肝细胞癌的蛋白质组学研究进展

探讨肝癌发生发展和转移复发的分子机制,寻找早期诊断肝癌、预测转移的生物标记和干预治疗的靶点,已成为当今肝癌研究的热点.随着后基因组时代的来临,蛋白质组学为涉及多基因、多蛋白的肝细胞癌研究创造了新的契机.本文就肝细胞癌的蛋白质组学研究进展作简要综述.多基因、多蛋白的肝细胞癌研究创造了新的契机.本文就肝细胞癌的蛋白质组学研究进展作简要综述.     

腹主动脉瘤破裂的急救体会（附2例报告并文献复习）

目的探讨对腹主动脉瘤破裂的诊断及急救措施。方法回顾分析2007年1月至2010年3月收治的2例腹主动脉瘤破裂患者抢救过程。结果1例患者治愈出院,1例术后因大量失血导致弥散性血管内凝血（DIC）及多器官功能衰竭而死亡,存活率为50％。结论急诊手术是救治腹主动脉瘤破裂患者的最有效方法。早期诊断,适时复苏,急诊外科手术,是降低病死率的关键。     

肝癌肝移植术后肿瘤复发相关蛋白的鉴定及生物信息学分析

目的 鉴定肝癌肝移植术后肿瘤复发相关蛋白并进行相关生物信息学分析.方法 取肝癌肝移植术后3年患者原发瘤标本,根据肿瘤复发情况,分为复发组(10例)和未复发组(10例).用双向电泳对两组总蛋白进行分离,质谱鉴定差异蛋白;用Gene Ontology和MetaCore软件进行生物信息学分析;用蛋白印迹法测定核纤层蛋白A/C(lamin A/C)的表达.结果 共鉴定出37个差异蛋白,相对于未复发组,复发组中表达上调2倍以上的蛋白16个,表达下调2倍以上的蛋白21个.按Gene Ontology进行分类发现它们主要分布于细胞浆(27％)和细胞器(24％);主要参与体内催化反应(38％)和结合反应(24％)等生物学功能.MetaCore数据库分析,发现多种蛋白参与细胞凋亡、细胞死亡、细胞发育过程的信号调控网络.我们应用蛋白免疫印迹对lamin A/C在两组间的差异表达情况进行了再验证,验证结果与质谱结果吻合.结论 肝癌肝移植术后转移复发与多种蛋白表达改变相关,lamin A/C可能为移植后肿瘤转移复发的潜在分子靶点.     

大鼠小体积肝移植模型的建立及技术改进

目的:建立稳定的大鼠30%比例小体积肝移植模型。方法:采用SD大鼠,"二袖套法"行30%比例原位肝移植25例。经腹主动脉插管原位快速灌注获取供肝,冷缺血时间设定为1 h。结果:术后2 d存活率和1周存活率分别为72%(18/25)和64%(16/25)。结论:成功建立了大鼠30%比例的小体积肝移植模型,该模型手术成功率较高、便于操作,与临床部分肝移植(如活体肝移植)的手术十分相似,是研究肝移植缺血再灌注损伤的理想途径。     

血清蛋白质组学研究中高丰度蛋白的去除

目的 建立血清蛋白质组学研究中高丰度蛋白的去除方法并观察其去除效果.方法 应用Agilent公司去除人14种高丰度蛋白的多重亲和排除系统(Human 14 Multiple Affinity RemovalSystem),去除血清中自蛋白、IgG和抗胰蛋白酶等14种高丰度蛋白,并用SDS-PAGE评价去除的效果.结果 建立血清中高丰度蛋白的去除方法,可去除白蛋白等14种高丰度蛋白.SDS-PAGE图谱中去除高丰度蛋白后条带更清晰,部分低丰度蛋白得以显现.结论 成功建立血清中高丰度蛋白的去除方法,可为下游的蛋白质组学技术奠定基础.

Abstract：

Objective To establish the method for removing high-abundance proteins in serum proteomics research and evaluate the removal efficiency of the high-abundance proteins. Methods Human 14 Multiple Affinity Removal System of Agilent Technologies was applied to eliminate the high-abundance proteins in serum, such as albumin, IgG and α-l-antitrypsin, etc. The efficiency of removal was evaluated by 1-dimensional sodium dodecyl sulfate polyacrylamide gel electrophoresis (SDS-PAGE). Results The method for removing serum high-abundance proteins was established. The protein lanes of SDS-PAGE map were clearer and some low-abundance proteins were visualized after depletion. Conclusion An effective method of removing high-abundance proteins in serum is established, which provids basis for further strategies in proteomics research.     

