓半横切后背核神经元存活及其表达NOS的影响。方法：50只成年SD大鼠被分为实验组和对照组。在胸11脊髓段半横切后立即在损伤处移植入施万细胞。结果：脊髓半横切后，15d和25d对照组L1脊髓段损伤侧背核神经元的存活数均比未损伤侧的明显减少。存活的神经元胞体出现明显皱缩，有些神经元呈现NADPH－d阳性。15d和25d施万细胞组L1脊髓段损伤侧背核神经元的存活数则比同期对照组的明显增加，表达NOS的存活神经元数也随之增多。但存活的神经元胞体仍然是皱缩的。结论：移植的SCs可促进受损伤的背核神经元存活及其表达NOS，但不能阻止其胞体出现皱缩。     

ES细胞源表皮样干细胞与胶原海绵体外构建组织工程化皮肤

 【目的】 探讨以ES细胞源表皮样干细胞构建组织工程皮肤的方法，为构建新的组织工程皮肤奠定基础。【方法】 先把成纤维细胞放置于胶原海绵真皮支架内，体外培养2d，再放置ES细胞源表皮样干细胞，体外培养3d，观察其形态和进行免疫组化检测。【结果】 成纤维细胞与ES细胞源表皮样干细胞均在真皮支架内黏附，免疫组化表明ES细胞源表皮样干细胞仍呈Bl整合素强阳性和CK15、CK19阳性。【结论】 结果提示ES细胞源表皮样干细胞在体外构建的组织工程化皮肤内仍维持未分化状态。     

人垂体腺瘤细胞原代培养的纯化及其激素的表达与分泌

 【目的】探讨原代培养垂体腺瘤的细胞纯化方法及其激素表达与分泌的特点。【方法】采用三种原代培养方法对垂体腺瘤细胞进行培养，方法Ⅰ为目前常用的垂体瘤细胞培养方法，方法Ⅱ结合使用右旋颉氨酸（D-valineDMEMD-valine）培养液，方法Ⅲ采用反复贴壁法结合DMEMD-valine培养液培养。观察其细胞形态变化和生长特征，放射免疫法测定不同培养时间培养液中相应激素的水平。免疫组织化学染色法检测培养细胞生长激素（growthhormone，GH）、泌乳素（prolactin，PRL）的表达。【结果】3种方法均能成功培养出垂体腺瘤细胞，呈圆形或椭圆形，其纯度随培养时间的延长逐渐下降，培养第20天其平均纯度分别为40％，46％，96％。方法Ⅲ明显高于方法Ⅰ和方法Ⅱ，差异具有显著性意义（P〈0．01）；培养液中均含有相应激素。且3种方法的激素分泌量没有统计学差异（P〉0．05）；腺瘤细胞分别呈GH，PRL阳性表达，成纤维细胞表达Ⅰ型胶原。【结论】方法Ⅲ可得到纯度达95％以上的人垂体腺瘤细胞，纯化后的细胞可分别呈GH和PRL阳性表达并具有良好的激素分泌功能，为进一步研究人垂体腺瘤的发病机理、药物治疗和颅外移植等方面奠定了实验基础。     

真皮支架材料的组织相容性研究

目的 探讨不同真皮材料的体内组织相容性,筛选合适的真皮支架材料.方法 将胶原、硫酸软骨素、透明质酸和甲壳糖按一定比例制备成复合凝胶,将其同胶原海绵、明胶海绵3种真皮支架材料埋植入129小鼠皮下,术后3,7,10 d;2,3,4,5,6周取材,形态学观察材料在体内的反应、血管化进程和降解速度等,评价其组织相容性.结果 复合凝胶和胶原海绵体内引起轻微的炎症反应,以创伤性修复为特征,约4周降解.明胶海绵的组织反应以淋巴细胞和巨噬细胞浸润为主,降解周期约5周.结论 3种材料均无明显毒性,组织反应低,易于血管化,相容性好.     

三七总皂苷对成年地鼠视网膜节细胞存活的影响

【目的】探讨玻璃体注射三七总皂苷（tPNS）对视神经切断后视网膜节细胞（RGCs）存活的作用。【方法】用荧光素逆行示踪标记法和定量解剖学技术观察正常和经tPNS处理的金黄地鼠于视神经切断后5、7、14d时RGCs的密度。动物分为正常组、单纯切断视神经组（未注射组）、tPNS处理组和生理盐水对照组。【结果】正常RGCs平均密度为（1970±82）/mm^2;视神经切断后5、7、14 d时RGCs平均密度分别下降至（983±48）/mm^2、（788±44）/mm^2和（216±37）/mm^2;生理盐水对照组在各时间点RGCs平均密度与未注射组结果相似;tPNS处理组结果分别为（1363±56）/mm^2、（1169±70）/mm^2和（477±25）/mm^2,与未注射组和生理盐水对照组相比在各时间点上均存在显著性差异（P〈0.05）。【结论】玻璃体注射tPNS可提高成年地鼠视神经切断后RGCs的短期存活率。