MANF蛋白表达水平与肝纤维化程度的相关性研究

目的：探讨中脑星形胶质细胞源性神经营养因子(MANF)蛋白在慢性乙型肝炎病毒(HBV)感染患者肝纤维化发生发展中的作用及其与临床特点的相关性。方法采用相对和绝对定量同位素标记( ITRAQ)蛋白质组学和免疫组化法检测肝脏穿刺组织中MANF蛋白的表达,分析其表达水平与肝脏炎症纤维化分期的关系;采用实时荧光定量PCR技术检测正常对照( NC)、乙肝病毒携带者( ASC)、慢性乙型肝炎患者( CHB)及乙肝后肝硬化患者( LC)外周血白细胞中MANF mRNA的表达水平,分析其与不同阶段慢性HBV感染者的临床病毒学和生化学指标的相关性。结果 MANF蛋白主要在肝细胞质中表达,其表达水平随着肝脏炎症及纤维化的程度加重而升高。 NC 组、ASC 组和 CHB 组分别与LC组比较,MANF mRNA的表达差异均有统计学意义( P<0．01)。 MANF mRNA 的表达水平在乙肝病毒表面抗原(HBsAg)<1．5×106 IU/L、(1．5×106~2．0×107) IU/L和>2．0×107 IU/L 3组间差异有统计学意义(P<0．05);在乙肝病毒e抗原( HBeAg)阳性组与阴性组之间差异有统计学意义(P<0．01);在胆红素正常组与异常组之间差异有统计学意义( P <0．01)。结论 MANF 蛋白可能参与了慢性HBV感染者肝纤维化的发生发展,并与其临床特点相关。     

毛细管电泳-激光诱导荧光分析仪组装与性能测试

目的组装一台毛细管电泳-激光诱导荧光分析仪。方法以473 nm半导体泵浦固体激光器为激发光源,自制的激光诱导荧光检测器采用共线型光学结构,用VB2为模型化合物进行该分析仪的性能评价。结果 VB2的浓度检出限为2.0×10-9mol·L-1(7.5×10-7 g·L-1),质量检出限为4.0×10-18 mol(1.5×10-15 g),在1.0×10-8～1.0×10-6 mol·L-1浓度范围内呈线性相关。结论自组装毛细管电泳-激光诱导荧光分析仪具有结构简单,操作方便,灵敏度高等优点。     

慢性HBV感染者外周血白细胞GRP78、CHOP和XBP1 mRNA水平变化

目的探讨慢性HBV感染者外周血白细胞内质网应激相关基因糖调节蛋白78(GRP78)、CCAAT增强子结合蛋白同源蛋白(CHOP)和X盒结合蛋白l(XBP1)m RNA水平及其与临床指标的相关性。方法采用实时荧光定量PCR技术检测40例正常人(NC)、43例慢性无症状HBV携带者(ASC)、47例慢性乙型肝炎(CHB)、41例乙型肝炎肝硬化(LC)和35例乙型肝炎相关肝细胞癌(HCC)患者外周血白细胞GRP78、CHOP和XBP1 m RNA水平,分析其与病毒学和生化学指标的相关性。结果 ASC、CHB、LC和HCC患者外周血白细胞GRP78 m RNA水平和XBP1 m RNA水平分别为(0.58±0.53)和(0.76±0.57)、(0.59±0.67)和(0.50±0.64)、(1.07±1.09)和(1.44±1.00)和(1.17±1.69)和(0.90±1.33),均显著高于健康人[分别为(0.01±0.61)和(0.01±0.97),P0.01和P0.05];在HBs Ag1500IU/ml、1500~20000IU/ml和20000IU/ml组患者,GRP78 m RNA水平分别为(0.48±0.59)、(0.76±0.56)和(0.74±0.56),三组间差异有统计学意义(P0.05);HBV DNA水平为1×103~105copies/ml组XBP1 m RNA水平为(0.86±1.13),显著低于HBV DNA1×105copies/ml组[(1.44±1.31),P0.05];在不同转氨酶水平间、HBe Ag阳性与阴性组间和胆红素正常与升高组间,以上三种基因m RNA水平差异均无统计学意义(P0.05)。结论内质网应激可能与慢性HBV感染后的疾病进展相关。