肝癌患者肝移植术后肿瘤复发相关的血清蛋白质标记物筛选

目的 筛选与肝癌患者肝移植术后肿瘤复发相关的术前血清生物标记物,并建立肿瘤复发的预测模型.方法 76例受者被纳入本项研究,其中35例术后发生肿瘤复发和转移(复发组),其余41例均无瘤存活(无瘤存活组).移植前收集受者血清,采用表面加强激光解吸电离-飞行时间质谱(SELDI-TOF-MS)技术获取受者的蛋白质指纹图谱,利用"生物标记物向导"软件对两组受者间的蛋白峰进行比较.随机选择60例受者(复发组30例,无瘤存活组30例)的血清蛋白指纹图谱作为建模组,通过"生物标记物模型"软件(BPS)建立预测模型.取另外16例(复发组5例,无瘤存活组11例)受者的血清蛋白指纹图谱作为验证组,采用盲法验证该模型的灵敏性和特异性.结果 复发组和无瘤存活组受者的临床资料及病理特征间仅术前肿瘤大小和血管侵犯程度的比较,差异有统计学意义(P＜0.05).建立血清蛋白质指纹图谱后,在质荷比(M/Z)2000～3000范围内,共检测出368个蛋白峰,两组间有显著差异的蛋白峰共有22个,其中9个在复发组中表达上调,13个表达下调.通过对原始图谱的初步判断及利用建模组受者上述22个有显著差异的蛋白质,建立决策树预测模型,该模型可以显著地将复发组和无瘤存活组受者区分开.将16例验证组受者的血清蛋白指纹图谱代入决策树预测模型,验证结果显示,5例复发组受者中肿瘤复发4例,无瘤存活1例;11例无瘤存活组受者中无瘤存活受者8例,肿瘤复发3例.该模型的灵敏性为80.0%(4/5),特异性为72.7%(8/11).结论 由SELDI-TOF-MS筛选出的血清差异蛋白质可作为肝癌患者肝移植术后肿瘤复发相关的生物标记物,决策树预测模型对肝癌患者接受肝移植的适应证、有无肝外微小转外灶及制定肝移植诊疗计划具有一定临床指导意义.     

肝癌患者肝移植术后肿瘤复发相关的血清蛋白质标记物筛选

Objective To appraise and compare protein expression profiles in sera of patients without or with recurrence following liver transplantation for hepatocellular carcinoma (HCC) using SELDI-TOF-MS technique,and establish the diagnostic and predictive model. Methods A total of 76 sera (41 from disease free survival patients and 35 from recurrence individuals) were collected pretransplantation and differentially expressed proteins were identified by SELDI-TOF-MS. The intensity values for each peak were analyzed by Biomarker Wizard Software to screen serum proteome biomarkers related to the recurrence post-transplantation. By using Biomarker Patterns Software, the classification trees were generate. from randomly selected samples (30 fingerprints obtained from each group). The sensitivity and specificity of best decision tree were then chosen for blind test with 16 samples (5 from recurrence individuals and 11 from recurrence-free survival patients). Results There were significant differences only in tumor size and the presence of vascular invasion between recurrence group and recurrence-free survival group (P＜0.05). According to serum protein fingerprints, a total of 368 protein peaks were identified at the mass-to-charge ratio (M/Z) value ranging from 2000 to 300 00. There were 22 significant differential proteins between two groups. Among them, 9 proteins were up-regulated and 13 proteins were down-regulated -espectively in recurrence group. The intensity values of differential proteins were input into BPS for classification tree analysis and the best performing tree could distinguish two groups successfully. As a result of blind assessment for this model,a sensitivity of 80.0 % (4/5) and specificity of 72.7 % (8/11) were obtained. Conclusion Some of differential proteins screened by SELDI-TOF-MS technique in the serum may be correlated with the prognoses of liver transplantation patients with HCC. The decision tree may be useful for the clinical application of formulating the indication for liver transplantation, detecting extrahepatic micrometastasis and setting up the diagnostic and treatment strategies.     

肝移植治疗肝细胞型肝癌的67例临床分析

目的探讨肝移植治疗肝细胞型肝癌的临床价值及影响预后的因素。方法对67例接受肝移植治疗、且随访时间≥6个月的肝细胞型肝癌患者的临床资料进行回顾性分析。结果67例患者肝移植术后1年、2年存活率分别为89.96%、65.59%,1年、2年无瘤存活率分别为77.51%、62.49%;单因素分析显示,甲胎蛋白水平、肿瘤最大直径、门静脉癌栓、肿瘤累及肝脏左右两叶、肿瘤分化程度和肿瘤TNM分期是影响无瘤存活率的重要因素,Cox风险模型多因素分析显示,肿瘤最大直径和门静脉癌栓是影响无瘤存活率的独立危险因素。结论肝移植是目前治疗肝细胞型肝癌的有效方法,肿瘤直径>5cm和门静脉癌栓严重影响患者的无瘤存活率。     

肝移植术后脾动脉窃血综合征的诊断和处理(附1例报道)

肝移植术后的动脉窃血综合征虽不多见,却会导致肝脏和胆管的缺血性损伤。临床上可表现为肝功能相关酶水平的显著变化、移植物功能异常、胆管炎或肝移植术后的肝动脉血栓形成。窃血综合征可引起缺血性胆道损伤或移植物功能丧失,但移植界尚未对窃血综合征引起足够的重视。本文报道1例肝移植术后发生脾动脉窃血综合征的诊断和处理方法。     

人肝癌细胞系MHCC97H中侧群细胞初探

目的 从人肝癌细胞系MHCC97H中分选侧群细胞,探索其形态、表型和功能特征.方法 利用流式细胞仪从MHCC97H中分选得到侧群细胞,用相差显微镜和透射电镜观察其形态学特点;Western blotting观察其ABCG2表达;用流式细胞仪评估侧群细胞与干细胞基因CD133、CD117的关系;用克隆形成实验和NOD/SCID接种实验分别观察侧群细胞体外增殖和体内成瘤情况.结果 侧群细胞体积较小,呈圆形或短梭形;侧群细胞的细胞器如线粒体、内质网等明显少于非侧群细胞;流式检测显示侧群细胞中含有CD133、CD117阳性细胞;Western blotting显示侧群细胞和非侧群细胞中均有ABCG2表达,两者无明显差异;平板克隆形成实验显示SP具有较强的克隆形成能力;体内移植实验显示2000个SP细胞即能在体内形成肿瘤.结论 肝癌细胞系MHCC97H中侧群细胞具有肿瘤干细胞样细胞的表型和特性;ABCG2可能不是决定肝癌侧群细胞表型的主要因素.