两性霉素B/聚乙二醇-聚谷氨酸苄酯纳米球溶血毒性的研究

目的:考察两性霉素B/聚乙二醇-聚谷氨酸(AmB/PEG-PBLG)纳米球是否能降低AmB的溶血毒性.方法:超微透析法制备AmB/PEG-PBLG纳米药球,用紫外分光光度法测定样品的溶血率.结果:AmB/PEG-PBLG纳米药球平均粒径142.1 nm,载药量27.55%;溶血率从低到高依次为:PEG-PBLG空白纳米球、脱氧胆酸钠、AmB/PEG-PBLG纳米药球、AmB注射液.结论:AmB/PEG-PBLG纳米药球能有效降低AmB的溶血毒性.     

小径微孔聚氨酯人工血管的顺应性

由激光测微器、压力传感器、A／D卡、微电脑和循环回路等组成的装置测定了小径人工血管的径向顺应性，由微注射器、压力传感器等组成的装置测定了体积顺应性，轴向顺应性由体积顺应性和径向顺应性计算出。体积顺应性，径向顺应性和轴向顺应性都随血管材料弹性的增大、盐／胶比的增加（孔隙率）和浸渍层数（血管壁厚度）的减小而增大。PU血管的外周模量与径向模量分别由径向顺应性。轴向顺应性计算，外周模量与径向模量之比值接近1，即两模量大小与变形方向无关。外周模量与径向模量随血管材料弹性和盐／胶比增加而变小。但管壁厚度对其的影响不大。通过合理选择更具弹性的PU材料（Chro佳，PCU1500次之），最佳盐／胶比例（6：1）以及控制浸渍层数（4～6层），可以制备出顺应性接近天然血管的小径人工血管。     

促进胚胎干细胞来源造血干/祖细胞移植后细胞免疫功能恢复

目的:体外诱导胚胎干细胞分化为造血干/祖细胞过程中, 增加成熟T淋巴细胞的含量, 以促进其重建致死量照射小鼠的造血功能后免疫功能的早期重建。方法:胚胎干细胞在含甲基纤维素的培养基中自由分化形成胚胎体, 分化第6d添加造血生长因子, 同时添加胸腺肽, 流式细胞仪检测分化细胞中CD₃₄⁺的造血干/祖细胞和CD⁺₃的成熟T淋巴细胞含量, 最后将分化细胞注射入致死量照射小鼠体内, 观察60d, 以移植物抗宿主病(GVHD)发病率作为T淋巴细胞免疫功能的指标, 用PCR检测Sry反映移植细胞在宿主体内的存活。结果:分化第13d, 未加胸腺肽, CD⁺₃的成熟T淋巴细胞含量仅10.52%, 重建造血后无GVHD发生;添加胸腺肽, CD⁺₃的成熟T淋巴细胞含量升高达22.93%, 重建造血后GVHD发病率100%。结论:胚胎干细胞体外分化为造血干/祖细胞过程中, 添加胸腺肽, 能增加CD⁺₃的成熟T淋巴细胞含量, 体内重建造血后细胞免疫功能恢复较快。     

重组蛇毒纤溶因子rFⅡ偶联到聚氨酯表面及其纤溶活性评价

目的：通过聚氨酯表面偶联重组蛇毒纤溶因子rF Ⅱ来提高其纤溶活性。方法：在聚氨酯（PU）表面上涂覆含羧基硬段的聚氨酯溶液（PU1）制备羧基化表面聚氨酯（CPU）,并用次甲基蓝吸附法测定表面羧基含量;在CPU表面上用EDC接枝双端氨基聚乙二醇（PEG）,并用滴定法测定该表面的PEG接枝量;在CPU-PEG表面用EDC偶联重组蛇毒纤溶因子（rF Ⅱ）,并用放射性同位素法测定该表面的rF Ⅱ偶联量,最后用试管定量法评价样品的纤溶活性。结果：CPU表面羧基含量为6.9μmol/cm^2,CPU-PEG2k和CPU-PEG4k表面PEG含量分别为0.162和0.180μmol/cm^2,CPU-PEG2k-^125Ⅰ-rFⅡ和CPU-PEG4k^125Ⅰ-rFⅡ表面rF Ⅱ含量分别为13.6和38.9ng/cm^2,与对照样品相比都有很大的提高。纤溶活性评价表明,所有偶联rF Ⅱ样品的纤溶活性都有提高,抗血栓性能得到有效改善。结论：具有PEG间隔臂偶联rF Ⅱ的样品其纤溶活性比没有PEG间隔臂的样品更优,采用PEG4k间隔臂偶联rF Ⅱ样品的纤溶活性为最高。     

