微囊化人头皮毛乳头细胞诱导小鼠耳毛囊再生的研究

目的 观察人头皮毛乳头细胞海藻酸钠-多聚赖氨酸-海藻酸钠（alginate-polylysine-alginate，APA）微囊是否具备诱导小鼠耳部毛囊再生的功能；寻找理想的微囊直径。方法 以APA微囊包裹体外分离培养的人头皮毛乳头细胞；将毛乳头细胞微囊移植至小鼠耳部皮下，6周后局部取材行组织学检查；共聚焦显微镜下观察葡聚糖-荧光素在APA微囊中的扩散速度和扩散方式，并对比相同时间、不同直径的APA微囊中葡聚糖-荧光素的强度，综合分析确定最佳的微囊直径。结果 组织学检查显示：移植部位皮下有密集的同心圆状毛囊结构形成，其数量、大小、分化程度等与对照组明显不同。荧光素以同心圆状、逐层渗透的方式向APA微囊中扩散；相同时间内荧光强度比较：小囊组〉中囊组〉大囊组。结论 微囊化毛乳头细胞具备诱导毛囊再生的生理功能；微囊理想的直径是400μm。     

易性癖外科治疗三例

我科自1996年12月至1998年11月共收治男性易性癖患者3例,效果较好。1临床资料本组3例,均为男性,外生殖器正常,年龄24~25岁,未婚。1例有自残行为,2例有较稳定的同性朋友。3例术前均感精神痛苦,与社会隔离,自我封闭。3例患者术前均具备必须完成的手续:精神病院易性癖诊断;公安部门及父母同意转性的证明;本人要求接受转性手术的申请。2典型病例例1,患者男,24岁,未婚,汉族,理发师,小学文化。8岁起喜欢着女装,说话声调及走路姿势皆模仿女性。15岁时厌恶自己的男性生殖器官,觉得很累赘,18岁后佩戴胸罩,涂脂抹粉,对镜自赏,戴耳环,描眉,抹口红,与同…     

反义c-myc寡脱氧核苷酸联合188Re放射治疗对家免髂总动脉损伤后平滑肌细胞增殖的影响

目的 观察反义c-myc寡脱氧核苷酸联合188Re放射治疗对家兔髂总动脉损伤后平滑肌细胞增殖的影响,探讨反义c-myc寡脱氧核苷酸(ODN)联合188Re防治再狭窄的潜在作用.方法 通过球囊导管损伤家兔髂总动脉后,利用充盈188Re液的球囊导管对血管行照射后,将反义c-myc ODN通过pluronic gel缓释系统和Lipofectin转染导入系统,将其作用于损伤血管的外膜,3周后对所取的血管节段进行组织切片和α-actin免疫组化染色,在显微镜下进行形态观察和采用图像分析系统进行图像分析,计算出动脉内膜α-actin染色阳性细胞百分比,并进行统计学分析.结果 通过形态观察和计算α-actin染色阳性细胞百分比,发现单纯反义c-myc ODN和188Re放射治疗,以及两者联合均能明显抑制平滑肌细胞增殖,且后者比前两者抑制效果更明显.结论 反义c-myc ODN联合188Re放射治疗能显著抑制内膜平滑肌细胞的增殖.     

人Wnt10b基因真核表达载体的构建及表达鉴定

目的：利用基因工程技术构建人Wnt10b基因的pEGFP-N1-Wnt10b真核表达载体,观察其在COS-7细胞中的表达。方法：以pUC19-Wnt10b为模板,PCR扩增人Wnt10b基因的cDNA编码区序列,扩增产物和pEGFP-N1载体双酶切,T4 DNA连接酶连接,构建pEGFP-N1-Wnt10b,酶切和测序鉴定该载体;LipofectamineTM2000将该载体转染入COS-7中,Western blot和免疫细胞化学检测COS-7 Wnt10b蛋白表达。结果：PCR扩增出的人Wnt10b基因cDNA正确克隆到pEGFP-N1载体,成功构建了pEGFP-N1-Wnt10b;将其转染入COS-7,COS-7 Wnt10b蛋白表达明显增高。结论：成功构建了人pEGFP-N1-Wnt10b,这为进一步研究Wnt10b基因功能奠定了前期基础。     

吻合小隐静脉的腓肠神经营养血管逆行皮瓣的临床应用

目的探讨吻合小隐静脉的腓肠神经营养血管逆行皮瓣转移修复下肢软组织缺损的临床效果。方法7例下肢软组织缺损,应用吻合小隐静脉的腓肠神经营养血管逆行皮瓣修复小腿远1/3胫前、足背、足跟、踝部软组织缺损。皮瓣切取面积8 cm×6 cm~18 cm×10 cm。结果7例皮瓣全部成活,随访6~40个月,平均24个月,皮瓣质地优良,外观及功能满意。结论吻合小隐静脉的腓肠神经营养血管逆行皮瓣切取方便,血供丰富且不牺牲主要动脉,静脉血回流通畅,适合修复小腿远1/3胫前、足背、足跟、踝部软组织缺损。     

