miR-29a基因敲除对C57BL/6小鼠肾小球结构和功能的影响

目的：观察微小RNA-29a(miR-29a)基因敲除对小鼠肾小球功能和结构的影响。方法：应用CRISPR/Cas9技术,选择C57BL/6 miR-29a基因敲除型(miR-29a knockout,miR-29a KO)小鼠作为实验组,未敲除型小鼠作为野生型(wild-type,WT)对照组(n=30)。分别在第3、12和24周收集小鼠24 h尿液。采用考马斯亮蓝染色法进行尿蛋白测定;ELISA测定尿白蛋白和尿肌酐水平,并计算尿白蛋白/肌酐比值(urinary albumin/creatinine ratio,UACR)。选取3、12和24周的小鼠,采用过碘酸雪夫氏(periodic acid-schiff,PAS)染色法观察肾脏组织的病理变化;通过透射电镜以及冷冻蚀刻电镜观察肾小球超微结构。另取2组24周的小鼠,一组小鼠腹腔麻醉后用Dynabeads^TMM-450 Tosylactivated微磁珠经心脏灌流后分离肾小球,用于RNA和蛋白的提取;另一组小鼠肾脏用于免疫荧光染色。采用RT-qPCR、免疫荧光染色以及Western blot检测小鼠肾小球足细胞标...     

线粒体靶向抗氧化剂SKQ1对糖尿病小鼠肾损伤的治疗作用与机制

目的 本文旨在研究线粒体靶向抗氧化剂SKQ1对糖尿病(DM)小鼠肾损伤的影响,以阐明SKQ1对肾脏的保护作用及机制。方法 选取野生型雄性C57BL/6小鼠30只,行右侧肾切除术后注射诱导DM模型,分成对照组、DM组、SKQ1组各10只。用药组每天饮用SKQ1水溶液,对照组和DM组正常饮水。连续饲养28周后,收集尿液测尿微量白蛋白的变化;通过HE和PAS染色法观察小鼠肾脏病理结构和肾脏纤维化的变化;通过q-PCR和免疫荧光法检测小鼠NPHS2、WT1、Podxl、desmin、α-SMA表达情况。结果 与对照组比较,DM组小鼠尿微量白蛋白明显增加;与DM组小鼠比较,SKQ1组小鼠尿微量白蛋白降低。HE和PAS染色结果显示,与对照组比较,DM组小鼠肾小球系膜细胞增多,细胞外基质增生,有明显的胶原纤维沉积;与DM组比较,SKQ1组小鼠肾小球系膜细胞数量减少,细胞外基质增生减轻,胶原纤维沉积明显减轻。q-PCR和免疫荧光结果显示,与对照组比较,DM组小鼠足细胞相关分子NPHS2、WT1、Podxl明显降低,desmin、α-SMA表达量增加;与DM组比较,SKQ1组小鼠足细胞相关分子NPHS2...     

明胶酶-B及其抑制剂与类风湿性关节炎

明胶酶 B(GelatinaseB)属于金属蛋白酶 (MMPs)家族 ,又称MMP - 9,其主要功能是降解细胞外基质中的Ⅳ型、Ⅴ型胶原和明胶。在体内可参与多种生理、病理过程。明胶酶 -B可在多个水平上受多种方式的调节 ,基因表达的调节、酶原激活的调节、酶抑制剂的调节。明胶酶 B在类风湿性关节炎 (RA)发生发展过程中起多种不同的作用 ,包括对骨和软骨的破坏、对滑膜新血管形成的影响和对细胞因子的调节。由于明胶酶 -B在RA发病过程中起重要作用 ,因此抑制其活性是对RA进行治疗的一种有效手段。     

实验性支气管哮喘豚鼠肺和内脏感觉传入系统蛋白激酶C的表达及神经生长因子的调节作用

目的探讨支气管哮喘(简称哮喘)豚鼠肺及内脏感觉传入系统(C7～T5脊神经节及对应的脊髓后角)蛋白激酶C(PKC)的表达及神经生长因子(NGF)的调节作用。方法40只豚鼠按随机数字表法分为4组生理盐水对照组(A组)8只、单纯致敏对照组(B组)8只、哮喘组(C组)12只和NGF抗体组(D组)12只。用免疫组织化学方法检测各组豚鼠C7～T5脊神经节和对应的脊髓后角PKC的免疫反应变化;采用Westernblot方法分别检测各组豚鼠肺组织、C7～T5脊神经节和对应的脊髓后角NGF与PKC的表达;采用LuzexF实时图像分析系统和凝胶成像分析系统分别对以上结果进行图像分析。结果(1)免疫组织化学A、B组豚鼠C7～T5脊神经节和对应的脊髓后角PKC的平均吸光度(A)值分别为0.102±0.009、0.113±0.009、0.106±0.005、0.116±0.007,二者比较差异无统计学意义(P>0.05)。C组豚鼠C7～T5脊神经节和对应的脊髓后角PKC的A值分别为0.215±0.014、0.176±0.010,C组与A组比较差异有统计学意义(P<0.01)。D组豚鼠C7～T5脊神经节和对应的脊髓后角PKC的A值分别为0.140±0.008、0.130±0.011,D组与C组比较差异有统计学意义(P<0.01)。(2)Westernblot蛋白印迹C组肺组织、C7～T5脊神经节神经元及相应脊髓节段PKC蛋白表达量(其A相对值分别为1.51±0.01、1.40±0.03、2.22±0.02)与A组(其A相对值分别为0.51±0.02、0.43±0.01、0.92±0.02)和B组比较均明显增加,而D组PKC蛋白表达量(其A相对值分别为0.80±0.03、0.83±0.01、1.12±0.02)明显低于C组。结论PKC可能参与哮喘的发病过程,而NGF可上调哮喘豚鼠PKC的表达。     