微波凝固肝癌细胞活性的酶组织化学检测

目的比较HE染色和酶组织化学染色对判断微波消融灭活肝癌细胞活性的价值。方法用10W、1.5～2min(85～95℃)和5W、1.5～2min(55～65℃)两种条件的微波消融,分别治疗A、B两组(每组3只)小鼠移植型肝癌,并取微波消融前后的肿瘤组织标本制成切片,进行常规HE染色及琥珀酸脱氢酶的酶组织化学染色,在显微镜下观察两种染色的情况。结果从HE染色观察到,A、B两组小鼠肝癌组织在微波消融后的即刻,其细胞核形态和排列较消融前无明显改变。酶组织化学染色显示,A组肿瘤消融区内的琥珀酸脱氢酶的活性均消失,这说明了癌细胞的灭活;B组肿瘤消融区内上述的酶活性都呈散在阳性,提示部分癌细胞仍存活,A、B两组的肿瘤灭活效果明显不同(Ρ<0.01)。结论HE染色不能评价微波消融对肝癌的即刻灭活效应,用酶组织化学染色测琥珀酸脱氢酶的活性能判定MA对肝癌的灭活效果。     

尘螨变应性鼻炎全血细胞IL-4、IL-13的表达及临床意义

目的探讨IL-4、IL-13在变应性鼻炎发病机制中的作用及IL-4、IL-13拮抗剂治疗变应性鼻炎的临床意义。方法取52例变应性鼻炎（实验组）及25例无过敏性疾病（对照组）患者的外周血，用PMA（phorbol 12-myristate 13-acetate佛波酯）＋inomycin（离子霉素）及标准化尘螨抗原刺激后经细胞内染色，流式细胞仪检测IL-4、IL-13、IFN-γ的表达细胞百分数，ELISA检测血清IL-4、IL-13含量。结果对照组经标准化尘螨变应原刺激后细胞内测出IFN-γ为0．3％-0．4％，但检测不到IL-4与IL-13，经PMA＋inomycin刺激后IFN-γ为5．0％-12．4％、IL-4为0．5％-0．8％、IL-13为0％-0．2％；实验组经标准化尘螨变应原刺激后IFN-γ为0．3％-0．5％、IL-4为0．9％-1．3％、IL-13为0．5％-0．9％，经PMA＋inomycin刺激后IFN-γ为17.3％-24．0％、IL-4为2．1％-3．5％、IL-13为0．8％-2．0％。实验组血清中IL-4含量为（1．768±0．485）pg／ml、IL-13为（5．427±1．263）pg／ml，对照组IL-4与IL-13含量均低于敏感度。结论IL-4、IL-13在变应性鼻炎患者中表达升高，参与了变态反应过程，为临床应用IL-4、IL-13拮抗剂治疗变应性鼻炎提供了依据。     

冠心病干细胞移植疗法种子细胞体外诱导分化的实验研究

目的　为探讨冠心病的干细胞移植疗法提供理想的种子细胞来源。方法　收集健康成人骨髓 ,通过Ficoll离心法获得骨髓单个核细胞 ,置于纤维连接蛋白预衬的DMEM培养基中 ,用血管内皮生长因子 (vascularendothelialgrowthfactor,VEGF)和碱性成纤维细胞生长因子 (basicfibroblastgrowthfactor,bFGF)加以诱导 ,并通过荧光显微镜和免疫组织化学方法对诱导后的细胞进行形态学观察和鉴定。结果　在VEGF、bFGF等诱导因子存在的条件下 ,骨髓单个核细胞分化成为内皮祖细胞 ,倒置荧光微镜下呈典型的“纺锤样”梭形细胞 ,单层细胞贴壁生长融合时呈铺路石样排列 ,免疫组织化学示vWF抗体染色阳性 ,CD34抗体染色阳性。结论　成人骨髓单个核细胞在特定条件下可诱导分化成为内皮祖细胞 ,此细胞可作为冠心病干细胞移植疗法的种子细胞。     

