抗日本血吸虫生殖功能分子SIEA26-28kDa单链抗体与EGFP的融合表达及靶向性研究

目的 体外观察抗日本血吸虫生殖功能分子SIEA26～28kDa单链抗体与日本血吸虫各阶段的靶向部位,探讨单链抗体在抗血吸虫病疫苗研究中的应用价值.方法 扩增增强型绿色荧光蛋白(EGFP)基因,克隆至PET32a/SIEA26～28kDa-scFv质粒,构建PET32a/EGFP-scFv质粒.转化至感受态E.coli BL21(DE3)中,并诱导表达单链抗体融合蛋白,分析单链抗体融合蛋白与SIEA26～28kDa的结合特异性.单链抗体融合蛋白与日本血吸虫成虫、虫卵切片孵育,荧光显微镜下观测GFP信号,确定特异性单链抗体的靶向性.结果 重组质粒PET32a/EGFP-scFv构建成功,Trx-EGFP-scFv融合蛋白高效表达,与SIEA26～28kDa特异性结合.GFP信号主要集中在未成熟卵卵胚,雌虫卵巢、卵黄腺及与生殖系统邻近的肠腔组织.结论 SIEA26～28kDa单链抗体与血吸虫未成熟卵胚胎及雌虫生殖系统具有较强的靶向性,具有潜在抗卵胚发育、抗雌虫生殖作用,为SIEA26～28kDa单链抗体在抗日本血吸虫病疫苗免疫靶向方面的研究奠定了基础.     

日本血吸虫SIEA26-28kDa的抗雌虫生殖免疫作用--HGPRT是否是主要的靶抗原

目的观察日本血吸虫SIEA26—28kDa抗原的抗雌虫生殖作用。方法用AcA柱层析纯化日本血吸虫早期胚卵中的SIEA和SIEA26—28kDa成分。并以此纯化产物免疫BALB／c小鼠。将小鼠分为三组，分别用SIEA、SIEA26—28kDa和免疫佐剂免疫动物，然后进行尾蚴攻击感染。46天后剖杀动物，冲虫，然后作虫荷测定及虫卵分类计数。结果SIEA26—28kDa免疫组雌虫子宫内减卵率为54．8％。与对照组比较有极显著性差异；该实验组动物肝脏和小肠组织内的虫卵数比对照组分别降低了48.07％和77.41％，且以成熟虫卵数的下降较为显著，分别降低了83．6％和93．3％；粪卵数的下降幅度最为显著，达87．26％。结论SIEA26—28kDa可作为一种抗卵胚发育及抗雌虫生殖的候选抗原分子。     

日本血吸虫DNA疫苗pcDNA3／SjSDISP对小鼠诱导自身免疫和免疫耐受的观察

目的观察日本血吸虫DNA疫苗pcDNA3／SjSDISP免疫小鼠后可否引起自身免疫性疾病和免疫耐受。方法采用ELISA的方法检测pcDNA3／sjsDISP免疫小鼠后,SjSDISP特异性抗体的效价及自身免疫性抗体（抗核抗体和抗dsDNA抗体）的产生情况,同时通过体重变化及主要脏器病理切片观察质粒DNA的毒性作用。结果以ELISA的方法检测小鼠产生的抗s7SDISP特异性抗体的效价为1：400,未检出自身免疫性抗体。实验组与对照组小鼠体重变化无明显差异,组织病理学观察未见异常变化。结论DNA疫苗pcDNA3／SSDISP对小鼠无诱导自身免疫性疾病和免疫耐受的迹象。     

黑胸大蠊若虫免疫兔血清对美洲大蠊若虫cDNA表达文库的筛选及克隆分析

目的从美洲大蠊若虫cDNA文库中筛选黑胸大蠊抗原相关基因,以期获得黑胸大蠊有潜在药用价值的蛋白质、多肽成分。方法用黑胸大蠊若虫免疫兔血清筛选美洲大蠊若虫cDNA文库,对阳性克隆进行PCR鉴定和序列测定,通过国际互联网进行核苷酸序列的同源性分析及编码蛋白质的结构分析和功能预测。结果经三轮复筛,从多个持续阳性克隆中挑选出3个进行测序、分析,其中N1克隆为新基因,Score<50,命名为Parcxpwnx01,GenBank登录号为AY838802。该基因编码231个氨基酸,初步预测该蛋白可能为一具信号转导功能的跨膜蛋白。N2克隆与美洲大蠊核蛋白体16SRNA基因高度同源,N3与黑胸大蠊线粒体DNA高度同源。结论免疫筛选获得与黑胸大蠊若虫抗原相关的基因克隆,其编码的蛋白结构和功能有待进一步研究。     

