褪黑素对大鼠移植肝组织GRP-78及CHOP表达的影响

目的通过检测褪黑素(MEL)对肝移植大鼠肝脏内质网应激(ERS)通路相关分子葡萄糖调节蛋白-78(GRP-78)及CCAAT增强子结合蛋白同源蛋白(CHOP)表达的影响,探讨MEL对移植肝的作用。方法采用"磁环法"制作大鼠原位肝移植模型,雄性SD大鼠随机分为3组:假手术组(Sham组)、原位肝移植组(OLT组)、原位肝移植+褪黑素处理组(OLT+MEL组),每组各8只。术后24 h,获取血清样本及肝脏标本。检测血清丙氨酸转移酶(ALT)及天冬氨酸转移酶(AST)水平,苏木素-伊红(HE)染色观察各组肝组织病理学改变,采用聚合酶链反应和蛋白免疫印迹试验检测GRP-78及CHOP的信使核糖核酸(mRNA)和蛋白表达水平。结果与Sham组比较,OLT组血清ALT、AST显著升高(均为P0.01),肝组织损伤严重,GRP-78及CHOP在mRNA和蛋白水平表达明显增加(均为P0.01)。与OLT组比较,OLT+MEL组大鼠ALT、AST水平明显降低(均为P0.05),肝组织损伤减轻,GRP-78及CHOP mRNA和蛋白表达水平明显降低(均为P0.05)。结论褪黑素能降低移植肝ERS相关分子GRP-78及CHOP在mRNA和蛋白水平的表达,这可能是它减轻移植后肝脏损伤的机制之一。     

自身免疫性肝病与病毒性肝炎肝硬化肝移植预后差异配对分析

目的分析自身免疫性肝病(AILD)与病毒性肝炎肝硬化肝移植的预后差异及预后影响因素。方法回顾性分析2002年1月至2017年1月行肝移植的75例受者临床资料。将受者分为AILD组(25例)和病毒性肝炎肝硬化组(50例)。观察受者的术中情况,包括器官热缺血时间、冷缺血时间、手术时间、无肝期、输血量;观察术后并发症发生情况,包括重度急性肾损伤(AKI)、感染、急性排斥反应、胆道相关并发症、血管相关并发症、移植后糖尿病(PTDM);观察出院后随访情况。分析肝移植受者预后的影响因素。结果 AILD组与病毒性肝炎肝硬化组的器官热缺血时间、冷缺血时间、手术时间、无肝期比较,差异均无统计学意义(均为P0.05)。AILD组受者术后急性排斥发生率高于病毒性肝炎肝硬化组受者(P0.05),术后重度AKI发生率低于病毒性肝炎肝硬化组受者(P0.05)。AILD组术后1、3、5年生存率分别为92%、87%、87%,病毒性肝炎肝硬化组术后1、3、5年生存率88%、88%、88%,两组受者累积生存率的差异均无统计学意义(均为P0.05)。单因素分析结果显示年龄、终末期肝病模型(MELD)评分、重度AKI、感染、胆道相关并发症等5个指标是受者预后的影响因素(均为P0.05)。结论 AILD组和病毒性肝炎肝硬化组受者移植术后总体生存预后无明显差异,年龄、MELD评分、重度AKI、感染、胆道相关并发症是影响肝移植预后风险因素。     

小鼠羊水间充质干细胞的分离、培养及鉴定

目的探讨小鼠羊水间充质干细胞(AF-MSC)的分离、培养及鉴定。方法在无菌条件下获取孕鼠子宫,收集羊水后进行过滤和离心,对沉淀细胞团进行培养并传代。观察AF-MSC的形态,分析AF-MSC的增殖特点,采用流式细胞术鉴定AF-MSC的表面标志物,检测AF-MSC的三系分化能力及冷冻复苏后的细胞活力。结果小鼠AF-MSC呈典型的梭形,融合度>80%时会出现典型的漩涡状结构。小鼠AF-MSC传代培养无明显潜伏期,培养2~3 d进入对数增长期,增长速度最快,之后增殖速度减慢,进入平台期。AF-MSC表达干细胞抗原(Sca)-1、CD29、CD44,不表达CD34、CD45。小鼠AF-MSC成骨分化后,矿化结晶被茜素红染成深红色的点状;成软骨分化后,分泌的酸性粘多糖被阿利新蓝染成淡蓝色;成脂分化后,胞质脂滴被油红O染成红色。细胞冷冻复苏后存活率>95%,生长状态良好,6 d时增殖能力高于冻存前(P<0.05),其他时间增殖能力与冻存前比较,差异无统计学意义(均为P>0.05)。结论本实验成功分离了小鼠AF-MSC,过程简便、成本低,且分离的细胞可随传代次数的增加而纯化,冻存不影响其增殖能力。     

建立小鼠腹部心脏移植模型联合尾静脉注射的实践体会(附视频)

目的总结建立稳定的小鼠腹部心脏移植模型联合尾静脉注射的实践体会。方法实验练习包括50对供、受体为昆明小鼠的同系移植,40对供、受体为C57BL/6J小鼠的同系移植;正式实验包括10对供、受体为C57BL/6J小鼠的同系移植,30对以Balb/c小鼠为供体、C57BL/6J小鼠为受体的同种异系移植。记录手术过程中每个步骤的时间(包括供体心脏摘取和修整时间、受体血管吻合等)。术后每日观察移植心脏搏动持续时间及受体存活时间,同时记录移植小鼠的尾静脉注射所需时间。同系移植术后30 d、同种异系移植术后7 d行移植心脏病理学检查(各5只)。结果正式实验心脏移植成功率为90%。供体心脏摘取和修整时间为(13.9±0.6)min,受体冷缺血时间为(14.2±1.2)min,血管吻合时间为(34.2±3.1)min,总手术时间为(86.6±5.4)min,术后同系移植小鼠移植心脏存活时间达到100 d以上,术后30 d病理学检查显示仅有少量炎症细胞浸润。同种异系移植小鼠因发生排斥反应,存活时间为(7.2±0.5)d。术后7 d病理学检查示心肌大量炎症细胞浸润,呈急性细胞性排斥反应表现。尾静脉注射超过200次后,成功率达90%。结论本研究成功建立了稳定的小鼠腹部心脏移植模型。同时进行尾静脉注射可有效地利用预实验的小鼠。