加速康复外科在肾移植术后静脉补液中的应用

目的探讨加速康复外科(ERAS)在肾移植术后静脉补液中的应用。 方法回顾性分析陆军军医大学第一附属医院124例肾移植受者临床资料。根据肾移植术后多尿期每24小时静脉补液量分为3组，A组每24小时静脉补液量2 500～<4 000 mL，术后6 h进食流质；B组每24小时补液量4 000～6 000 mL，肛门排气后进食；C组每24小时补液量>6 000 mL，肛门排气后进食。采用单因素方差分析比较3组受者术后1周中心静脉压(CVP)、心率、血压、尿量和血糖以及平均特护时间、平均住院日和术后1个月血清肌酐。采用χ²检验比较3组受者性别、供肾类型以及术后高血糖、伤口延迟愈合和移植肾功能延迟恢复(DGF)发生率。P<0.05为差异有统计学意义。 结果A、B和C组受者术后1个月血清肌酐分别为(110±23)、(114±22)和(118±22)μmol/L，差异无统计学意义(F＝1.19，P>0.05)。A组受者术后1周CVP、收缩压、尿量和血糖均低于B、C组(P均<0.05)，平均特护时间和平均住院日均短于B、C组(P均<0.05)。3组受者术后高血糖和DGF发生率差异均无统计学意义(χ²＝4.581和0.404，P均>0.05)，A组受者伤口愈合延迟发生率低于C组(χ²＝7.303，P<0.017)。仅C组1例受者因心力衰竭和肺水肿死亡。 结论ERAS适用于肾移植受者术后静脉补液策略，鼓励受者尽早饮水进食，在保证血压正常或偏高的情况下，适当减少静脉补液量，有利于减少并发症，促进受者恢复。     

当归枸杞制剂诱导脐血单个核细胞分化为肝细胞后人白蛋白的表达

背景：部分中药能够促进造血干细胞的生长及分化。目的：观察当归、枸杞制剂促进人脐血单个核细胞生长分化为肝细胞的作用、作用条件及对肝衰竭的治疗效果。方法：分离人脐血单个核细胞,加入不同剂量的当归及枸杞制剂,比较不同剂量当归及枸杞制剂对脐血单个核细胞及其转化为肝细胞后人白蛋白mRNA及人甲胎蛋白mRNA表达的影响。腹腔内注射D-氨基半乳糖建立大鼠肝衰竭模型,随机分为生理盐水对照组、脐血单个核细胞组、脐血单个核细胞与当归、枸杞制剂灌胃和腹腔内注射免疫抑制剂不同组合8组,检测大鼠肝功能变化。结果与结论：90mg/L当归、40mg/L枸杞制剂可促进单个核细胞的增殖和分化,并加快脐血单个核细胞分化为肝细胞,两者联合无药物协同作用。单独应用当归与枸杞对大鼠肝损伤均有一定的修复作用,与单个核细胞联合均可促进单个核细胞向肝细胞分化,增强修复肝损伤的作用,并且当归的修复效果优于枸杞。加用环磷酰胺后并不能增强当归或枸杞联合单个核细胞的治疗效果。     

脐血干细胞与骨髓干细胞联合移植治疗大鼠急性肝衰竭实验研究

目的：观察脐血干细胞和自体骨髓干细胞共同移植治疗D-半乳糖苷所致急性肝衰竭大鼠的疗效。方法采集大鼠脐血和骨髓中单个核细胞,以促肝细胞生长因子和干细胞因子培养3w,采用免疫细胞化学法检测白蛋白和甲胎蛋白表达情况;以D-半乳糖苷腹腔注射法建立大鼠急性肝衰竭模型,24 h后每日经鼠尾静脉分别注入脐血干细胞,或骨髓干细胞,或混合的脐血干细胞和骨髓干细胞,对照组注射等量生理盐水,治疗7d,观察4组大鼠存活率、肝功能和肝组织病理学变化。结果在促肝细胞生长因子及干细胞因子的诱导下,脐血干细胞和骨髓干细胞可以在体外扩增并分化为肝细胞;脐血干细胞移植、骨髓干细胞移植和联合细胞移植组大鼠9d 存活率分别为55.6%、50.0%和77.8%,均明显高于生理盐水对照组（16.7%,P〈0.01）;联合移植组存活率高于任何一种单纯干细胞移植（P〈0.01）。结论脐血干细胞和骨髓干细胞移植对大鼠急性肝损伤有一定的保护作用,两者联合移植有协同作用。     

