经穴注射骨髓间充质干细胞对后肢缺血大鼠血流的影响

目的:探讨骨髓间充质干细胞(bone marrow mesenchymal stem cells,BM-MSCs)移植治疗大鼠后肢动脉缺血的最佳移植方法.方法:SD大鼠24只,随机分为4组:空白对照组、模型组、经穴注射BM-MSCs治疗组(简称穴注组)、肌肉注射BM-MSCs治疗组(简称肌注组).穴注组取"三阴交""后三里""照海""环跳""阳陵泉"穴,肌注组在缺血后肢腓肠肌、内收肌任取5个非穴位点,两组均注射BM-MSCs.采用离断股动脉及其分支的方法制造大鼠后肢缺血模型.采用激光多普勒血流仪连续监测大鼠后肢患、健侧血流量(perfuse unit,PU),并用PU指数(患侧PU值/健侧PU值,PUI)表示血流量的增加值.检测血管内皮生长因子(VEGF)和碱性纤维母细胞生长因子(bFGF)的含量,免疫组织化学半定量分析VEGF和bFGF的表达量.结果:与模型组、肌注组相比,穴注组PUI在干细胞注射后第3天、14天、21天显著升高(P＜0.05,P＜0.01).与模型组相比,穴注组和肌注组的血清VEGF、bFGF及免疫组织化学VEGF、bFGF的表达量显著升高(均P＜0.01).结论:经穴注射BM-MSCs后,大鼠缺血后肢血流灌注恢复速度快,与肌肉注射的方法相比,能显著改善缺血大鼠后肢的血流量.     

经穴注射骨髓间充质干细胞对后肢缺血大鼠血管活性物质的影响

目的探讨血管活性物质在经穴注射骨髓间充质干细胞(BM-MSCs)改善后肢缺血大鼠血流中的作用。方法SD大鼠24只,随机分为4组:空白对照组、模型组、经穴注射组、肌肉注射组。采用离断股动脉及其分支的方法制造大鼠后肢缺血模型。经穴注射组取三阴交、后三里、照海、环跳、阳陵泉5穴,肌肉注射组取缺血后肢大腿任5个非穴位点,2组均注射BM-MSCs。注射BM-MSCs 3周后,大鼠经腹主动脉取血检测血清中血管紧张素Ⅱ(AngⅡ)和一氧化氮(NO)的含量;取各组大鼠左侧后肢内收肌和腓肠肌,免疫组织化学法测定后肢骨骼肌AngⅡ和内皮素-1(ET-1)的表达量。结果与空白对照组、模型组相比,经穴注射组和肌肉注射组血清内NO的含量显著升高(P<0.01)、AngⅡ含量差别无统计学意义,后肢骨骼肌ET-1表达量显著升高(P<0.01)、而且经穴注射组高于肌肉注射组(P<0.01),后肢骨骼肌AngⅡ含量差别无统计学意义。结论ET-1和NO都参与了经穴注射BM-MSCs后的缺血大鼠后肢血流的改善,AngⅡ未参与经穴注射BM-MSCs后缺血大鼠后肢血流的改善。     

郑则敏教授治疗脉管病学验初探

郑则敏教授系福建省名老中医,中医世家,长期从事中医临床、教学、科研工作,致力于脉管病的防治研究,著有《郑则敏学术经验集》、《中医外科心得·临床经验》等专著,临床治疗脉管病擅用凉血化瘀,利湿消肿法,提出痛须用虫药的观点,具有从肝脾论治,形与神俱,合病与并病,药对成方的特点,中医特色明显,疗效显著,深受海内外患者好评。     

Preliminary Study on the Mechanism of Acupoint Injection of Bone Marrow Mesenchymal Stem Cells in Improving Blood Flow in the Rat of Hind Limb Ischemia

Objective:To explore the mechanism of acupoint injection of bone marrow mesenchymal stem cells(BM-MSCs) in improving blood flow in the rat with hind limb ischemia.Methods:Twenty-four SD rats were randomly divided into 4 groups:normal control group(n=6),model group(n=6),BM-MSCs acupoint injection group(AI group,n=6) and BM-MSC intramuscular injection group(MI group,n=6).Sanyinjiao(SP 6),Housanli(ST 36),Zhaohai(KI 6),Huantiao(GB 30) and Yanglingquan(GB 34) were selected for the AI group,and five non-acupoints were selected on gastrocnemius and adductor of ischemic hind limbs in the MI group.BM-MSCs were injected to the latter two groups.The rat hind limb ischemia model was established with the method of blocking the femoral artery and its branches.Three weeks after injection of BM-MSCs,in each group,hindlimb adductor and gastrocnemius were taken from the ischemic side.Expressions of vascular endothelial growth factor(VEGF) and transfer growth factor-β1(TGF-β1) in the skeletal muscle were determined with immunohistochemical method,and the small arteries in the skeletal muscle were labeled with α-SMA immunohistochemical staining method,the density of small arteries(number of arterioles /number of muscle fibers) and the number of the blood vessel with VEGF positive expression were calculated.The serum levels of VEGF and nitric oxide(NO) were detected.Results:Compared with the model group,the expression of VEGF and TGF-β1,and the density of small arteries and the number of VEGF-positive blood vessels in the AI group and the MI group significantly increased(both P<0.01).Compared with the MI group,the density of small arteries and the number of VEGF-positive blood vessels in the AI group significantly increased(both P<0.01);Compared with the model group and the normal control group,the serum expression quantity of NO and VEGF in the AI group and the MI group were significantly increased(P<0.01).Conclusions:Acuppoint injection of BM-MSCs secrets more VEGF,TGF-β1 and NO to increase angiogenesis and arteriogenesis,so as to improve blood flow of the rats of hind limb ischemic.     

