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目的 探究中药单体丹酚酸B(Sal-B)及其镁盐体外抑制SARS-CoV-2感染靶细胞的效果及作用机制。方法 利用感染性SARS-CoV-2及SARS-CoV-2假病毒体外细胞感染模型,检测Sal-B及其镁盐制剂注射用丹参多酚酸盐(ZDDY)的抗SARS-CoV-2活性;利用分子对接技术与分子动力学模拟技术,寻找Sal-B的抗病毒作用靶点;利用圆二色谱技术,检测六螺旋束(6-HB)的α-螺旋构象;利用SARS-CoV-2 S蛋白介导的细胞-细胞融合体系,检测Sal-B是否作用于新冠病毒入侵宿主的膜融合过程;利用流式细胞术,检测Sal-B是否作用于新冠病毒受体结合区RBD蛋白。结果 Sal-B与ZDDY在非洲绿猴肾细胞(Vero-E6)感染模型上抑制SARS-CoV-2的半数有效浓度EC50分为55.47 μmol/L,36.07 μg/mL;Sal-B与ZDDY抑制SARS-CoV-2的进入阶段,抑制SARS-CoV-2假病毒活性的IC50 分别为1.69 μmol/L,24.81 μg/mL;Sal-B可与SARS-CoV-2 S2亚基的8个氨基酸位点结合,亲和力为-8.2 kcal/moL,Sal-B在分子对接预测位点与 SARS-CoV-2 S2亚基稳定结合;Sal-B干扰SARS-CoV-2 HR1与HR2形成6-HB,显著降低6-HB的α-螺旋百分比(P<0.05);Sal-B浓度依赖性抑制SARS-CoV-2 S蛋白介导的细胞-细胞膜融合,IC50为3.33 μmol/L;Sal-B不影响SARS-CoV-2 RBD蛋白与受体ACE2结合。结论 Sal-B及其镁盐制剂ZDDY体外可有效抑制SARS-CoV-2感染靶细胞,Sal-B通过抑制病毒膜融合过程发挥抗SARS-CoV-2活性。 相似文献
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目的对来源于HIV-1中国流行株CRF07_BC的包膜糖蛋白gp41NHR结构域的N51进行表达和结构及抗原性分析。方
法运用重叠延伸PCR方法扩增出N51Fd基因,将其插入真核表达载体pFUSE-hIgG1-Fc2,并进行核苷酸序列测定。利用生物
信息学软件、圆二色谱法、免疫印迹法对表达的N51FdFc-BC重组蛋白进行结构和抗原性分析。结果成功构建pFUSE/
N51Fd-BC表达载体,并在真核表达体系实现了目的蛋白的高效表达。免疫印迹结果显示该重组蛋白大小约为35000,可与抗
HIV-1gp41N/C多肽的抗体反应。生物信息学分析显示N51FdFc-BC重组蛋白相对分子质量为34315.1,等电点PI为7.59,且
形成了无规则卷曲结构,易于与抗体反应,可作为抗原。圆二色谱的分析与生物信息学软件预测的结果一致。结论
N51FdFc-BC重组蛋白具有无规则卷曲结构,可适合作为HIV-1亚单位疫苗的免疫原。
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法运用重叠延伸PCR方法扩增出N51Fd基因,将其插入真核表达载体pFUSE-hIgG1-Fc2,并进行核苷酸序列测定。利用生物
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N51Fd-BC表达载体,并在真核表达体系实现了目的蛋白的高效表达。免疫印迹结果显示该重组蛋白大小约为35000,可与抗
HIV-1gp41N/C多肽的抗体反应。生物信息学分析显示N51FdFc-BC重组蛋白相对分子质量为34315.1,等电点PI为7.59,且
形成了无规则卷曲结构,易于与抗体反应,可作为抗原。圆二色谱的分析与生物信息学软件预测的结果一致。结论
N51FdFc-BC重组蛋白具有无规则卷曲结构,可适合作为HIV-1亚单位疫苗的免疫原。
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紫外线照射所致的DNA损伤对连接转化的影响 总被引:3,自引:2,他引:1