佐剂关节炎大鼠关节软骨明胶酶-B的表达及PRL的调节作用

目的探讨佐剂关节炎(AA)大鼠关节软骨明胶酶-B的表达及催乳素(PRL)对其表达的影响。方法雄性W istar大鼠40只均分为4组:正常对照组(A组),AA对照组(B组),高催乳素血症AA组(C组),低催乳素血症AA组(D组)。放射免疫法测定各组血清PRL含量,明胶酶谱法测定MMP-9的活性,免疫组织化学法和W estern B lot测定明胶酶-B的表达。结果B组关节软骨明胶酶-B的活性及表达明显高于A组,C组明胶酶-B的活性及表达最高,D组较B组减少,但仍高于A组,低于C组。结论类风湿性关节炎(RA)时,明胶酶-B过表达,PRL上调明胶酶-B的表达,是其影响RA发病过程的一种可能机制。     

应用γH_2AX检测甲醛致DNA损伤的研究

目的探讨磷酸化的H2AX(即γH2AX)能否灵敏、快速、简便的检测甲醛致DNA损伤。方法用甲醛处理中国仓鼠肺细胞株(V79)肺细胞,应用免疫荧光实验检测γH2AX焦点的形成,并通过单细胞凝胶实验验证DNA损伤程度。结果20μmol/L甲醛处理V79细胞10 min即可诱导γH2AX焦点形成增加,但2 h时才出现彗尾增长。1μmol/L甲醛处理细胞8 h时,γH2AX平均焦点数及焦点细胞率与对照组相比明显增加,差异有统计学意义(P<0.05),但此浓度在所有时间段都不能导致彗尾增长。结论γH2AX可在早期监测甲醛对DNA的损伤,并能检测到低浓度的甲醛致DNA损伤,因此,其敏感性优于单细胞凝胶实验。     

案例教学法在专升本生理学教学中的应用

结合临床医学普通＂专升本＂教育的优缺点,从案例选择和教学过程两方面改进传统案例教学法,证实案例教学适宜于生理学教学,可达到有效的师生互动,可提高学生自学能力和理论联系实际的能力。     

脂质代谢紊乱与足细胞损伤研究进展

脂质肾毒性被认为是慢性肾脏疾病(CKD)的病因之一。脂质代谢紊乱引起脂质异位沉积于肾脏足细胞中,参与CKD发生和进展的病理生理过程,并导致足细胞的胰岛素信号异常、线粒体功能障碍、内质网应激和凋亡。因此,纠正肾脏脂质代谢紊乱是CKD的一个重要治疗目标。本文回顾了脂质肾毒性的研究进展以便更好地理解血脂异常在CKD发病中起到的作用。     

地塞米松对哮喘豚鼠肺及内脏感觉传入系统神经生长因子表达的抑制作用

目的：探讨地塞米松对哮喘豚鼠肺及内脏感觉传人系统(C7-T5脊神经节及对应的脊髓后角)神经生长因子(NGF)表达的影响。方法：利用免疫组织化学和Westem印迹方法,观察生理盐水组、单纯致敏组、哮喘组和地塞米松组豚鼠肺及内脏感觉传人系统(C7-T5脊神经节及对应的脊髓后角)NGF表达的变化。结果：哮喘组豚鼠NGF在肺及内脏感觉传人系统(C7-T5脊神经节及对应的脊髓后角)表达明显高于对照组,而地塞米松组则明显低于哮喘组。结论：NGF可能参与哮喘的发病过程,地塞米松抑制哮喘豚鼠NGF的表达可能是其治疗哮喘的机制之一。     

免疫球蛋白样结构域受体2缺失加重缺血再灌注诱导的肾纤维化

目的探究免疫球蛋白样结构域受体2(immunoglobulin-like domain-containing receptor 2, Ildr2)在缺血再灌注诱导肾纤维化中的作用。方法利用CRISPR/Cas9技术构建Ildr2敲除小鼠(KO组), 其对照组为野生型小鼠(WT组)。通过夹闭左侧肾蒂构建单侧肾脏缺血再灌注(unilateral renal ischemia reperfusion, UIR)模型(UIR组), 造模后分为KO-UIR组和WT-UIR组;假手术小鼠(Sham组)不进行缺血处理。采用肌氨酸氧化酶法检测血清肌酐水平;二乙酰肟比色法检测血尿素氮水平;酶联免疫吸附测定法检测尿白蛋白水平, 计算尿白蛋白/肌酐比值;HE、PAS及MASSON染色检测肾组织炎性细胞浸润情况和纤维化程度;实时荧光定量PCR检测Ildr2, 肾损伤相关分子中性粒细胞明胶酶相关载脂蛋白(neutrophil gelatinase-associated lipocalin, NGAL)和肾损伤分子1(kidney injury molecule-1, KIM-1), 纤维化标志分子Ⅰ型胶原α1(...