日本血吸虫SIEA26-28kDa的抗雌虫生殖免疫作用--HGPRT是否是主要的靶抗原

目的观察日本血吸虫SIEA26—28kDa抗原的抗雌虫生殖作用。方法用AcA柱层析纯化日本血吸虫早期胚卵中的SIEA和SIEA26—28kDa成分。并以此纯化产物免疫BALB／c小鼠。将小鼠分为三组，分别用SIEA、SIEA26—28kDa和免疫佐剂免疫动物，然后进行尾蚴攻击感染。46天后剖杀动物，冲虫，然后作虫荷测定及虫卵分类计数。结果SIEA26—28kDa免疫组雌虫子宫内减卵率为54．8％。与对照组比较有极显著性差异；该实验组动物肝脏和小肠组织内的虫卵数比对照组分别降低了48.07％和77.41％，且以成熟虫卵数的下降较为显著，分别降低了83．6％和93．3％；粪卵数的下降幅度最为显著，达87．26％。结论SIEA26—28kDa可作为一种抗卵胚发育及抗雌虫生殖的候选抗原分子。     

日本血吸虫DNA疫苗pcDNA3/SjSDISP的安全性评价

目的评价日本血吸虫DNA疫苗pcDNA3/SjSDISP的安全性。方法同体左右侧自身对比法对3只家兔进行局部肌肉刺激实验,22只豚鼠随机分为4组:A组为无菌生理盐水阴性对照组,B组为牛血清白蛋白阳性对照组,C组为pcDNA3/SjSDISP低剂量组,D组为pcDNA3/SjSDISP高剂量组,进行全身过敏实验。结果日本血吸虫DNA疫苗pcDNA3/SjSDISP对家兔局部肌肉刺激反应轻微,对豚鼠无全身过敏反应。结论日本血吸虫DNA疫苗pcDNA3/SjSDISP在该实验条件下安全。     

致弱尾蚴免疫血清与日本血吸虫不同发育阶段抗原免疫反应性的研究

目的　通过比较分析日本血吸虫不同发育阶段抗原的异同 ,并以致弱尾蚴免疫血清识别不同发育阶段抗原 ,筛选具有保护性免疫作用的抗原分子。方法　分离制备日本血吸虫未成熟虫卵、成熟虫卵、尾蚴、雄性成虫、雌性成虫等不同发育阶段的抗原 ;采用ELISA分别测定正常尾蚴感染兔血清、紫外线照射致弱尾蚴免疫兔血清抗原的抗体水平 ;通过SDS PAGE电泳和免疫印迹技术 ,分析正常尾蚴感染血清与紫外线照射致弱尾蚴免疫兔血清对不同发育阶段的免疫反应性。结果与结论　SDS-PAGE结果显示未成熟虫卵抗原、成熟虫卵抗原、尾蚴抗原、雄性成虫抗原、雌性成虫抗原蛋白之间互有异同。间接ELISA试验显示致弱尾蚴免疫血清同样能诱导宿主产生高滴度的抗体水平。致弱尾蚴免疫血清共筛选出 2 3种具免疫学活性的抗原分子 ,分子量分别为 :2 4 .5kDa、2 8kDa、36kDa、4 3kDa、4 4kDa、4 8kDa、5 4kDa、5 8.5kDa、6 0kDa、6 2kDa、6 6kDa、6 8kDa、70kDa、75kDa、79kDa、85kDa、87kDa、91kDa、95kDa、97kDa、10 5kDa、10 8kDa、110kDa。其中未成熟虫卵和成熟虫卵抗原各占 11种 ,尾蚴抗原分子 4种 ,雄性成虫抗原分子 3种 ,雌性成虫抗原分子 6种 ,提示这些抗原分子可能为抗日本血吸虫病疫苗候选分子的重要靶标     

日本血吸虫真核表达质粒pcDNA3/HGPRT的构建及序列测定

目的应用基因工程技术,对日本血吸虫次黄嘌呤-鸟嘌呤磷酸核糖转移酶(hypoxanthine-guaninephosphoribosyltransferase,HGPRT)进行亚克隆,试图构建真核重组DNA质粒pcDNA3-HGPRT。方法通过筛选日本血吸虫成虫cDNA文库,克隆HGPRT基因片段,然后将目的片段亚克隆入真核表达载体pcDNA3。结果成功构建了真核重组DNA质粒pcDNA3-HGPRT,为进一步研究HGPRT的功能奠定了基础。     

