动脉型肺动脉高压分子标志基因的筛选与鉴定

目的：本研究旨在筛选和鉴定参与动脉型肺动脉高压（pulmonary arterial hypertension,PAH）发病的关键基因及相关信号通路,为进一步的转化医学研究提供新靶点。方法：从美国国立生物技术信息中心的GEO(Gene Expression Omnibus)数据库中获取人GSE113439、GSE117261、GSE48149和GSE53408基因芯片数据集,经过数据筛选后确定PAH组103例和对照组56例进行比较分析。采用NetworkAnalyst软件筛选差异基因（differentially expressed genes,DEGs）,Enrichr和Metascape进行基因本体论（gene ontology,GO）和京都基因和基因组数据库（Kyoto Encyclopedia of Genes and Genomes,KEGG）分析,STRING和Cytoscape建立蛋白质-蛋白质相互作用（protein-protein interaction,PPI）网络确定潜在的枢纽基因。采用野百合碱构建PAH大鼠模型,通过测量血液动力学参数与组织形态学观察造模是否成功...     

美国的卫生系统科学教育及其思考

卫生系统科学(health system science,HSS)是研究卫生系统如何为患者提供卫生保健、患者如何接受和获得卫生保健以及卫生系统如何促进健康的科学。作为美国医学会的核心创新成果之一,HSS教育于2013年开始在美国医学院校试行。HSS与基础医学和临床医学相协同、互补,在患者保健和群体保健中发挥着重要的作用。本文介绍了美国的卫生系统科学的产生、其所包含的知识模块以及在美国医学院校中的实施情况;同时,结合我国医学教育的现状,对我国医学院校开展卫生系统科学教育进行了思考。     

甲状腺激素调节仔鼠脑基因差异表达的研究

目的　研究甲状腺激素调节仔鼠脑基因的分子机制。方法　丙基硫氧嘧啶灌胃制备孕鼠甲状腺功能减退模型 ,部分胎鼠出生后予以 T4 替代治疗 ,采用消减抑制杂交技术构建甲状腺激素调节仔鼠脑基因的差异表达文库 ,对部分重组克隆进行序列分析。结果　随机测序 10个表达序列标签 ,同源性分析表明 5个表达序列标签未发现明确的同源物 ,其它表达序列标签与 CDC10 ,酸性核糖体蛋白 P0 ,actin等有较高同源性。结论　甲状腺激素调节仔鼠脑基因的差异表达谱的获得对阐明甲状腺激素对脑发育的分子机理有十分重要的意义     

甲状腺素对仔鼠脑NAPOR基因表达的影响

目的研究甲状腺素对仔鼠脑成纤维母细胞瘤凋亡相关的RNA结合蛋白(neuroblastoma apoptosis-related RNA-binding protein,NAPOR)基因表达的影响。方法以丙基硫氧嘧啶灌胃复制孕鼠甲状腺功能低下模型,采用逆转录-聚合酶链反应检测仔鼠出生后第1、5、10天仔鼠皮层NAPOR的表达,年龄匹配的正常仔鼠为对照组。结果NAPOR在甲状腺功能低下孕鼠所产仔鼠表达均高于正常对照组;在出生后一段时期内,随着鼠龄增长表达降低。结论转录后水平的调节机制可能参与甲状腺素对脑基因表达的影响。     

上海大学生非酒精性脂肪肝与载脂蛋白E基因多态性的关系

目的 探讨上海大学生非酒精性脂肪肝(NAFLD)的患病率及与载脂蛋白E(ApoE)基因多态性的相关性.方法 对上海同济大学4 148名在校学生进行问卷调查;采用肝脏超声以及血肝功能、脂蛋白等生化指标检测,将确诊的NAFLD患者与正常者200例,进行外周血PCR-RFLP检测ApoE基因多态性.结果 (1)4 148名大学生中NAFLD检出398例(9.6%),NAFLD患者的体重指数、腰臀比、甘油三酯、总胆固醇、丙氨酸氨基转移酶(ALT)、天冬氨酸氨基转移酶(AST)、谷氨酰转移酶均高于对照组(P＜0.01),且随NAFLD程度加重,有递增趋势.(2)NAFLD组和对照组ApoE基因型分布比较差异显著(,P＜0.01).NAFLD E4/4基因型分布频率(5.5%)明显升高,E3/3分布频率(61.8%)明显减低(均P＜0.01).(3)非条件logistic回归分析显示总胆固醇、低密度脂蛋白胆固醇、腰臀比、AST、ALT、GGT与E4/4基因型密切相关.结论 ApoE基因112位和158位的氨基酸残基发生相应的变化可引起不同程度的脂质代谢障碍,E4/4可能是导致NAFLD发生的遗传因素之一.     