胚胎生殖细胞体外原代培养条件分析

目的：分析胚胎生殖细胞体外原代培养条件，为胚胎生殖细胞建系奠定基础。资料来源：应用计算机检索Pubmed数据库1994—01／2005—10有关胚胎生殖细胞的文章，检索词“embryonie germ cells,primordial germ cells,in vitro eulture”，限定文章语言种类为English。同时计算机检索中国期刊全文数据库1994-01／2005-10期间的相关文章，检索词“原始生殖细胞，胚胎生殖细胞，体外培养”，限定文章语言种类为中文。资料选择：对资料进行初审，并查看每篇文章后的引文。纳入标准：与胚胎生殖细胞培养、分化、鉴定相关文献。排除标准：重复研究或Meta分析类文章。资料提炼：共收集到125篇有关胚胎生殖细胞的文章，排除重复或类似的同一研究，18篇符合研究要求。资料综合：胚胎生殖细胞具有全能性和多向分化潜能，是目前研究的热点。标本的选择、取材的部位、培养基、血清、各种添加剂、细胞因子的选择、溶液的pH值、饲养层的种类及状态等均可以影响胚胎生殖细胞的培养和生长：良好的培养条件对进行更深入的研究意义重大。 结论：众多的因素可以影响胚胎生殖细胞的培养及生长，建立良好的胚胎生殖细胞体外培养条件十分重要。     

免疫功能正常成人社区获得性白假丝酵母菌败血症1例

白假丝酵母菌败血症是真菌败血症的一种,一般发生于存在严重基础疾病、免疫功能低下及使用大量广谱抗菌药物、长期留置导管等危险因素的患者,且通常为医院获得性感染。而免疫功能正常的成年患者发生社区获得性真菌败血症少见,现报告1例,以便临床医生了解其临床特点及处理。     

住院患者人类疱疹病毒7型感染的调查

目的 了解住院人群中人类疱疹病毒7型（HHV－7）的感染情况。方法 以聚合酶链反应（PCR）检测唾液中的HHV－7，再以巢式PCR及酶切加以鉴别。结果 检测120份唾液标本有97份阳性，PCR阳性结果示186bp处有一荧光带，经ECORI酶切后成为126bp和60bp两条荧光带，巢式PCR结果示94bp处有一荧光带；复发性口腔溃疡（RAU）患者与非RAU患者HHV－7检出存在显著性差异，有HHV－7感染组OR＝27．63。结论 住院患者的唾液中HHV－7检出率高，HHV－7感染人群发生RAU的危险高于未感染人群。     

