医学生基础阶段科研能力的培养初探

医学生科研素质的培养是医学院校培养合格人才的重要组成部分,结合工作实际,从以教学为抓手激发学生对科研的兴趣、活动成员的有效筛选、及时对学生进行心理疏导以及学校政策的有利支持等方面总结了经验,并提出了目前学生科研工作中尚存在的一些需要改善和解决的问题。     

刚地弓形虫RH株速殖子外泌体的分离与鉴定

目的: 分离与鉴定刚地弓形虫（Toxoplasma gondii）RH株速殖子外泌体。方法: 收集弓形虫速殖子与人结肠癌SW480细胞共培养上清液,经离心、过滤,采用基于聚合物沉淀技术的试剂盒法分离外泌体;透射电镜观察外泌体形态特征,纳米颗粒跟踪分析（nanoparticle tracking analysis,NTA）检测外泌体粒径大小,蛋白质印迹法检测外泌体经典标志分子CD63、HSP70以及弓形虫特异蛋白表面抗原1（surface antigen 1,SAG1）、棒状体蛋白16（rhoptry protein 16,ROP16）、ROP18和致密颗粒蛋白1（dense granule protein 1,GRA1）。结果： 从弓形虫与细胞共培养上清液中分离出囊泡样物质,其外形为圆形,有完整的膜结构,直径为30~150 nm;表达外泌体特异性蛋白CD63、HSP70;检测出弓形虫特异性蛋白SAG1、ROP16、ROP18和GRA1。结论： 从弓形虫速殖子与SW480细胞共培养上清液中获得弓形虫外泌体。     

闺房“魔术师”:我将野蛮老公变身温柔情人

我一直喜欢"怀抱"这两个字。初中三年级军训时,我们要在太阳底下暴晒,长时间立正,上下身必须"纹丝不动"。结果,我坚持了3分多钟就轰然倒下,手疾眼快的后排男同学阿亮一个箭步过来,揽腰把我扶住,并迅速自作主张地把我抱到树荫下……这是我一辈子都不会忘记的镜头。后来的后来,这个叫阿亮的男生就成了我的丈夫。     

Caspase-3在出生后大鼠海马中的表达

目的 探讨Wistar大鼠海马生后发育过程中,活化的Caspase-3与凋亡之间的关系. 方法 应用免疫荧光方法观测活化的Caspase-3和赫斯特荧光染料33342(Hoechst 33342)在生后不同时期大鼠海马CA1、CA3区和齿状回(DG)中的表达情况. 结果 在CA1区,活化的Caspase-3的表达在生后7d(P7)达到高峰;在CA3区,P2达到高峰,然后逐渐减弱.在DG,P7后又有所增强,到P14达到高峰,并在所观测的其余时段维持此水平.观测的3个区的凋亡细胞数目都在P7达到高峰,然后逐渐减少. 结论 在大鼠海马生后发育过程中,活化的Caspase-3的表达存在特定的时空格局.活化的Caspase-3在CA1区与CA3区有丝分裂后期细胞和DG神经前体细胞中的作用和机制不同.     

NR1、NR2A与PSD-95在生后大鼠海马发育中的表达

目的:探讨N-甲基-D-天冬氨酸受体亚单位1(N-methy1-D-aspartate receptor subunit1,NR1)、N-甲基-D-天冬氨酸受体亚单位2A(N-methy1-D-aspartate receptor subunit2A,NR2A)与突触后密度蛋白-95(Postsynapticdensity protein 95,PSD-95)在Wistar大鼠海马生后发育过程中的表达。方法:应用免疫荧光染色方法检测NR1、NR2A与PSD-95在生后不同时期大鼠海马CA1、CA3区和齿状回(DG)中的表达情况。结果:NR1于生后各期海马CA1、CA3区和DG的表达均增强,P14~P21达高峰期后减弱。NR2A于生后在海马CA1和CA3区的表达略有减弱,P4后增强至高峰期P14,然后轻微减弱,在DG中NR2A的表达生后略有减弱,P4后在增强的趋势中于P7、P14和P28后均有不同程度的减弱,高峰期在P28。PSD-95于生后各期海马CA1、CA3区和DG的表达均增强,P21~P28达高峰期后轻微减弱。结论:NR1、NR2A和PSD-95在CA1、CA3区和DG中的表达具有特异的时空分布模式,此模式可能与其在生后发育中发挥的不同生理功能相关。     