改良小切口皮下修剪法腋臭根治术的并发症分析及临床疗效评估

目的:探讨改良小切口皮下修剪法腋臭根治术的手术及术后包扎方法对并发症的发生及临床疗效的影响。方法:对80例腋臭患者采用小切口皮下修剪法根治,根据术后包扎方法分为3组:常规包扎组、常规包扎+负压引流组、弹力绷带包扎组,分析各组出现皮下积血、皮片坏死等并发症的情况,并通过随访评估其临床疗效。结果:负压引流或弹力绷带包扎可明显减少皮下积血及皮片坏死的发生率,减少瘢痕形成,而去除异味效果无显著区别,综合临床疗效提高。结论:改良小切口皮下修剪法腋臭根治术的手术方法、术后包扎及护理方法可明显减少并发症的发生,提高临床疗效。     

应用多个扩张器联合超量皮肤扩张术治疗先天性巨痣

目的:探讨应用多个扩张器联合扩张皮肤软组织,并延长扩张时间、增加扩张量治疗先天性巨痣的临床疗效。方法:应用皮肤软组织扩张术修复躯干部巨痣9例,手术分两期进行。一期手术:在巨痣周围设计扩张器大小、形状及置入部位,扩张器容量为200～1000ml,扩张时间为3～6个月,扩张器结束时液体量为额度容量的2～5倍;二期手术:取出扩张器,切除巨痣,扩张皮瓣转移修复皮肤缺损。结果:扩张过程无1例出现扩张器因超量扩张出现破裂、渗漏,无出现血肿、感染、扩张器外露或注射壶渗漏等并发症。随访时间6个月到5年,患者术后的皮瓣颜色、质地佳,外观满意。结论:多个扩张器联合应用并延长扩张时间,增加注水量,可以产生更多的额外皮肤,修复躯干部先天性巨痣效果良好。     

人工毛乳头最佳直径的选择

目的 观察葡聚糖-荧光素在APA微囊中的扩散方式,对比其在不同直径APA微囊中的扩散速度,确定最佳的人工毛乳头直径;对比最佳直径人工毛乳头的微囊膜与毛乳头基膜的通透性,以进一步评价微囊膜的通透性能. 方法 在共聚焦显微镜下,分别观察分子量10、40、70ku的葡聚糖-荧光素在APA微囊中的扩散速度和扩散方式,对比、分析相同时间、不同直径的APA微囊中葡聚糖-荧光素的强度,结合囊内细胞数量及成囊所需电压等因素,确定最佳的人工毛乳头直径;比较最佳直径人工毛乳头的微囊膜与新鲜分离的毛乳头基膜的通透性. 结果 相同分子量、相同时间内荧光强度的比较:小囊组>中囊组>大囊组,大囊组、小囊组间的差异具有极显著的统计学意义(P<0.01);大囊组与中囊组间的差异具有显著的统计学意义(P<0.05);直径400μm微囊中的荧光强度高于新鲜分离毛乳头中的荧光强度. 结论 直径约400μm人工毛乳头的微囊膜能保证营养物质、代谢产物和信号分子的自由进出,其内部结构适合毛乳头细胞聚集性生长的特性,且其制作过程对细胞的影响较小.     

微囊法体外重建人头皮毛乳头诱导毛囊再生功能的评价

目的：利用海藻酸钠-多聚赖氨酸-海藻酸钠（alginate-polylysine-alginate，APA）微囊，将分离培养的毛乳头细胞包裹其中，实现毛乳头的体外重建，并观察其诱导毛囊再生的能力。方法：实验于2003-10/2004-03在汕头大学医学院第一附属医院组织工程实验室完成。一步酶消化法分离人头皮毛乳头，并在体外培养扩增毛乳头细胞；利用高压电场微囊发生器，以APA微囊包裹分离培养的毛乳头细胞；光镜及电镜观察对比新鲜分离的毛乳头及人工重建的毛乳头(即毛乳头细胞微囊)；将人工重建的毛乳头移植于裸鼠背部皮下，对其诱导功能进行评价。结果：体外重建的毛乳头与新鲜分离的人头皮毛乳头在大体形态及超微结构方面均非常相似人工重建的毛乳头移植裸鼠背部4周后，组织学观察证实：移植处皮肤可见发育完整的毛囊结构形成。结论：人工重建的毛乳头(毛乳头细胞微囊)不但具备新鲜分离的人头皮毛乳头的形态特征．而且具备其诱导毛囊再生的生理功能。     

一步酶消化法高效快速分离培养人头皮毛乳头细胞

目的：寻求高效、快速体外培养人头皮毛乳头细胞的方法。方法：将含有毛囊中下部的皮下脂肪剪碎，加入胶原酶I进行消化，以吸管机械吹打帮助毛乳头游离后进行培养；对其贴壁率、细胞迁出率、工作强度、污染机会与显微解剖法、显微解剖加酶消化法进行比较。结果：“一步酶消化法”能显著降低工作强度、减少污染机会，并保留了显微解剖加酶消化法促进毛乳头贴壁和细胞迁出的优点。结论：“一步酶消化法”是一种高效、快速分离培养人头皮毛乳头细胞的方法。