人胚胎原始生殖细胞移植治疗大鼠急性肝损伤**☆

目的：胚胎原始生殖细胞能以原始胚胎状态无限增殖，并可通过异体移植或适宜的体外环境自然分化为胚胎生殖层。实验拟进一步观察体外培养的胚胎原始生殖细胞对急性肝损伤大鼠的治疗效果，及其能否在大鼠体内分化为肝细胞。 方法：实验于2003-09/2005-05在中南大学肝病研究所完成。①细胞及动物：经中南大学湘雅二医院医学伦理委员会批准，取孕4~12周流产人胚胎，其双亲3代内无遗传性疾病，孕妇对流产胚胎用于实验均签署知情同意书。清洁级健康成年SD大鼠50只，随机数字表法分为5组：培养基对照组、单纯人胚原始生殖细胞组、人胚原始生殖细胞+环磷酰胺组、单纯鼠胚原始生殖细胞组、鼠胚原始生殖细胞+环磷酰胺组，10只/组。另选取健康成年SD孕鼠4只用于分离鼠胚原始生殖细胞。动物均由中南大学湘雅二医院动物实验中心提供，实验过程中对动物的处置符合动物伦理学标准。②实验方法：从人胚胎中分离出原始生殖嵴组织，悬浮培养获取人胚原始生殖细胞，用含15%胎牛血清的高糖DMEM基础培养基调节细胞浓度至1×108 L-1。取SD孕鼠胚胎分离生殖嵴，消化离心培养鼠胚原始生殖细胞，浓度1×108 L-1。各组大鼠均于腹腔内注射D-氨基半乳糖建立急性肝损伤模型，造模后48 h，培养基对照组自尾静脉输注基础培养基，其余4组给予对应细胞悬液及免疫抑制剂环磷酰胺。③实验评估：从细胞形态、表面标记及体外分化等方面检测人胚原始生殖细胞的生物学特性；比较各组大鼠肝功能、增殖细胞核抗原阳性率、糖原染色阳性率、肝脏病理改变；检测各组大鼠肝脏病理切片中人白蛋白、甲胎蛋白的表达。 结果：①人胚原始生殖细胞的生物学特性：培养1 d后单个原始生殖细胞形成细胞集落，以后集落逐渐增大并隆起，形成鸟巢状，周边界限清晰，内部细胞排列紧密。传代后原始生殖细胞集落呈自发分化趋势，周边出现成纤维样细胞，最后分化为梭形细胞、多边形细胞等。原代至第3代未分化的人胚原始生殖细胞集落碱性磷酸酶染色均呈阳性，分化的细胞及成纤维细胞呈阴性。②肝功能检测：细胞输注前各组丙氨酸转氨酶、天冬氨酸转氨酶、总胆红素水平均基本相似(t=0.361~1.183，P均 > 0.05)。输注后7 d与培养基对照组比较，单纯鼠胚原始生殖细胞组、鼠胚原始生殖细胞+环磷酰胺组上述3项指标水平均明显降低(t=2.532~8.361，P均 < 0.05)；后两组间比较差异无显著性意义(t=0.340~1.712，P均 > 0.05)。③增殖细胞核抗原阳性率：细胞输注后7d与培养基对照组比较，单纯鼠胚原始生殖细胞组、鼠胚原始生殖细胞+环磷酰胺组的增殖细胞核抗原阳性率均明显升高（t=9.020~10.747，P均 < 0.001）；后两组间比较差异无显著性意义(t=0.752，P=0.462)。④糖原染色：细胞输注后7 d，培养基对照组着色相对浅淡，呈细颗粒状，；单纯鼠胚原始生殖细胞组、鼠胚原始生殖细胞+环磷酰胺组着色相对深粗，呈斑块状聚集。⑤病理检测：细胞输注后7 d，培养基对照组肝索、肝窦结构排列欠规则，坏死区可见少量肝细胞再生，汇管区有大量炎症细胞浸润；单纯鼠胚原始生殖细胞组、鼠胚原始生殖细胞+环磷酰胺组各项病理情况均显著改善。⑥大鼠肝组织人白蛋白、甲胎蛋白的表达：细胞输注后14，21 d，单纯人胚原始生殖细胞组、人胚原始生殖细胞+环磷酰胺组表达人白蛋白及甲胎蛋白阳性细胞，培养基对照组未见表达。 结论：①胚胎原始生殖细胞移植有利于激发急性肝损伤大鼠肝细胞的增殖，改善肝功能，加速受损肝细胞的病理修复。②胚胎原始生殖细胞可在受体肝脏组织中生存，并分化为具有合成白蛋白及甲胎蛋白功能的肝细胞样细胞。     

