重组人肝刺激因子非融合性蛋白表达载体的构建及其在大肠杆菌中的表达和纯化

目的构建人肝刺激因子(human hepatic stimulator substance,hHSS)体外表达体系。方法hHSS基因片段经PstⅠ和NdeⅠ消化后,应用T-A克隆技术,克隆到质粒pT7-7载体,通过限制性酶切图谱分析及DNA测序反应鉴定hHSS基因。再将pT7-7-hHSS表达载体转化到BL21(DE3)中表达,通过超滤膜及阴离子交换柱纯化,获得目的蛋白。结果表达产物在15 000处有一明显条带,蛋白质肽指纹图谱分析与预期结果相符,经Western blot杂交印证,该15 000蛋白质为hHSS。结论通过构建pT7-7-hHSS原核表达体系,能正确高效地表达hHSS。     

他莫昔芬体外促进HepG2细胞脂肪变性观察

目的：研究他莫昔芬（TAM）对体外培养的HepG2细胞脂肪变性以及脂类代谢调控关键因子表达的影响。方法应用油酸（50μmol/L）处理HepG2细胞,诱导细胞脂肪变性体外模型,同时给予不同浓度的TAM （5～20μmol/L）干预72 h;采用油红O染色和甘油三酯含量测定检测HepG2细胞内脂质聚集情况;应用蛋白印迹法检测固醇调节元件结合蛋白-1c（SREBP-1c）、脂肪酸合成酶（FAS）、硬脂酰辅酶A去饱和酶（SCD）、肉酯软脂酰基转移酶（CPT1）和微粒体甘油三酯转移蛋白（MTP）的表达;采用细胞活性检测试剂盒测定细胞活性。结果在干预72 h后,模型组细胞内甘油三酯含量为（16.53＆#177;0.17） mg/100 mg蛋白质,在5μmol/L TAM处理细胞内甘油三酯含量为（17.77＆#177;0.05） mg/100mg蛋白质,与模型组无显著性差异,但在10μmol/L和20μmol/L TAM处理组较模型组分别增加了31%[（21.57＆#177;0.16） mg/100 mg蛋白质]和44%[（23.82＆#177;0.44） mg/100 mg蛋白质],（P＆lt;0.05）;TAM上调细胞内SREBP-1c、FAS、SCD和MTP蛋白表达,但并不改变CPT1蛋白表达;TAM在5～20μmol/L范围内不影响HepG2细胞活性。结论 TAM可促进油酸诱导的HepG2细胞脂肪变性,其主要机制可能是通过上调SREBP-1c及其下游基因,如FAS和SCD的表达而增加了脂肪酸的合成。     

重组肝刺激因子对肝脏卵圆细胞增殖的作用

目的观察重组人肝刺激因子(hHSS)对肝脏卵圆细胞增殖的影响。方法分离大鼠肝卵圆细胞，加以培养，并进行细胞学鉴定。将重组的hHSS作用于肝脏卵圆细胞，以MTT法、流式细胞术观察其对卵圆细胞的增殖作用。结果实验分离的卵圆细胞同时表达肝细胞和胆管细胞特异性标志物。给予重组hHSS作用12～24h后，细胞增殖速度减缓，细胞DNA合成减弱，其作用的最有效浓度为240mg/L。结论重组hHSS能抑制卵圆细胞的增殖。     

过表达CCAAT增强子结合蛋白α对HepG2细胞代谢能力的影响

HepG2细胞系具有较强的稳定性、增殖力、并且能分泌多种血浆蛋白等优点,而它的某些合成代谢功能远不能满足生物人工肝的要求.     

过表达CCAAT增强子结合蛋白α对HepG2细胞代谢能力的影响

HepG2细胞系具有较强的稳定性、增殖力、并且能分泌多种血浆蛋白等优点,而它的某些合成代谢功能远不能满足生物人工肝的要求.     

单味溪黄草对小鼠移植性腹水型肝癌的防治效果观察

目的探讨单味溪黄草水煎剂对小鼠移植性腹水型肝癌(H22)细胞防治效果。方法将实验小鼠除正常对照组皮下注射生理盐水外，其它各组皮下移植H22细胞后，预防组小鼠饮用溪黄草水煎剂，治疗组小鼠4d后待有肿物形成时饮服溪黄草水煎剂．以观察小鼠生瘤率、死亡率、瘤体重量及淋巴和肺组织转移情况。结果实验各组除正常对照组外小鼠生瘤率100．0％，预防和治疗组的瘤重和死亡率与模型对照组比较均有增加，肺转移明显，但未见淋巴转移。结论单味溪黄草水煎剂不能抑制H22细胞生长，对经血循环转移至肺有激发加强作用。     

肝脏干细胞

近年来动物实验的结果已经证明肝脏确实存在干细胞。大多数肝损伤情况下是由肝细胞分裂、增殖来完成肝脏再生。而干细胞不仅对肝细胞的再生起一定作用,当肝细胞由于药物、毒物、病毒损害而无法再生时如纤维化、大量坏死,干细胞就成为肝脏再生的