自由基与糖尿病性白内障

糖尿病性白内障的发病机制主要有渗透学说、非酶糖基化学说及氧化学说,氧化是关键因素.氧化应激导致的损害是自由基增多与抗氧化能力减弱的结果.本文就自由基的概况、自由基对晶状体的损伤作用与糖尿病性白内障的形成、人体内的抗氧化防御系统及抗氧化剂与糖尿病性白内障的研究等作一综述.     

激光周边虹膜成形术治疗高褶虹膜综合征致房角关闭的临床观察

目的观察激光周边虹膜成形术（1aser peripheral iridop lasty,LPI）对高褶虹膜综合征所致房角关闭的治疗效果。方法对15例（25只眼）高褶虹膜综合征所致房角关闭的周边虹膜切除术后进行激光周边虹膜成形术治疗,术后1周应用前房角镜观察房角粘连情况。随访2～12个月,平均8个月。结果术后3个月25只眼的平均眼压和平均用药指数从术前的（21.7±2.3）mmHg和（3.6±1.2）降到（16.8±1.3）mmHg和（1.4±0.95）,激光周边虹膜成形术后一周,部分患者周边虹膜前粘连减少、周边虹膜变薄,随诊期间未发现前房角进行性粘连及高眼压。结论激光虹膜成形术可以明显加深高褶虹膜综合征所致房角关闭的周边前房,增宽房角入口,从而预防房角粘连的进一步进展。     

血红素氧合酶-1介导金樱子在阿霉素心肌损伤大鼠中的保护作用

阿霉素（Doxorubicin,DOX）是一种广泛应用于肿瘤治疗的蒽环类抗生素,是临床上最有效的抗肿瘤药物之一.尽管其对包括白血病在内的多种恶性肿瘤具有抑制作用,但其蓄积性不可逆性心肌病以及充血性心衰限制了其使用[1].DOX导致的毒性心肌病原因很多,其中活性氧（ROS）、钙超载以及线粒体损伤介导的心肌细胞凋亡是其重要机制[2].近年来,某些药用植物在DOX所致的心肌细胞损伤中发挥重要作用[4],如上调血红素氧合酶（Heme oxygenase-1,HO-1）的表达,从而发挥抗氧化、抗凋亡等作用.     

金樱子联合氯沙坦对多柔比星心肌毒性的影响

目的:观察金樱子(Rosa Laevigata Michx,RLM)联合氯沙坦(losartan,LOS)对多柔比星(Doxorubicin,DOX)诱导的心肌损伤的影响。方法:SD大鼠随机分为5组:对照组、模型组、RLM组、LOS组及联合组。除对照组仅给予等体积0.9%氯化钠溶液外,其余4组采用DOX分6次腹腔注射,使其累计剂量达15 mg/kg进行造模。RLM和LOS分别按5 g/kg和0.7 mg/kg剂量单独或联合给予灌胃。测量血清中TNF-α、肌酸激酶(creatine kinase,CK-MB)及乳酸脱氢酶(lactate dehydrogenase,LDH)的含量;同时采用比色法测量过氧化氢酶(hydrogen peroxidase,CAT)、超氧化物歧化酶(superoxide dismutase,SOD)的活力以及丙二醛(Malondialdehyde,MDA)的含量。结果:与对照组比较,模型组心脏质量指数、血清TNF-α、CK-MB、LDH水平均升高,心肌组织中MDA、NO含量升高,SOD和CAT活性降低(P<0.05)。与模型组比较,给予RLM或/和LOS干预6周后,心脏质量指数、血清TNF-α、CK-MB、LDH水平均下调,心肌组织中MDA、NO含量均降低,SOD和CAT活性均升高(P<0.05),且联合组效应较单独给药组更加明显(P<0.05)。结论:RLM可协同LOS发挥对DOX诱导的心肌毒性的保护作用,其作用可能与其抗氧化和抗炎症特性有关。     

金樱子对阿霉素诱导心肌细胞凋亡的保护作用

目的探讨金樱子对大鼠阿霉素诱导心肌细胞凋亡的保护作用。方法SD大鼠随机分为空白对照组、阿霉素组模型组和金樱子干预组。模型组采用阿霉素（15mg／kg）分6次隔日腹腔注射,金樱子组按1～5g／kg体重给予金樱子灌胃,空白对照组仅给予等体积生理盐水。采用缺口末端标记法检N,b肌凋亡细胞,比色法检测Caspase-3的活性改变,荧光探针法检测活性氧（Reactiveoxygenspecies,ROS）的产生。Westernblot检测bcl-2和bax蛋白的表达。结果与模型组相比,金樱子能有效降低心肌细胞凋亡和Caspase-3的活性,并能降低细胞内ROS的产生。bcl-2和bax在正常心肌细胞中均有表达,阿霉素模型组bcl-2表达显著降低,bax表达上调,bcl-2／bax比率下降;金樱子可明显增加bcl-2／bax比率。结论金樱子能在一定程度上抑制阿霉素诱导的心肌细胞凋亡,其机制可能与抑制ROS产生,降低Caspase-3活性,上调bcl-2／bax比率有关。     

