分子佐剂TBhsp和MT在肝细胞再生磷酸酶-3(PRL-3)单克隆抗体制备中的作用

目的探讨结核分枝杆菌热休克蛋白(TBhsp)和结核分枝杆菌T细胞刺激表位(MT)在肝细胞再生磷酸酶-3(PRL-3)单克隆抗体(mAb)制备过程中的佐剂作用。方法构建对照质粒pET28a-PRL-3和佐剂-PRL-3融合蛋白表达质粒pET28a-PRL-3-MT、pET28a-TBhsp-PRL-3和pET28a-TBhsp-PRL-3-MT,并纯化其表达蛋白,分别免疫BALB/c小鼠,ELISA检测并比较各组的抗血清效价,选取效价最高的小鼠,采用杂交瘤技术制备PRL-3 mAb,并进行类和亚类鉴定。结果成功构建了上述4种PRL-3相关的重组表达质粒,并表达纯化出相应的融合蛋白,其中PRL-3-MT融合蛋白免疫组抗体效价高于其他组;用该组小鼠进行细胞融合并筛选获得均为IgG类的10株分泌PRL-3 mAb的细胞株。结论 MT在PRL-3 mAb制备中可以发挥较为明显的免疫佐剂作用。     

单克隆抗体PD4相关抗原的鉴定

单克隆抗体ＰＤ4是本所用胃癌细胞系ＭＧＣ80 3细胞免疫ＢＡＬＢ/ｃ小鼠 ,经细胞筛选而获得的[1] 。前期工作证明 ,此抗体能引起ＭＧＣ80 3细胞的凋亡[2 ] ,抑制Ｒａｓ转化细胞Ｒａｔ3 3在体外的增殖及在软琼脂中的集落形成能力 ,并降低其在裸鼠中的致瘤能力[3 ,4 ] ,这些结果提示 ,单克隆抗体ＰＤ4相关抗原与肿瘤的发生、发展及转归密切相关。因此 ,克隆ＰＤ4相关抗原基因 ,了解其结构及功能 ,将有助于我们认识肿瘤的发生发展及转归规律 ,为肿瘤的防治提供有益的线索和依据。一、材料与方法1 ＭｃＡｂＰＤ4与溴化氢活化的琼脂糖 4Ｂ的交联 …     

短肽库中血管内皮细胞生长因子受体Flt-1拮抗剂筛选条件的改进

目的:改进噬菌体肽库的筛选条件,提高筛选阳性率及阳性克隆重复性.使血管内皮细胞生长因子受体Flt-1拮抗剂的筛选更为有效.方法:通过对血管内皮细胞生长因子受体Flt-1的原核表达产物的变性复性处理,获得相对纯化的可溶性Flt-1受体.将该可溶性受体固相化,对噬菌体表达12肽库进行4 ～ 5轮Bio-panning后,挑取单个噬菌斑制备高滴度噬菌体上清.用ELISA法初步鉴定各噬菌体克隆与sFlt-1的特异性结合并测定阳性克隆的DN A 顺序.在Bio-panning过程中增加非特异性蛋白的预吸附,并减少输入噬菌体数量, 再次筛选短肽库.结果:经过第一次筛选,获得了一系列具有一定重复性与同源性的噬菌体克隆. 改进筛选条件后,筛选阳性率由2%提高到8.3%,阳性克隆的重复性也得到显著提高.该高重复阳性克隆的氨基酸顺序与前一次筛选获得的阳性克隆有较高同源性.结论:Bio-panning 条件的改进提高了筛选效率,为不纯蛋白筛选短肽库积累了经验,并为血管内皮细胞生长因子受体拮抗剂的研制奠定了基础.     