miR-124对Müller细胞转分化机制的影响

目的 探讨过表达miR-124对Müller细胞转分化机制的影响。方法 构建pSuper-EGFP-miR-124质粒并测序验证,获得miR-124的过表达载体。并用其转染Müller细胞系,用G418进行筛选,获得Müller细胞稳转株,将样本送基因芯片检测。利用TargetScan和miRBase Targets数据库预测差异表达明显的miR-124靶基因,通过Real-Time PCR和荧光素酶活性测定实验验证分析miR-124的靶基因,筛选变化比较显著的基因进一步研究。miR-124转染Müller细胞,提取mRNA和蛋白,采用Real-Time PCR、Western印迹法检测相关基因的变化。结果 成功构建pSuper-EGFP-miR-124质粒并获得了稳定转染的Müller细胞系。荧光素酶报告分析表明,miR-124与STAT3(signal transducers and activators of transduction-3, STAT3) 3′UTR相互作用。体外结果显示,pSuper-miR124转染Müller细胞后,STAT3表达下降并开始表达光感受器细胞标志物CRX(Cone-Rod Homeobox, CRX)和RCVRN(Recoverin, RCVRN)。结论 miR-124可能通过下调STAT3,上调CRX和RECVN,诱导Müller细胞向感光细胞转分化。     

GMFB在氧化应激诱导的ARPE19细胞中的表达及意义

目的 探讨胶质细胞成熟因子beta(GMFB)在氧化应激诱导的ARPE19细胞中的表达及意义。方法 用0、0.25、0.5、1、2mmol乙二醛处理ARPE19细胞24h,其中对照组用0mmol/L乙二醛处理,实验组以0.25～2mmol/L乙二醛处理,用Western印迹法检测GMFB的表达;实验组用1μg/ml GMFB处理ARPE19细胞24h,对照组不做处理,进行RNAseq,比较实验组和对照组基因表达的差异,选取其中表达差异大于1.5倍且P＜0.05的基因作为差异表达的基因,对其进行GO及KEGG富集分析。结果 经乙二醛处理的各组ARPE19细胞GMFB表达上调,以0.5mmol/L处理组的GMFB上调最为显著。对GMFB处理的ARPE19细胞进行全基因表达谱检测,结果显示,在被检测的19966个基因中,实验组和正常组间有显著差异表达(改变1.5倍)的基因有583个。与对照组相比,实验组基因表达显著上调的有265个,下调的有318个。GO分析表明,GMFB与细胞代谢、细胞催化等生物过程相关。KEGG分析显示,GMFB与细胞代谢通路、癌症通路、Wnt信号通路、趋化因子信号通路等多条信号通路密切相关。炎症基因CCL26、CXCL8和NF-κB1表达升高,提示GMFB与炎症相关。结论 GMFB在氧化应激诱导的ARPE19细胞中表达明显上调,GMFB可能影响细胞间连接,参与Wnt信号通路、肿瘤相关信号通路和趋化因子信号通路等。     

新生大鼠小脑内发育相关基因的筛选

为筛选脑发育相关的基因,应用新发展的抑制消减杂交技术,以新生大鼠小脑mRNA逆转录cDNA作为测试者(tester),成年大鼠小脑mRNA逆转录cDNA作为驱动者(driver),进行消减杂交,克隆制备成新生大鼠小脑高表达的cDNA文库.挑选出50个重组质粒,测序得到37个不同基因片段序列.再次用反Northern杂交确认有意义的差异表达基因.同时将测序结果与GenBank注册序列进行同源性比较,20个大鼠中首次测得的基因表达序列标签(EST)已被GenBank收录(BG695726-BG695745).     

人源促红细胞生成素在Müller细胞中拮抗谷氨酸毒性作用的研究

目的观察高浓度谷氨酸刺激条件下Mtiller细胞的变化以及促红细胞生成素（erythropoietin,EPO）的保护作用是否与维持Mtiller细胞的谷氨酸转运功能相关。方法用M1Tr法检测不同浓度谷氨酸处理大鼠原代视网膜Mtiller细胞和大鼠视网膜Miiller细胞系rMC一1所引起的细胞活力变化。选择能显著降低细胞活力的最低谷氨酸剂量建立细胞损伤模型,并研究不同浓度EPO干预后细胞活力的变化。TUNEL（terminal deoxynucleotidyl transferase—mediated dUTP nick—end labeling）法检测各组细胞凋亡情况,Western印迹法检测谷氨酸转运体GLSAT在蛋白水平的变化。结果无论是在原代大鼠Mtiller细胞还是rMC-1细胞系中,谷氨酸的细胞毒性作用均呈剂量依赖趋势。原代Miiller细胞中,12mmol／L谷氨酸使细胞活力降低15．5％,10mmol／L谷氨酸使rMC-1细胞活力降低15．6％;此时细胞凋亡明显增加,GLAST表达降低。0．2U／ml和0．5U／mlEPO分别对原代Mfiller细胞和rMC-1细胞的保护作用最佳,细胞凋亡数量显著减少,并防止了GLAST蛋白水平的降低。结论体外高浓度谷氨酸可损伤Mtiller细胞,EPO可以通过维持谷氨酸转运体GLAST水平等机制维持Mfiller对谷氨酸的正常摄取、抑制凋亡发生。     

生命科学整合实验课程建设与实践

生命科学综合实验面向医学生开设,融合细胞生物学、生物化学、遗传学、分子生物学、分子遗传学、免疫学等学科知识与技能。同济大学医学院2010年起实施以课程整合为特点的新课程体系,现从实验教学理念、教学内容、教学方法、师资队伍等方面探讨实施“整合生命科学”实验教学课程的效果及意义。