系统性红斑狼疮患者骨髓基质细胞因子表达及对免疫功能的影响

 【目的】研究系统性红斑狼疮（SLE）患者骨髓基质细胞因子表达情况,及其对外周血淋巴细胞增殖反应的影响,探讨SLE的发病机制。【方法】采用ELISA方法观察SLE患者骨髓基质细胞培养液IL-6、MIP-1、IFN-γ、TGF-β等细胞因子的表达,采用四甲基偶氮唑盐比色法（MTT）,观察基质细胞培养上清液对外周血淋巴细胞增殖反应的影响。【结果】SLE患者骨髓基质细胞培养液IL-6、MIP-1、IFN-γ浓度明显增高,TGF-β则降低,3种细胞因子与SLEDAI评分相关;正常人及SLE患者骨髓基质细胞上清液均对刀豆蛋白A诱导的外周血淋巴细胞增殖有明显的抑制作用,而SLE患者的上清液抑制作用明显低于正常人;在分别加入抗MIP-1、抗IFN-γ单抗后,骨髓基质细胞上清液对外周血淋巴细胞增殖的抑制作用明显增强,而加入抗TGF-β单抗后,抑制作用明显减弱。【结论】SLE患者骨髓基质细胞对外周血淋巴细胞增殖的抑制作用较弱,与其部分细胞因子异常表达有关,骨髓基质细胞可能与SLE的发病、发展有一定关系。     

聚α－氨基酸膜的药物渗透性研究

目的：研究炔诺孕酮（ＮＧ）对白氨酸－谷氨酸－谷氨酸甲酯共聚物膜的渗透性及其影响因素。方法：测定聚α－氨基酸膜的吸水率，ＮＧ对它的渗透系数以及缓释药囊的体外释药试验。结果：聚α－氨基酸膜的化学组成对它们的药物渗透性有极其重要的影响。聚合物的谷氨酸含量越大，其吸水率越大，ＮＧ对其的渗透性也越大。根据药物渗透系数求得释药速率的计算值与药囊体外释药试验的实验值是接近的。结论：聚α－氨基酸膜对药物的渗透系数是缓释药物装置释药速率研究的重要依据。     

小径聚氨酯人工血管内皮化种子细胞的体外诱导分化及种植

[目的]探讨体外诱导骨髓单个核细胞分化成为内皮祖细胞，为小径聚氨酯人工血管内皮化提供合适的种子细胞的可行性。[方法]收集健康成人骨髓单个核细胞，置于纤维连接蛋白预衬的DMEM培养基中，用血管内皮生长因子(vascular endothelial growth factor，VEGF)和碱性成纤维细胞生长因子(basic fibroblast growth factor，bFGF)加以诱导，通过荧光显微镜和免疫组化分析等方法观察和鉴定诱导后的细胞。将诱导分化的内皮祖细胞种植到聚氨酯小径人工血管表面，用扫描电镜观察。[结果]在VEGF、bFGF等诱导因子存在的条件下，骨髓单个核细胞分化成为内皮祖细胞，倒置荧光显微镜下呈典形的“纺锤样”梭形细胞，单层细胞贴壁生长融合时呈铺路石样排列，免疫组化示VWF和CD34抗体染色阳性。扫描电镜下，未种植细胞的聚氨酯小径人工血管表面呈典型的多孔蜂窝状结构，孔径大小比较适合内皮祖细胞爬行。种植细胞后，聚氨酯小径人工血管表面有大量的内皮祖细胞黏附、爬行及铺展生长，有时可见内皮祖细胞长入蜂窝状孔径内。[结论]体外诱导骨髓单个核细胞分化为内皮祖细胞可作为小径聚氨酯人工血管内皮化的种子细胞。