阴道毛滴虫巨噬细胞迁移抑制因子的原核表达及多克隆抗体制备

目的: 原核表达阴道毛滴虫巨噬细胞迁移抑制因子（macrophage migration inhibitory factor of Trichomonas vaginalis,TvMIF）并制备多克隆抗体。方法: 采用PCR技术扩增TvMIF基因,并克隆至pTG19 T载体,酶切及测序鉴定后,再定向插入pET 30a(+)载体。将重组载体转化至大肠埃希菌BL21（DE3）中,用IPTG诱导蛋白表达。采用镍柱亲和层析法纯化TvMIF蛋白,并免疫新西兰白兔制备多克隆抗体,蛋白质印迹法检测多克隆抗体。结果： 从阴道毛滴虫cDNA中扩增出TvMIF基因片段,测序结果与基因库收录序列一致。成功构建pET 30a TvMIF重组质粒,重组TvMIF蛋白约为15.5 kDa,以可溶性蛋白形式存在。获得TvMIF重组蛋白的多克隆抗体,蛋白印迹法检出TvMIF的特异性条带。 结论： 成功获得阴道毛滴虫MIF蛋白并制备了多克隆抗体,可用于后续研究阴道毛滴虫致病机制。     

激发学习兴趣提高教学成效

人体解剖学是引领医学生真正步入神圣医学殿堂的第一课.如何将医学新生对于人体解剖结构的好奇心有效的转化为对解剖学学习的极大热情,是影响教学效果的重要因素.结合多年教学实践,从上好第一次课;建立畅通的师生交流通道;多角度激发学生记忆潜能及组织小型竞赛等几方面进行了介绍和探讨.     

钙/钙调蛋白依赖性蛋白激酶Ⅱ在大鼠生后海马发育中的表达

目的 探讨Wistar大鼠生后海马发育过程中钙/钙调蛋白依赖性蛋白激酶Ⅱ（CaMKⅡ）的表达。 方法 应用免疫荧光方法检测CaMKⅡ在生后不同时期大鼠海马CA1、CA3区和齿状回（DG）中的表达情况（n =48）。结果 CaMKⅡ于生后各期海马CA1区和DG的表达逐渐增强，生后第10天（P10）达高峰期，此后逐渐减弱；于CA3区的表达在P4和P10时均较高。其中，CaMKⅡ在CA3区的表达高于在CA1区和DG的表达，在多形层和分子层的表达高于在锥体细胞层或颗粒细胞层的表达。结论 CaMKⅡ在CA1、CA3区和DG中的表达具有特异性的时空分布模式，这可能与其在生后发育过程中的突触发生，树突、轴突形成，海马的成熟以及学习记忆功能相关。     

CBL教学法在夜大专升本神经解剖学教学中的应用

介绍在夜大专升本神经解剖学中实施CBL教学法的应用体会。通过结合具体病例对病例构建、问题设计、组织实施及规范化教学等进行系统分析,探讨该教学法的优缺点。     

人可溶性生长刺激表达基因2蛋白的真核表达、纯化和鉴定

目的构建人可溶性生长刺激表达基因2(sST2)蛋白的重组真核表达载体,获得高纯度的人sST2重组蛋白。方法根据人sST2基因序列设计引物,利用RT-PCR技术获得人sST2基因;构建人sST2-pcDNA3.1-his(-)重组真核表达载体;脂质体法转染COS7细胞,表达人sST2重组蛋白,并用镍柱亲和层析法纯化;用western blot和ELISA法对人sST2重组蛋白进行鉴定。结果PCR扩增产物用琼脂糖凝胶电泳分析,结果显示产物长度与预期一致,约为1000 bp;同源性比对分析结果显示,人sST2基因成功插入PGH-T载体;用Bam HⅠ和Hin dⅢ对重组真核表达载体双酶切后凝胶电泳分析,结果显示产物电泳位置与预期一致;表达产物经SDS-PAGE电泳结果显示在相对分子质量(M r)约为65000处有一明显条带,与预期蛋白质位置一致;western blot鉴定结果显示人sST2重组蛋白有His标签,ELISA鉴定结果显示人sST2重组蛋白有与抗sST2抗体结合的特异性抗原表位。结论通过重组DNA技术成功构建人sST2基因重组真核表达载体,通过蛋白质纯化技术成功获得人sST2重组蛋白。