miR-27a-3p对肝癌细胞化疗敏感性的影响及机制探讨

背景与目的：肝细胞肝癌是一种临床上常见的恶性肿瘤,由于其对化疗药物的耐受,常导致预后较差。microRNA（miRNA,miR）是一类长链非编码小RNA,参与肿瘤的多种生物学功能。miR-27a-3p作为代谢相关的miRNA被广泛地研究,而与化疗敏感性之间关系的报道较少。通过探讨miR-27a-3p参与肝癌化疗敏感性及其可能机制,为肝癌化疗提供新的理论依据。方法：应用癌症基因组图谱（The Cancer Genome Atlas,TCGA）数据库分析miR-27a-3p在肝细胞肝癌患者癌组织与癌旁组织中的表达。采用Lipofectamine ^TM 3000脂质体瞬时转染方法,将miR-27a-3p过表达质粒和阴性对照质粒（miR-control）转染肝癌细胞株HepG2,将敲低质粒miR-inhibitor-27a-3p和阴性对照质粒（miR-inhibitor-control）转染PLC细胞,分别加入不同浓度的顺铂（cisplatin,DDP）处理48 h,采用四甲基偶氮唑蓝（methyl thiazolyl tetrazolium,MTT）法检测细胞增殖情况;采用流式细胞术检测细胞凋亡;蛋白［质］印迹法（Western blot）技术检测磷脂酰肌醇3激酶和蛋白激酶B（phosphoinosmde-3-kinase/protein kinase B,PI3K/AKT）信号通路相关的蛋白表达。结果：miR-27a-3p在肝癌组织中的表达明显低于癌旁组织（P＜0.05）;在HepG2过表达细胞中,MTT结果显示,实验组miR-27a+DDP细胞对DDP的半数抑制浓度（IC ⁵⁰ ）为（1.02±0.03）μg/mL,较对照组miR-control+DDP（1.27±0.08）μg/mL、空白对照组+DDP（1.73±0.08）μg/mL均降低（P＜0.05）;细胞凋亡分析结果显示,实验组miR-27a+DDP的凋亡率［（31.03±0.20）%］显著高于对照组+DDP［（18.51±2.96）%］和空白对照组+DDP［（8.73±1.58）%］（P<0.05）;Western blot检测结果显示,miR-27a+DDP组的PI3K表达水平（0.28±0.01）较DDP组［（0.43±0.01）］、miR-27a组（0.57±0.11）及miR-control组（0.72±0.01）降低（P<0.05）;miR-27a+DDP组的p-AKT的表达水平（0.29±0.01）与DDP组（0.46±0.05）、miR-27a组（0.67±0.01）及miR-control组（0.10±0.01）相比明显降低（P<0.05）;而miR-27a+DDP组的C-caspase的表达水平（0.69±0.01）则高于DDP组（0.51±0.01）、miR-27a组（0.35±0.01）及miR-control组（0.18±0.01）,差异有统计学意义（P<0.05）。进一步将miR-27a-3p在PLC细胞中敲低,并于DDP中刺激培养,MTT、细胞凋亡和Western blot实验结果显示,与HepG2过表达细胞的结果趋势相反,差异均有统计学意义（P<0.05）。结论：miR-27a-3p可能通过调节PI3K/AKT信号通路调控肝癌细胞株对DDP的化疗敏感性,有望成为增强肝癌DDP化疗敏感性的潜在治疗靶点。     

食管鳞状细胞癌差异表达基因的筛选及功能分析

目的 通过生物信息学方法分析食管鳞状细胞癌组织与癌旁正常组织之间的差异表达基因及关键基因。方法 自基因表达综合（GEO）数据库下载的基因芯片数据集GSE38129、GSE17351、GSE92396中筛选出食管鳞状细胞癌与癌旁正常组织之间的差异基因,通过DAVID数据库对差异基因行功能富集分析,通过京都基因与基因组百科全书（KEGG）数据库对差异基因进行相关通路分析,通过Cytoscape构建蛋白-蛋白互作网络并从中找出关键基因,应用UALCAN数据库对关键基因进行表达分析。结果 本研究共筛选出食管鳞状细胞癌与癌旁正常组织中共同表达差异且差异有统计学意义的基因250个。差异基因主要作为细胞组件（CC）中的细胞-细胞黏附连接、细胞外环境等参与生物学途径（BP）中的核糖核酸聚合酶Ⅰ启动子转录的正调控、氧化还原反应、细胞黏附等作用,参与的分子功能（MF）有蛋白质结合、钙离子结合、细胞间黏附等功能。后从250个基因中筛选出13个关键基因,13个基因在食管鳞状细胞癌组织与正常食管组织中的表达情况比较,差异均有统计学意义（P﹤0.05）。结论 通过生物信息学的方法对差异基因和关键基因进行分析,探寻...     