脉管Ⅱ号胶囊对大鼠后肢缺血后血管再生的影响及其机制

探索脉管Ⅱ号胶囊对大鼠肢体缺血症的影响，为外周动脉疾病的治疗奠定理论基础。     

回阳生肌脂质体凝胶促进慢性皮肤溃疡大鼠创面愈合机制的研究

目的 观察回阳生肌脂质体凝胶促进慢性皮肤溃疡愈合的作用,探讨其治疗阴证疮疡的药理机制.方法 SD大鼠80只随机分为4组:正常组、模型组、传统回阳生肌膏治疗组(传统组)和回阳生肌脂质体凝胶治疗组(脂质体组).采用"激素干预-皮肤缺损-细菌感染"复合因素叠加法制备慢性皮肤溃疡大鼠模型.观察大鼠一般生活行为,检测大鼠血清肿瘤坏死因子-α(TNF-α)及白细胞介素-8(IL-8)含量,免疫组化法检测疮疡区组织中增殖细胞核抗原(PCNA)和血管内皮生长因子(VEGF)表达,并行图像分析.结果 与正常组比较,模型组大鼠血清中TNF-α和IL-8含量显著升高,溃疡区组织中PCNA表达增多、VEGF表达减少(P＜0.05).与模型组比较,脂质体组大鼠血清中TNF-α和IL-8含量均呈下降的趋势(P＜0.05或P＜0.01).脂质体组大鼠溃疡面可见丰富的新生毛细血管且向伤口处聚集分布,VEGF在再生的血管壁胞浆表达阳性,真皮层中见到较多PCNA阳性细胞,而且还在新生血管内皮细胞中可见到棕黄色颗粒表达.与模型组比较,脂质体组 PCNA和VEGF表达均有统计学差异(P＜0.05).结论 回阳生肌脂质体凝胶具有促进慢性皮肤溃疡愈合的作用,其作用机制可能与该药促进慢性皮肤溃疡创面细胞增殖、调动血管内皮生长因子参与血管再生、减轻机体炎症反应有关.     

脉管Ⅱ号胶囊对Ang-1/Tie2信号通路及人脐静脉内皮细胞的影响

目的研究脉管Ⅱ号胶囊对人脐静脉内皮细胞(human umbilical vein endothelial cells,HUVECs)的影响,探索其促进血管生成的可能机制。方法按照随机数表法将20只SPF级雌性SD大鼠随机分为高剂量血清组与低剂量血清组,每组10只,分别以90 mg·kg^-1·d^-1与30 mg·kg^-1·d^-1的剂量喂服脉管Ⅱ号胶囊,用于制备含药血清;将HUVECs随机分为空白组、空载组、低剂量组、低剂量+Ang-1干扰组、高剂量组及高剂量+Ang-1干扰组,其中空白组与空载组HUVECs置于含有10%胎牛血清、1%丙酮酸钠、0.1 mg/mL肝素和0.05 mg/mL血管内皮生长因子的F12K培养基内,并分别接种于96孔培养板中放在37℃、5%CO2环境内培养,每3d更换1次培养基,待HUVECs培养至融合度达到60%~80%时,按每孔102μL将空载质粒转染液加入空载组培养板中,充分混匀,放回培养箱中培养4h,去上清,再加入完全培养基,在37℃、5%CO2环境内继续培养;低剂量组与低剂量+Ang-1干扰组HUVECs培养时将空白组培养环境中的10%胎牛血清替换为10%低剂量含药血清(取自低剂量血清组大鼠),并于相同时间加入Ang-1-pReceiver-M98转染液培养;高剂量组与高剂量+Ang-1干扰组HUVECs培养时将空白组培养环境中的10%胎牛血清替换为10%高剂量含药血清(取自高剂量血清组大鼠),并于相同时间加入Ang-1-pReceiver-M98转染液培养。分别用MTT法检测HUVECs的增殖情况,Hoechst33258染色法观察HUVECs形态,Elisa法及Western blotting法检测血管生成素1(angiopoietin-1,Ang-1)和酪氨酸激酶受体2(tyrosine kinase receptors 2,Tie2)的表达水平。结果与空白组对比,空载组HUVECs的相对增殖率及Ang-1、Tie2表达水平均无明显变化(P均>0.05);高剂量组和低剂量组HUVECs的相对增殖率及Ang-1、Tie2表达水平均显著增加(P均<0.05),且高剂量组显著高于低剂量组(P均<0.05);高剂量+Ang-1干扰组和低剂量+Ang-1干扰组HUVECs的增殖率及Ang-1、Tie2表达水平均显著降低(P均<0.05),且低剂量+Ang-1干扰组显著低于高剂量+Ang-1干扰组(P均<0.05)。空白组、空载组、高剂量组和低剂量组细胞均维持原有形态,细胞凋亡和细胞形态变化较少;高剂量+Ang-1干扰组和低剂量+Ang-1干扰组细胞凋亡增加,且以低剂量+Ang-1干扰组细胞凋亡数量较大。结论调节Ang-1/Tie2信号通路的表达可能是脉管Ⅱ号胶囊促进血管生成的作用机制,有待进一步深入研究证实。     