金樱子诱导HO-1表达对高糖条件下LECs活性氧产生及线粒体膜电位的影响

目的:观察金樱子(Rosa laevigata Michx.,RLM)对高糖条件下人晶状体上皮细胞(lens epithelial cells,LECs)活性氧(reactive oxygen species,ROS)产生和线粒体膜电位(itochondrial membrane potential,MMP)变化的影响,同时探讨血红素氧合酶-1(Heme oxygenase-1,HO-1)在此过程中的作用。方法:将体外培养的人LECs系SRA01/04细胞分为6组:对照组、高糖组、RLM处理组(高糖+2.5、5.0、10.0 g/L RLM)、HO-1沉默组(高糖+HO-1沉默+RLM 10.0 g/L),用荧光探针法检测细胞中ROS,罗丹明123染色检测MMP,Western blot检测HO-1表达。结果:⑴高糖组LECs细胞ROS产生较对照组增加,RLM处理后ROS的产生量随着RLM浓度的增高而减少(P均<0.01),RLM浓度为10.0 g/L时,ROS含量接近对照组(P>0.05);⑵高糖组MMP水平低于对照组水平(P<0.01),RLM处理后MMP水平较高糖组升高,至10.0 g/L时MMP与对照组差异无统计学意义(P>0.05);⑶与高糖组比较,RLM组HO-1表达增加,而干扰HO-1表达后,相对于10.0 g/L RLM组,干扰组ROS产生增加,MMP水平降低(P均<0.05)。结论:RLM能在一定程度上抑制高糖诱导的人LECs中ROS产生及MMP改变,该过程可能与其诱导HO-1的表达有关。     

二十二碳六烯酸经Rac1/NAPDH氧化酶/ROS/p38通路诱导ARPE-19细胞表达HO-1的机制

目的 观察二十二碳六烯酸(docosahexaenoic acid,DHA)诱导人视网膜色素上皮细胞表达血红素氧合酶(heme oxygenase,HO)-1的分子机制.方法 培养人视网膜色素上皮细胞系ARPE-19,加入30～ 100μmol·L-1 DHA作用4～24 h.ELISA法检测Rac1的活性,Western blot检测HO-1的表达及NADPH氧化酶p47phox亚基和p38的磷酸化;荧光探针H2DCFDA检测活性氧(reactive oxygen species,ROS)的产生;采用Rac1抑制剂NSC23766、NADPH氧化酶抑制剂DPI、ROS清除剂NAC预处理细胞,检测其对HO-1表达的影响.结果 30 μmol·L-1、50 μmol·L-1和100 μmol·L-1 DHA作用ARPE-19细胞10 min后,Rac1的活性分别为(126.41±11.25)％、(185.05±15.41)％和(260.52±17.83)％,与对照组相比,差异均有统计学意义(均为P＜O.05).同时,100 μmol·L-1 DHA也能诱导p47 phox亚基磷酸化.30 μmol·L-1、50 μmol·L-1和100μmol·L-1 DHA处理4h后,细胞内ROS的含量分别为(132.52±8.33)％、(177.94±10.24)％和(211.62±7.14)％,与对照组相比,差异也均有统计学意义(均为P ＜0.05).对照组细胞中磷酸化p38含量为0.16±0.01;当给予30 μmol·L-1、50 μmol·L-1和100 μmol·L-1 DHA处理30 min后,磷酸化p38含量分别为0.28 ±0.03、0.37±0.02和0.45±0.00,与对照组相比,差异也均有统计学意义(均为P＜0.05);采用Rac1抑制剂NSC23766或NADPH氧化酶抑制剂DPI处理后,p47phox亚基的磷酸化水平和细胞内ROS水平显著降低;而采用NAC处理后,可抑制DHA诱导ARPE-19细胞表达HO-1.结论 DHA可能通过Rac1/NAPDH氧化酶/ROS/p38通路途径诱导视网膜色素上皮细胞表达HO-1,从而发挥对细胞的保护作用.     