新疆地区5577例原发性肝癌的流行病学特点分析

目的分析新疆地区原发性肝癌（PHC）的临床流行病学特点,为制定合适的防治措施提供参考。方法收集整理2002年1月至2014年12月新疆医科大学第一附属医院诊疗的5577例PHC患者的临床资料,对其性别、族别、发病年龄、户口分布、肝炎病毒阳性率进行回顾性分析。结果5577例PHC患者中,男女之比为3．45：1;汉族、维吾尔族、哈萨克族、回族及其他民族（锡伯族、满族、蒙古族）所占的比例分别为79．67％、9．86％、4．55％、3-31％、2．61％,且维吾尔族与汉族的构成比差异有统计学意义（P〈0．05）。4232例患者进行了乙型肝炎表面抗原（HBsAg）检测,3833例患者进行了丙型肝炎抗体（HCV—Ab）检测。HBsAg呈阳性者2560例（60．49％）,HCV．Ab呈阳性者490例（12．78％）;维吾尔族的乙型肝炎病毒检测阳性率为35．52％,哈萨克族的乙型肝炎病毒检测阳性率为40．00％,均低于汉族（65．68％,P〈0．05）。PHC患者中城市人口与农村人口分别为3589例（64．35％）和1988例（35．65％）。结论PHC患者易患人群为肝炎病毒阳性患者,新疆地区维吾尔族与哈萨克族PHC患者中的乙型肝炎病毒阳性率明显低于汉族,在临床上应采取相应的防治措施。     

DCTPP1基因在乳腺癌中的表达及其生物信息学分析

目的 利用肿瘤数据库挖掘数据分析DCTPP1基因在乳腺癌组织中的表达及与患者预后的相关性,探讨DCTPP1基因的生物学作用及功能.方法 利用ualcan数据库分析乳腺癌组织中的DCTPP1基因mRNA表达水平,利用Human Protein Reference Database数据库分析不同病理类型乳腺癌组织中DCTPP1蛋白表达水平,采用GEPIA乳腺癌数据分析DCTPP1基因的表达水平与乳腺癌患者预后的相关性.在gene-mania和WebGestalt数据库对与DCTPP1基因表达相关基因及其功能进行生物信息学分析,探讨基因功能.结果 与正常乳腺组织比较,乳腺癌组织中DCTPP1基因mRNA呈高表达(P<0.05).不同病理类型、不同肿瘤分期的乳腺癌组织中DCTPP1基因均呈高表达(P<0.05).乳腺癌组织中DCTPP1蛋白表达水平高于正常乳腺组织.与低表达比较,DCTPP1基因高表达明显降低乳腺癌患者总体生存时间(HR=1.9,P<0.05).基因功能分析提示与DCTPP1表达相关的20个基因主要位于细胞质、细胞核及细胞膜性结构中,参与细胞的代谢、生物调节、细胞生长等过程,在结合蛋白、酶活性、结合核酸等过程中发挥着作用.结论 DCTPP1基因在乳腺癌中明显高表达,与乳腺癌患者不良预后相关,参与多种生物过程,可能成为乳腺癌治疗干预的新靶点.     

GOLM1在肺腺癌组织中的表达及对A549细胞增殖、迁移和侵袭能力的影响

目的:探讨高尔基磷蛋白2(Golgi phosphoprotein 2,GOLPH2,又称为GP73或GOLM1)在肺腺癌组织中的表达及对A549细胞增殖、迁移、侵袭能力的影响.方法:从GEPIA数据库分析肺腺癌组织中GOLM1 mRNA表达情况及与肺腺癌患者预后的相关性;利用慢病毒siRNA技术下调人肺腺癌A549细...     

细粒棘球绦虫表面抗原EpC1的生物信息学分析北大核心CSCD

目的采用生物信息学方法分析细粒棘球绦虫表面抗原EpC1的结构和功能等。方法从NCBI数据库中下载EpC1氨基酸序列,采用ProtParam预测蛋白的理化性质,SignalP-5预测信号肽,Euk-mPLoc 2.0进行亚细胞定位,ProtScale、SOSUI、DNASTAR预测其亲疏水性,SOMPA预测二级结构,NetPhos预测磷酸化位点,MotifScan预测修饰位点,Swissmodel预测三级结构,TMHMM分析跨膜区域;运用ABCpred、IEDB预测B细胞抗原表位,SYFPEITHI预测T细胞抗原表位。结果预测EpC1由174氨基酸序列组成,分子式为C_(884)H_(1403)N_(245)O_(268)S_(9),不稳定指数为46.27,为亲水蛋白,无信号肽和无跨膜区,且定位于细胞膜及细胞质中。二级结构中α螺旋占44.25%,β折叠占14.94%,β转角占5.75%,无规则卷曲占35.06%,EgEpC1具有能与HLA-A*02-01的结合能力,且能被HLA-DRB*0401(DR4Dw4)分子呈递。结论生物信息技术分析EpC1蛋白存在多个B、T细胞表位,含有钙结合结构域,可为该蛋白的基因克隆表达及细粒棘球绦虫感染的防治研究提供理论基础。     