目的探讨DNA经不同波长紫外线照射与经紫外线照射不同时间所致损伤对基因库构建中DNA连接转化效率的影响。方法经改造的质粒DNA使用SfiI酶切过夜,1%琼脂糖凝胶电泳分离,在不同波长不同时间紫外线照射的条件下回收目的片断,并进行目的片断的连接转化,计数菌落数,计算转化效率。结果经302nm波长紫外线照射后,其连接转化的菌落数极少(60个/ngDNA),365nm波长紫外线照射条件下回收的DNA仍可被有效连接转化。在365nm波长紫外线照射下,与未经照射进行比较,当照射时间在30min,其连接转化成功率低于50%,而照射5min、15min的连接转化成功率仍高于70%,可满足大部分分子生物学实验的需要。回收的DNA连接转化的最大效率可超过20000个菌落/1ngDNA。结论在构建大容量基因库回收目的片断时,应避免紫外线的照射;在需要时,应选择在365nm波长紫外线照射条件下进行,且照射时间应尽量缩短,以不超过15min为宜。 相似文献
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目的以艾滋病病毒(HIV)gp41为作用靶点,设计合成了12个含芳基取代的苯甲酸类化合物,并对其进行抗HIV活性测
试。方法以卤代苯甲酸或间羧基苯硼酸为原料,通过Suzuki-Miyaura偶连反应及Knoevenagel缩合反应,引入含取代基的芳环
及芳杂环。ELISA法检测其抑制HIV gp41 六螺旋束形成的活性。荧光素酶法检测化合物抗HIV活性。结果化合物结构经
NMR、MS得到确认,其中5个化合物(7b、7c、7d、7e、7g)具有抑制HIV gp41六螺旋束形成的活性,其中7d活性最强。该化合物
能抑制HIV-1 SF33病毒株的复制,其IC50为20 μmol/L。结论合成的芳基苯甲酸类化合物7d能通过抑制HIV gp41六螺旋束结
构的形成来抑制HIV的复制。
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试。方法以卤代苯甲酸或间羧基苯硼酸为原料,通过Suzuki-Miyaura偶连反应及Knoevenagel缩合反应,引入含取代基的芳环
及芳杂环。ELISA法检测其抑制HIV gp41 六螺旋束形成的活性。荧光素酶法检测化合物抗HIV活性。结果化合物结构经
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能抑制HIV-1 SF33病毒株的复制,其IC50为20 μmol/L。结论合成的芳基苯甲酸类化合物7d能通过抑制HIV gp41六螺旋束结
构的形成来抑制HIV的复制。
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目的 应用动态血压监测法 ,评价卡维地洛对原发性高血压患者的疗效。方法 2 0例WHOI~II期原发性高血压患者 ,经安慰剂洗脱 2周后 ,口服卡维地洛 4周 ,剂量为 2 0~ 40mg/d ,一次服。治疗前后用动态血压监测仪 (Spacelab 90 2 0 7型 )各测 1次动态血压 ,并计算谷 /峰 (T/P)比值。结果卡维地洛主要降低白天血压 ,收缩压 (SBP)和舒张压 (DBP)分别下降8 2 %和 8 5 %。对夜间血压降压作用不明显 ,清晨血压基本回复治疗前水平。卡维地洛给药后心率减慢 ,降低幅度也是白天大于夜间。 2 0例病例中 ,有效病例 9例 ,SBP和DBP的T/P比值分别为 6 1 3%和 39 8% ,未达到美国食品与药品管理局(FDA)对每日一次给药的降压药规定的T/P比值标准。结论卡维地洛能有效地控制白天血压 ,但在清晨降压作用不明显。建议给药剂量最好每日两次 ,每次 10~ 2 0mg 相似文献
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作用于gp41的HIV融合抑制剂高通量筛选方法的研究 总被引:7,自引:3,他引:4
目的 对作用于gp4 1的HIV融合抑制剂筛选方法进行研究和改进 ,使其成为更加简便的高通量药物筛选模型。方法 采用夹心ELISA方法 ,检测HIVgp4 1六股α 螺旋束的形成。结果 以特异性识别HIVgp4 1六股α 螺旋束的单克隆和多克隆抗体为基础建立的改良夹心ELISA方法 ,特异性好 ,准确性高 ,更为简便和经济 ,能稳定有效地检测样品对 gp4 1六股α 螺旋束形成的抑制作用。 结论 本研究建立的改良方法可作为高通量药物筛选方法 ,用于从中草药库、噬菌体肽库和微生物发酵液等复杂组分样品中筛选作用于 gp4 1的HIV融合抑制剂 ,以研究开发抗HIV药物 相似文献