加减益经汤对雌性SD去势大鼠学习记忆障碍的防治作用及其机制研究

目的行为学、组织切片以及生物化学的研究方法探讨"加减益经汤"对雌性去势大鼠学习记忆障碍的预防治疗作用及其机制。方法采用双侧卵巢去势的方法造出阿尔茨海默症(Alzheimer’s disease,AD)大鼠模型。将60只大鼠随机平均分为空白组、模型组、中药低剂量组、中药中剂量组、中药高剂量组、雌激素组,每组10只;对大鼠进行水迷宫训练与测试,应用免疫印迹检测各个实验组大鼠海马各区Tau蛋白磷酸化位点和糖原合成酶激酶-3β(Glycogen sunthase kinase-3β,GSK-3β)及磷酸化的GSK-3β的表达水平,同时检测雌激素受体-α(Estrogen receptor-α,ERα)的表达水平。应用高尔基染色观测大鼠海马神经发育的情况,应用尼氏染色检测大鼠海马神经元的数量。结果加减益经汤能够缩短去势大鼠找到平台的时间,提升在目标象限的运动路程和时间,降低大鼠海马Tau蛋白磷酸化位点的磷酸化水平以及GSK-3β活性表达,增加ERα的水平,能够提高神经元轴突棘密度和数量,增加海马各区神经元的密度和数量。结论加减益经汤可以有效预防去势雌性大鼠在学习和认知障碍上的改变,保护大脑的学习记忆能力,其作用机制可能是通过降低GSK-3β活性表达从而降低Tau蛋白相关位点的磷酸化水平,发挥了类雌激素作用,最终保护了海马区神经细胞的形态和功能,预防了阿尔兹海默病的发生。     

柴胡越鞠汤对CUMS诱导的抑郁症模型大鼠治疗作用及其机制

目的:根据柴胡越鞠汤对慢性不可预测轻度应激(CUMS)诱导的抑郁症模型大鼠具有治疗作用,探讨其作用机制。方法:将60只SD大鼠随机分为正常组、模型组、柴胡越鞠汤低、中、高剂量(0.3,0.6,1.2 g·kg~(-1))组及盐酸氟西汀组(0.2 mg·kg~(-1))。通过CUMS造模5周,再以柴胡越鞠汤和盐酸氟西汀连续灌胃给药3周。灌胃最后1周时行水迷宫训练及测试,最后1 d灌胃后检测糖水偏好及其他行为学实验;糖水偏好实验检测大鼠用药前后快感缺乏程度;旷场试验检测大鼠用药前后抑郁情况;水迷宫测试大鼠用药前后空间学习记忆能力;蛋白免疫印迹法(Western blot)检测各组海马中肿瘤坏死因子-α(TNF-α),5-羟色胺受体1A(5-HT1A),细胞外信号调节激酶(ERK)及突触相关蛋白表达情况;高尔基和尼氏染色观察海马CA3区神经元中树突棘和尼氏小体变化情况。结果:与正常组比较,模型组体质量、糖水偏好率、水平运动和垂直运动得分明显下降(P0.05),不动时间明显延长(P0.05),学习记忆能力明显下降(P0.05);Western blot结果显示其海马组织中TNF-α蛋白明显增高(P0.05),5-HT1A,p-ERK,环磷酸腺苷反应元件结合蛋白(CREB),p-CREB,突触素-1(Synapsin~(-1)),突触囊泡蛋白(Synaptophysin),谷氨酸受体亚型-1(GluR-1)和突触后膜蛋白-95(PSD-95)蛋白相对表达量明显降低(P0.05),高尔基染色显示其树突棘密度降低,其尼氏体着色变浅,神经元受损明显;与模型组比较,盐酸氟西汀组、柴胡越鞠汤中、高剂量组大鼠体质量、糖水偏好率、水平运动和垂直运动得分明显增加(P0.05),不动时间明显缩短(P0.05),海马组织中Synaptophysin,GluR-1和PSD-95蛋白表达明显升高(P0.05),柴胡越鞠汤高剂量组大鼠脑海马组织中TNF-α降低更明显(P0.05),5-HT1A,p-ERK,CREB,p-CREB,Synapsin~(-1)蛋白表达升高更加明显(P0.05),且树突棘密度明显增高(P0.05),尼氏小体数量明显增多(P0.05),着色变深,并呈剂量依赖性。结论:柴胡越鞠汤能增加抑郁症模型大鼠体质量,改善其抑郁样绝望程度以及自主活动和学习记忆能力,其作用机制与该方能降低脑海马炎症反应,提高5-HT1A,ERK和突触相关蛋白表达水平,最终激活5-HT/CREB和ERK/CREB信号通路,增加海马神经元树突棘数量,修复受损神经元有关。