蛇伤后饮酒对伤肢肿胀及组胺影响的临床研究

目的探究民间传统以酒助行药力治疗火毒证蛇伤的可行性。方法实验分为饮酒的观察组和未饮酒的对照组各30例,采用相同的诊断标准、纳入标准、排除标准和治疗方案,分别观测记录伤肢肿胀加剧时间和持续时间(以小时计数),两组均于蛇伤后第4天清晨空腹抽肘静脉血,采用酶联免疫分析(ELISA)法检测人体组胺,用SPSS 16.0统计软件采用配对t检验进行统计学数据分析。结果均P0.05有统计学意义。结论临床证据和实验数据证明火毒证蛇伤后饮酒是错误的,饮酒能助行药力的思维是错误的,应当选择性地继承传统治疗手段,基于中医学"既病防变"的理念,倡导正确处理,进而提高火毒证毒蛇咬伤的救治水平,降低医疗费用,节约社会医疗资源。     

回阳生肌脂质体凝胶促进慢性皮肤溃疡愈合的实验研究

目的观察新型制剂回阳生肌脂质体凝胶促进慢性皮肤溃疡愈合的药效,探讨"回阳生肌"外用药治疗中医阴证疮疡的初步药理机制。方法SD大鼠80只随机分4组:空白对照组、模型组、传统回阳生肌膏治疗组和回阳生肌脂质体凝胶治疗组。采用"激素干预—皮肤缺损—细菌感染"复合因素叠加法制备慢性皮肤溃疡大鼠模型。实验观察大鼠一般生活行为,检测创面分泌物溶菌酶含量,血清肿瘤坏死因子-α(TNF-α)及血栓素B2(TXB2)含量及组织病理改变。结果模型组大鼠表现出中医临床"阴证"的基本证候特征。与模型组比较,传统回阳生肌膏及其脂质体凝胶治疗组创面分泌物溶菌酶含量显著升高(P<0.05或P<0.01);血清中TNF-α和TXB2的含量显著下降(P<0.05或P<0.01);创面肉芽组织增多,胶原合成旺盛,皮肤结构趋于完整。结论新型制剂回阳生肌脂质体凝胶在抗菌、消炎、促进胶原合成及创面愈合方面均表现出较好的疗效。     

脉管Ⅱ号胶囊治疗下肢动脉硬化闭塞症的临床研究

目的观察脉管Ⅱ号胶囊治疗下肢动脉硬化闭塞症的临床疗效。方法将福建中医药大学附属人民医院2013年1月-2015年10月收治的120例下肢动脉硬化闭塞症患者随机分为空白组、对照组和治疗组。每组40例。空白组患者给予常规治疗,对照组患者在常规治疗的基础上每日口服西洛他唑,治疗组患者在常规治疗的基础上每日口服脉管Ⅱ号胶囊。3组患者分别于治疗前及治疗后14 d应用血管分析工作站进行脉搏体积容积描记(PvR),记录踝肱指数(Ankle Brachial Index,ABI),并通过肢体发凉、静息痛、间歇性跛行等指标来评价其临床疗效。结果治疗前空白组、对照组、治疗组的ABI及症状积分差异均无统计学意义(P均0.05);治疗14 d后,与空白组相比,对照组、治疗组的ABI及症状积分差异均具有统计学意义(P均0.05),但对照组和治疗组的ABI及症状积分差异无统计学意义(P0.05)。结论与单纯常规治疗相比,脉管Ⅱ号胶囊在提高患者ABI,改善肢体发凉、静息痛、间歇性跛行、肢体酸胀、麻木等症状方面均具有明显优势;但与西洛他唑相比,两者在上述方面无明显差异。