电子束对体外培养的细粒棘球蚴及其p38 mRNA表达的影响

目的 观察电子束照射对体外培养的细粒棘球蚴形态结构、死亡率及其p38 mRNA表达的影响。方法采集自然感染的绵羊肝中的细粒棘球蚴原头蚴,随机分成3组,分别用0 Gy、30 Gy、60 Gy的不同剂量的6 MeV电子束各照射1次,照射后连续培养3 d、14 d,光镜观察虫体的大体变化及死亡率,qRT-PCR法测定p38基因的表达水平。结果60 Gy组较0 Gy、30 Gy组原头蚴变性坏死数目明显增多,死亡率有差异（P<0.0125）,连续培养天数（3 d、14 d）对虫体死亡率无影响。经电子束照射后,30 Gy、60 Gy组原头蚴p38 mRNA表达水平较0 Gy组升高（P<0.05）。结论 体外培养的原头蚴经电子束照射后大体形态结构发生明显变化、死亡率升高,且与电子束的剂量存在量效关系;p38 mRNA的表达量随着电子束的剂量的增加而升高,p38基因可能参与电子束所致体外杀伤棘球蚴的作用机制。     

DCTPP1基因在乳腺癌中的表达及其生物信息学分析

目的 利用肿瘤数据库挖掘数据分析DCTPP1基因在乳腺癌组织中的表达及与患者预后的相关性,探讨DCTPP1基因的生物学作用及功能.方法 利用ualcan数据库分析乳腺癌组织中的DCTPP1基因mRNA表达水平,利用Human Protein Reference Database数据库分析不同病理类型乳腺癌组织中DCTPP1蛋白表达水平,采用GEPIA乳腺癌数据分析DCTPP1基因的表达水平与乳腺癌患者预后的相关性.在gene-mania和WebGestalt数据库对与DCTPP1基因表达相关基因及其功能进行生物信息学分析,探讨基因功能.结果 与正常乳腺组织比较,乳腺癌组织中DCTPP1基因mRNA呈高表达(P<0.05).不同病理类型、不同肿瘤分期的乳腺癌组织中DCTPP1基因均呈高表达(P<0.05).乳腺癌组织中DCTPP1蛋白表达水平高于正常乳腺组织.与低表达比较,DCTPP1基因高表达明显降低乳腺癌患者总体生存时间(HR=1.9,P<0.05).基因功能分析提示与DCTPP1表达相关的20个基因主要位于细胞质、细胞核及细胞膜性结构中,参与细胞的代谢、生物调节、细胞生长等过程,在结合蛋白、酶活性、结合核酸等过程中发挥着作用.结论 DCTPP1基因在乳腺癌中明显高表达,与乳腺癌患者不良预后相关,参与多种生物过程,可能成为乳腺癌治疗干预的新靶点.     

细粒棘球绦虫表面抗原热休克蛋白抗体在免疫组化中的应用

目的 用生物信息工具分析细粒棘球绦虫表面抗原热休克蛋白70(EgHSP70)的理化性质、结构域等信息，并制备多克隆抗体进行人、羊、小鼠肝包虫病的免疫组化研究。方法 EgHSP70氨基酸序列经NCBI数据库中下载，用ProtParam(性质)、SignalP-5(信号肽)、SOSUI(亚细胞定位)、ProtScale、SOSUI、DNASTAR(亲疏水性)、SOMPA(二级结构)、Swissmodel(三级结构)、TMHMM(跨膜区域)工具分析。制备多克隆蛋白抗体，分别进行人、绵羊、C57BL/6J小鼠肝包虫的免疫组化染色。结果 EgHSP70是由258个氨基酸序列组成，分子式为C₁₂₄₈H₂₀₂₄N₃₅₄O₃₉₂S₂,不稳定指数为42.00,为亲水蛋白，无信号肽，无跨膜区，且定位于细胞质中。二级结构中，α螺旋占47.29%,β折叠占16.28%,β转角占8.53%,无规则卷曲占27.91%。免疫组化结果显示，EgHSP70多克隆抗体能够在细粒棘球绦虫的生发层(包囊)细胞中高表达...