日本血吸虫pcDNA3/SjCWL01核酸疫苗的构建及其对小鼠免疫效果观察

目的构建日本血吸虫pcDNA3/SjCWL01核酸疫苗并进行免疫保护效果观察,评价其作为疫苗的潜能。方法将日本血吸虫基因SjCWL01亚克隆入真核表达载体pcDNA3,构建目的基因真核表达质粒,将pcDNA3/SjCWL01质粒转化大肠杆菌DH5α,大量制备DNA疫苗并免疫小鼠3次,间隔2w,末次免疫后2w,用ELISA法检测免疫鼠血清特异性抗体效价,日本血吸虫尾蚴进行腹部皮肤攻击感染,感染后45d剖杀冲虫,分别计算减虫率,每克肝、粪卵减少率。结果重组DNA疫苗(pcDNA3/SjCWL01)与对照组比较,虫荷、每克肝卵、每克粪卵数分别下降了27.6%,39.5%,45.9%。结论表明pcD-NA3/SjCWL01疫苗可诱导小鼠产生部分抗血吸虫感染的保护力。     

旋毛虫肌蚴抗原诱导小鼠抗日本血吸虫保护性免疫的研究

目的：探讨旋毛虫幼虫抗原免疫小鼠对日本血吸虫攻击感染的交叉保护作用。方法：用４种不同的旋毛虫幼虫抗原制剂经颈部皮下多点免疫小鼠，然后用日本血吸虫尾蚴３０条或１００条攻击感染，攻击后４５ｄ剖杀小鼠，收集成虫、肝组织和粪便中的虫卵，并计数。结果：４种不同制剂均可诱导不同程度的保护性免疫效应，以旋毛虫幼虫匀浆上清可溶性抗原（ＴｓＳＡ）效果较好，减虫率为２１．３％，加用福氏佐剂时，其减虫率为２９．３％，肝组织和粪便中的虫卵减少率分别达４８％和５８．５％，平均每鼠肝组织和粪便中的虫卵ＥＰＧ减少率分别为４１．７％和４８．９％；当抗原剂量为１００００条旋毛虫并加用福氏佐剂时，其减虫率达３９．６％。结论：旋毛虫抗原免疫小鼠能诱导抗日本血吸虫攻击感染的免疫效应     

日本血吸虫虫卵与旋毛虫肌蚴间相似抗原的研究

目的 :分析日本血吸虫虫卵与旋毛虫肌蚴间共同抗原的相似程度。方法 :应用 EITB和 ELISA技术对此 2种寄生虫可溶性抗原进行了血清学交叉反应分析。结果 :EITB显示 :在Ts ML A中 ,4 4、 53、 60、 64、 66/ 70 k Da和约 10 0 k Da的抗原为 Sj IRS识别 ,而 31、 4 2、 4 6、 51/53和 58/ 60 k Da成分为 α- Sj EARS识别 ;在 Sj EA中 ,4 6、58和 64k Da抗原为 Ts IRS识别 ,58、60、64和 70 k Da成分为α- Ts MLARS识别。EL ISA显示 :在 Sj IRS中抗 Ts抗体滴度显著高于在Ts IRS中所含抗血吸虫卵的抗体滴度。结论 :日本血吸虫卵与旋毛虫肌蚴间存有较多的共同抗原决定簇 ,但两者间的相似程度有明显差异。     

佐剂FCA与Quil A对rGST-Sj32的免疫增强作用的比较

目的比较弗氏完全佐剂(FCA)与皂素的纯化物Quil A的免疫增强作用,进一步提高重组抗原rGST-Sj32的免疫效果.方法rGST-Sj32+FCA或Quil A免疫NIH小鼠3次,ELISA法检测抗体水平,用减虫率及减卵率表示保护效果.结果与PBS对照组比较,rGST-Sj32+FCA免疫小鼠减虫率为42.9%,每克肝卵(LEPG)减少率51.0%,每雌肝卵(LEPF)减少率为23.9%,抗体滴度达125 600.rGST-Sj32+Quil A免疫小鼠减虫率为46.0%,LEPG减少率39.4%,LEPF减少率为8.5%,抗体滴度达151 200.结论FCA和Quil A均可增强rGST-Sj32免疫小鼠的抗感染保护性免疫力;FCA亦可增强rGST-Sj32诱导小鼠抗生殖免疫,Quil A无增强抗生殖免疫的作用.     

曼氏迭宫绦虫裂头蚴抗原的免疫特性及特异性抗体检测

通过ＥＬＩＢ技术对曼氏裂头蚴可溶性抗原的免疫学特性进行分析，并用ＥＬＩＳＡ法对特异性抗体作了检测。结果表明：裂头蚴抗原内有５种组分被感染兔血清识别，其中低分子量组分是主要的血清学抗原；裂头蚴感染可使宿主产生高水平的抗体反应；用ＥＬＩＳＡ法诊断裂头蚴感染简便可行。