5-脂氧合酶激活蛋白在食管鳞状细胞癌组织中的表达及临床意义

目的:探讨5-脂氧合酶激活蛋白(FLAP)在食管鳞状细胞癌(ESCC)组织中的表达及临床意义。方法:收集经胃镜、手术病理结果等检查确诊为ESCC的297例患者的癌组织标本,并选取其中66例患者的癌旁相对正常的食管组织标本,使用免疫组织化学法检测FLAP表达情况。比较ESCC患者癌旁组织和癌组织FLAP阳性率,以及不同临床病理特征ESCC患者FLAP阳性率。分析FLAP阳性表达与ESCC患者不同临床病理特征的相关性。结果:ESCC组织标本FLAP阳性率高于癌旁组织标本(P<0.05)。肿瘤细胞转移扩散患者的FLAP阳性率高于肿瘤细胞未转移扩散患者,TNMⅢ期患者的FLAP阳性率高于Ⅰ-Ⅱ期患者,低分化患者的FLAP阳性率低于中、高分化患者(均P<0.05)。中、高分化患者间以及Ⅰ、Ⅱ期患者间的FLAP阳性率比较,差异无统计学意义(均P>0.05)。Kendall相关性检验结果显示,ESCC患者肿瘤细胞转移扩散、TNM分期与FLAP阳性表达呈正相关,分化程度与FLAP阳性表达呈负相关(均P<0.05)。结论:与癌旁组织相比,FLAP在ESCC组织中的表达显著增强,且...     

5-脂氧合酶激活蛋白抑制剂MK886对人食管癌细胞系增殖和凋亡的影响

目的 5-脂氧合酶活化蛋白（FLAP）抑制剂MK886对人食管癌细胞系（KYSE-150和TE-3）增殖和凋亡的影响及作用机制。方法用2.5、5、10、20、40和80μmol/L的MK886干预体外培养的KYSE-150和TE-3细胞;xCELLigence RTCA系统实时测定细胞增殖抑制率,同时确定半数抑制浓度(IC₅₀)。流式细胞测量术检测食管癌细胞的细胞周期。Western blot检测细胞凋亡和自噬相关蛋白的表达。结果人食管癌细胞系（KYSE-150和TE-3）的增殖抑制率随着MK886浓度增加而增强（P<0.05）,KYSE-150组的IC₅₀浓度为29.11μmol/L,TE-3组的IC₅₀浓度为27.47μmol/L。当MK886浓度增加至25μmol/L时,食管癌细胞G₀/G₁期滞后增加明显（P<0.001）,MK886处理浓度增加到50μmol/L时,食管癌细胞G₂/M期增加明显（P<0.001和P<0.05）...     

ELK-3蛋白在肝癌组织中的表达及其对肝癌HepG2细胞迁移和侵袭能力的影响

目的：探讨转录因子ELK-3与肝癌患者临床病理特征的关系及ELK-3对人肝癌HepG2细胞迁移和侵袭能力的影响,并阐明其作用机制。方法：选取80例肝癌患者癌组织及49例癌旁正常组织石蜡标本、18例肝癌患者癌组织及癌旁正常组织新鲜术后标本,采用免疫组织化学法和Western blotting法检测ELK-3蛋白在肝癌及癌旁正常组织中的表达,探讨ELK-3与肝癌患者临床病理特征的关系。选取处于对数生长期的人肝癌HepG2细胞,设立对照组（control-siRNA）和ELK-3干扰组（ELK-3-siRNA）,将ELK-3 siRNA转染至HepG2细胞,通过细胞划痕实验及体外Transwell小室实验观察肝癌HepG2细胞的迁移和侵袭能力。结果：石蜡组织标本免疫组织化学染色,与癌旁正常组织比较,肝癌组织中ELK-3蛋白阳性表达率明显升高（P<0.05）,且ELK-3蛋白阳性表达率与肝癌患者肿瘤数、TNM分期、Edmondson分级和门静脉浸润有关联（P<0.05）。新鲜术后标本Western blotting法检测,与癌旁正常组织比较,18例肝癌患者肝癌组织中ELK-3蛋白表达水平明显升高（P<0.05）。与对照组比较,ELK-3-siRNA组细胞的迁移距离明显变短（P<0.05）,侵袭细胞数明显减少（P<0.05）。结论：ELK-3在肝癌组织中的表达水平明显升高。干扰ELK-3会抑制肝癌细胞的迁移和侵袭,表明ELK-3蛋白可以通过抑制肝癌细胞的迁移和侵袭对其产生影响,从而在肝癌发生发展过程中起重要作用。     

干扰ELK-3抑制人肝癌细胞的上皮-间质转换

目的研究转录因子ELK-3与人肝癌细胞系Hep G2和Hu H7上皮-间质转换(EMT)的关系及其作用机制。方法将Hep G2和Hu H7细胞分为小干扰RNA转染组和Ras-ELK-3信号通路抑制剂(XRP44X)处理组。用Western blot检测ELK-3、ELK-3靶基因EGR-1以及EMT相关分子钙黏附素E(E-cadherin)、波形蛋白(vimentin)的表达和MAPK信号通路蛋白p38的表达。结果 ELK-3干扰或Ras-ELK-3信号通路抑制剂(XRP44X)处理肝癌细胞后其ELK-3和ELK-3的靶基因EGR-1的蛋白表达均显著降低(P0.01),E-cadherin表达水平升高(P0.01),vimentin的表达及p38磷酸化水平均降低(P0.01)。结论通过干扰ELK-3下调p38抑制EMT。     

基因组DNA库和cDNA库的同时建立及计算机管理

目的 介绍一种快速简便地同时建立基因组DNA库和cDNA库的方法及详细步骤,并强调计算机管理的重要性.方法 采5ml外周血,其中4ml分成2份用0.2％氯化钠处理收集白细胞,再用基因组DNA提取试剂盒抽提基因组DNA;另1ml血分成4份用直接裂解全血的方法提取RNA和一步合成法进行cDNA的合成.结果 用该方法建立的库中每个基因组DNA样本平均可以做1 200次PCR反应,每个cDNA样本平均可以做190次荧光定量PCR反应.结论 对同一患者,用该方法可以既保存基因组DNA又保存cDNA,而且方法简便、实用,加上合理的计算机管理,可以快速准确地从众多的DNA中查找到自己需要的样品.     

等位基因特异性PCR技术在5-脂氧合酶基因多态性检测中的应用

目的 探讨等位基因特异性PCR技术检测5-脂氧合酶基因六个位点的单核苷酸多态性(SNP)的效果.方法 采集36例哮喘患者外周静脉血2 mL,用0.2％氯化钠处理收集白细胞,采用基因组DNA提取试剂盒抽提基因组DNA,采用等位基因特异性PCR(AS-PCR)法直接对已知位点的SNP进行扩增分型.针对野生型和突变型设计3 ′端的碱基,且倒数第二位的碱基设计故意错配的碱基,用以提高引物的特异性.结果 5-脂氧合酶六个位点的SNP检测结果准确清晰.结论 采用本研究设计的引物可以对5-脂氧合酶的六个位点直接扩增分型;与测序法和限制性内切酶酶切法相比,等位基因特异性PCR技术检测5-脂氧合酶六个位点的SNP具有经济、快速、简便、易行等特点.