DADS上调miR-200b抑制视网膜母细胞瘤细胞的生长与侵袭

目的 探索miR-200b和二烯丙基二硫(DADS)相关的抑瘤机制,为揭示DADS抑制视网膜母细胞瘤生长及侵袭的内在分子机制提供理论依据.方法 采用qRT-PCR分别检测不同浓度的DADS对Y79细胞miR-200b表达的影响,DADS分别设置六种浓度:0 μmol/L、25 μmol/L、50 μmol/L、100 μmol/L、200 μmol/L和400 μmol/L.MTT和Transwell侵袭实验分别检测DADS和miR-200b对Y79细胞生长及侵袭能力的影响,将实验设置成五个组,即miRNA阴性对照组(瞬时转染scramble 40μmol/L);miR-200b组(瞬时转染miR-200b-mimics 40μmol/L);DADS阴性对照组(DMSO 10μmol/L,即mock组);DADS组(DADS 200μmol/L)和DADS+miR-200b组(瞬时共转染miR-200b-mimics 40μmol/L)和DADS (200μmol/L).结果 DADS可上调Y79细胞中miR-200b的表达,且其呈剂量依赖性(P<0.05);在MTT实验中,miR-200b组的OD值(0.549±0.057)较miRNA阴性对照组(0.737±0.135)明显降低;DADS组的OD值(0.508±0.064)较DADS阴性对照组(0.722±0.145)明显降低;而DADS+miR-200b组的OD值(0.362±0.081)较miRNA阴性对照组和DADS阴性对照组降低最为显著(P<0.05),即DADS可以通过上调miR-200b抑制Y79细胞的增殖能力.在Transwell侵袭实验中,外源性的高表达miR-200b组(105±13)较miRNA阴性对照组(162±12)能够显著抑制Y79细胞的穿膜细胞数,DADS组(102±13)较DADS阴性对照组(154±8)能够显著降低Y79的穿膜细胞数,且DADS+miR-200b组(77±8),细胞穿膜细胞数较miRNA阴性对照组和DADS阴性对照组减少最显著(P<0.05),即DADS通过上调miR-200b抑制Y79细胞侵袭.结论 DADS通过上调miR-200b的表达抑制视网膜母细胞瘤细胞的生长及侵袭.     

穿心莲内酯对肺癌细胞NF-κB的活性以及MMP-9表达的影响

目的:观察穿心莲内酯(Andrographolide,AD)对肺癌H3255细胞的生长抑制作用以及对基质金属蛋白酶(matrix metalloprotein,MMP)-9表达与活性的影响,并研究其可能的分子机制。方法:体外培养H3255细胞,MTT法检测细胞的增殖情况;RT-PCR检测MMP-9 mRNA表达,明胶酶谱实验检测其酶活性;Western blot检测NF-κB p65亚基的核转位以及IκB磷酸化情况。结果:AD能以剂量和时间依赖性方式抑制H3255细胞增殖;不同浓度的AD能降低MMP-9的mRNA表达水平和酶活性。结论:AD对肺癌细胞增殖具有抑制作用,其机制可能与抑制I-κBα磷酸化而抑制NF-κB激活,最终抑制MMP-9的活性有关。     

白藜芦醇对糖尿病性白内障大鼠晶状体上皮细胞凋亡及bcl-2和bax表达的影响

目的探讨白藜芦醇对糖尿病性白内障大鼠晶状体上皮细胞(lens epithelialcell,LEC)凋亡及bcl-2和bax表达的影响。方法取90只SpragueDawley大鼠随机分为正常对照组、糖尿病模型组和白藜芦醇治疗组,每组各30只。正常对照组给予常规饲料喂养,模型组大鼠采用链脲佐菌素(60mg.kg-1)诱发糖尿病,白藜芦醇治疗组在模型组基础上按400mg.kg-1体质量给予白藜芦醇灌胃,4周、8周、12周后观察晶状体混浊度的变化情况;同时采用流式细胞术检测LEC凋亡情况,比色法检测caspase-3的活性改变情氉况。并用Western blot检测LECbcl-2和bax蛋白的表达。结果白藜芦醇治疗组12周后,晶状体混浊度Ⅰ级、Ⅱ级、Ⅲ级、Ⅳ级、Ⅴ级改变分别为66.7%、23.3%、10.0%、0.0%和0.0%,与模型组(3.3%、20.0%、53.3%、13.3%、10.0%)相比差异有统计学意义(P<0.05)。模型组4周、8周和12周时,LEC凋亡率分别为(8.24±0.88)%、(12.86±1.12)%和(19.87±1.14)%,白藜芦醇处理后,凋亡率明显降低,分别为(5.62±0.56)%、(7.05±1.09)%和(10.53±1.25)%(均为P<0.05)。此外,白藜芦醇对LEC细胞caspase-3的活性也具有一定的抑制作用。bcl-2和bax在正常LEC中均有一定表达,糖尿病模型组bcl-2表达显著降低,bax表达上调,bcl-2/bax比值下降;白藜芦醇治疗组bcl-2/bax比值明显增加。结论白藜芦醇能在一定程度上抑制大鼠LEC凋亡,从而延缓白内障的发生和发展。