美洲大蠊抗胃溃疡作用的初步研究

为了研究美洲大蠊提取物抗胃溃疡的作用,本文进行了大鼠应激胃溃疡型,大鼠醋酸烧灼的胃溃疡型及大鼠无水乙醇胃粘膜损伤型的动物实验观察。结果表明美洲大蠊提取物对应急型及乙醇型胃溃疡模型保护效果明显,但对醋酸烧灼法引起的胃溃疡模型无明显的保护效果,其保护作用机理尚待进一步研究。     

吡咯啶二硫代氨基甲酸铵电化学修饰玻碳电极测定尿中铅的研究

〔目的〕用电化学方法制作吡咯啶二硫代氨基甲酸 电化学修饰玻碳电极。研究铅在该电极上阳极溶出伏安特性,建立一个简便快速的尿中铅的新方法。〔方法〕经配位体ＰＤＣＡ与甲醛来修饰的玻碳电极,在含铅磷酸盐缓冲溶液中,经循环伏安测定铅的阳极溶出峰。〔结果〕本方法的最低检出限为０．０００１μｇ／ｍｌ,在浓度０．０００２５￣０．８５μｇ／ｍｌ,基峰高与铅浓度成良好的线性关系,其相关系数ｒ＝０．９９６,相对偏差ｓ＝０．０５。〔结论〕该方法具有灵敏度高,选择性、重现性好,简便快速及测定中无汞的污染的优点。对尿中铅的分析,不需对样品进行消化而直接测定。     

医学昆虫蜚蠊化学组分及药用价值研究现状

医学昆虫蜚蠊（blatta）,俗名蟑螂（cockroach）,古称费蠊、蠊、石姜、负盘、滑虫、茶婆虫、香娘子等,属节肢动物门、昆虫纲、蜚蠊目。在距今3.5亿年前的石炭世纪前期化石中就有蜚蠊出现,说明它是古老的昆虫类群之一,演化史上称之为＂蜚蠊时代＂。早在1960年,Princis就曾报道蜚蠊在世界范围内约有5000种,中国约有250种左右,分为8科20属。     

日本血吸虫琥珀酸脱氢酶铁硫蛋白重组抗原的制备及其诊断价值的研究

目的 探讨重组日本血吸虫琥珀酸脱氢酶铁硫蛋白(rSjSDISP)用于血吸虫病的诊断价值。方法 利用经原核表达并纯化的rSjSDISP, 建立基于重组抗原的快速酶联免疫吸附试验(F-ELISA),检测血吸虫感染不同时期的兔血清、健康人血清、寄生虫病患者血清(其中包括血吸虫病患者血清、肝吸虫病患者血清、肺吸虫病患者血清),比较rSjSDISP F-ELISA与SEA-IHA两者的早期诊断价值及对rSjSDISP F-ELISA诊断方法的诊断效能做出评价;并与SEA-IHA法和SEA F-ELISA法平行检测血吸虫病疫区335份待测人血清比较3者的敏感性和特异性。结果 成功构建pET32a/rSjSDISP重组质粒,当IPTG终浓度为0.1 mmol/L,28 ℃诱导6 h时SjSDISP重组蛋白表达量达到最大。rSjSDISP F-ELISA与SEA-IHA可区别出血吸虫感染28 d后的兔血清,两者检测结果差异无统计学意义;rSjSDISP F-ELISA敏感度为94.4,特异度为93.0,Youden指数为0.88。在诊断335份血吸虫病疫区现场血清中,该方法与SEA-IHA 、SEA F-ELISA具有相似的敏感性和特异性(P>0.05)。结论 rSjSDISP重组抗原可作为一种成分均一的优势诊断抗原,替代成分复杂的虫卵可溶性抗原(SEA)用于血吸虫病的诊断。rSjSDISP F-ELISA方法操作简便、快速,抗原制备易于标化,稳定性强,在血吸虫病诊断上具有较大的应用潜能。     

黑胸大蠊室内繁殖、发育的生物学特性研究

目的阐明药用昆虫黑胸大蠊室内繁殖、发育的生物学特征。方法系统观察黑胸大蠊在人工饲养条件下生殖产卵、孵化、若虫生长、蜕皮、羽化等生活史全过程。结果统计分析了卵鞘长度、每鞘含卵数及分布、卵孵率、鞘孵率、卵期、若虫发育历期、羽化率、性比、成虫寿命、雌虫产卵期等生物学特征参数。结论实验结果为建立黑胸大蠊的人工饲养及大量繁殖方法提供了重要的科学依据和详细的实验观察资料。     

美洲钩虫胃、肠道感染伴重症贫血1例

钩虫病是一种我国广大农村常见的肠道寄生虫病,其主要危害是成虫在肠道内导致宿主的慢性失血。本院最近发现1例美洲钩虫胃、肠重症感染患者,报告如下。