观察应用腹腔镜诊断和治疗盆腔子宫内膜异位症及不孕症的疗效

目的观察应用腹腔镜诊断和治疗盆腔子宫内膜异位症及不孕症的疗效。方法选取我院收治的因不孕症状为主的疑似盆腔子宫内膜异位症患者109例,所有患者均采取腹腔镜进行诊断,对于育龄妇女给与保守性手术进行治疗,对于年龄较大的患者给与半根治性或根治性手术进行治疗,所有患者在手术治疗结束后第3天开始给与药物进行辅助治疗。结果腹腔镜对盆腔子宫内膜异位症合并不孕的诊断敏感度86.2%,特异度为80.0%,与病理诊断结果比较差异具有统计学意义(P<0.05)。内膜异位症合并不孕的74例患者,有29例患者顺利妊娠,妊娠率为39.2%,异位妊娠发生率为0。术前表现为痛经和下腹痛的75例患者中,治疗后有52例得到显著缓减,有23例得到一定程度的缓减。患者的总体复发率为9.5%。结论腹腔镜手术对于盆腔子宫内膜异位症的临床诊断与治疗,具有能够一次完成,诊断准确率较高,手术创伤较小、恢复较快、疗效确切、术后妊娠率较高的优势。     

γ-突触核蛋白与肿瘤的关系

γ-突触核蛋白（γ-SYN）作为在乳腺癌中特异表达的基因，目前发现有更广泛的肿瘤表达谱，且主要表达在各种肿瘤的中晚期。作为特异的伴侣分子，γ-SYN通过与雌激素受体（ER）和纺锤体调控点蛋白BubR1等分子相互作用，促进了肿瘤细胞的增殖和转移。在肿瘤患者体液（血液、尿液）中可检测到γ-SYN，提示γ-SYN有可能作为肿瘤诊断和预后标志物，有潜在的临床应用前景。     

探讨宫腹腔镜联合治疗宫腔粘连的中远期效果

目的：探究与讨论宫腹腔镜联合治疗宫腔粘连（IUC）的中远期效果。方法：以来我院治疗宫腔粘连的212例患者作为研究对象,她们都进行了在腹腔镜监护下的宫腔镜宫腔粘连的切开手术。对以上的患者进行随访,着重了解她们月经量的变化情况、妊娠情况和痛经情况。结果：我们进行了1～3年的随访,其中失访患者12例,所以我们得到了200人的完整的随访资料。在分析随访资料以后,可知有145例患者月经量过少,但在治疗以后有134例患者都恢复正常。有妊娠希望的患者172例,达到目的的患者为86人。结论：应用宫腹腔镜来治疗宫腔粘连中远期的效果良好,值得在临床上推广使用。     

γ-突触核蛋白与肿瘤的关系

γ-突触核蛋白(γ-SYN)作为在乳腺癌中特异表达的基因,目前发现有更广泛的肿瘤表达谱,且主要表达在各种肿瘤的中晚期。作为特异的伴侣分子,γ-SYN通过与雌激素受体(ER)和纺锤体调控点蛋白BubRl等分子相互作用,促进了肿瘤细胞的增殖和转移。在肿瘤患者体液(血液、尿液)中可检测到γ-SYN,提示γ-SYN有可能作为肿瘤诊断和预后标志物,有潜在的临床应用前景。     

抗猪鼻支原体单克隆抗体的制备与鉴定

目的：制备抗猪鼻支原体(M．hyorhinis,M.hy)的单抗隆抗体(monoclonal antibody,McAb)，为相关研究提供工具。方法：用灭活的猪鼻支原体免疫BALB／c小鼠，运用传统的细胞融合技术制备抗猪鼻支原体单克隆抗体。单抗鉴定采用酶联免疫吸附实验(ELISA)和免疫组织化学(immunohistochemistry,IHC)方法。结果：经ELISA筛选获得了一株抗猪鼻支原体的单克隆抗体，该抗体亚类为IgG2b。ELISA结果表明该单抗仅与猪鼻支原体反应而与肺炎支原体和发酵支原体不反应。用经PCR检测支原体阳性的胃癌切片做免疫组化，结果显示，该抗体能与PCR阳性的胃癌组织切片产生特异性反应。结论：获得一株抗猪鼻支原体特异性单克隆抗体，可为相关研究提供工具。