黄芪注射液促进脐血干细胞向肝细胞分化**

背景：在脐血干细胞移植治疗肝功能衰竭研究中,文献报道黄芪制剂可刺激造血干/祖细胞的增殖。 目的：观察黄芪注射液在体内外促进脐血干细胞向肝细胞的分化,以及增强脐血干细胞移植治疗大鼠肝衰竭的效果。 方法：取传至三四代的人脐血干细胞,药物筛选实验设立4组,分别加入0,40,200,400 mg/L黄芪,筛选适宜脐血干细胞生长的黄芪浓度;干细胞分化实验设立2组,分别加入肝细胞生长因子10 μg/L、肝细胞生长因子10 μg/L+黄芪200 mg/L。采用腹腔内注射D-氨基半乳糖法制备大鼠肝衰竭模型,建模48 h后仍存活的大鼠随机分为6组：模型对照组、黄芪组、鼠外周血单个核细胞组、联合组、联合+环磷酰胺组、联合+地塞米松组。RT-PCR法检测大鼠肝脏组织甲胎蛋白及白蛋白mRNA的表达,观察相关肝功能指标的变化。 结果与结论：不同质量浓度的黄芪制剂对人脐血干细胞生长影响不同,200 mg/L黄芪最适宜细胞生长和增殖。与单纯加入肝细胞生长因子的人脐血干细胞比较,另加入200 mg/L黄芪的人脐血干细胞白蛋白免疫组化染色阳性细胞数明显增加(P < 0.05)。随干预时间的延长,联合组、联合+环磷酰胺组、联合+地塞米松组肝脏组织白蛋白mRNA的表达均强于鼠外周血单个核细胞组;而甲胎蛋白mRNA的表达在早期均强于鼠外周血单个核细胞组,在后期则表达消失。干预7 d后,联合组、联合+环磷酰胺组、联合+地塞米松组的丙氨酸氨基转移酶、天门冬氨酸氨基转移酶及总胆红素下降幅度均明显大于模型对照组、黄芪组、鼠外周血单个核细胞组(P < 0.05),而此3组间各项指标的变化无明显差异(P > 0.05)。提示200 mg/L黄芪在体内及体外均可以促进人脐血干细胞生长并分化为肝细胞,减轻肝脏损害,增强脐血干细胞移植治疗肝衰竭的效果。     

血清总胆汁酸测定的意义及其局限性

目的　阐明空腹血清总胆汁酸（TBA）测定的临床意义。方法　收集913例临床资料,用SPSS软件及四格表法进行统计分析。结果　（1）正常人TBA平均（4.0±3.2）μmol/L。肝病组TBA显著高于正常人和非肝病组(P＜0.01)。（2）急性肝炎患者TBA平均为（167.2±132.4）μmol/L,最高达449.5μmol/L,与其他各组相比差异有显著性(P＜0.01),表明TBA是反映急性肝细胞损伤的敏感指标。（3）TBA对肝硬化的敏感性为85.8%,优于其他肝功能试验,TBA是反映肝硬化侧支循环的有价值的指标。（4）TBA对慢性轻度肝炎的敏感性仅为30.5%,不及ALT和总胆红素（TBIL）。（5）TBA水平与病情轻重有一定关系,但与TBIL不完全平行,对病情的判断不如TBIL有价值。结论　TBA特异性高,敏感性尚可,对肝病、特别是急性肝炎和肝硬化有重要诊断价值,但对慢性轻度肝炎的敏感性差,对病情的判断不如TBIL有意义。     

脐血干细胞分化为肝细胞的试验与临床

干细胞是具有自我复制和多向分化潜能的原始细胞，是形成生命机体各种组织器官的起源细胞。干细胞技术是生命科学领域最重要的技术之一，将细胞衍生成各种不同类型的细胞及组织，从而产生一些全新的治疗技术，如干细胞移植，组织器官再造和基因治疗等，使人们能用自身或他人的健康干细胞及其衍生组织器官，来替代病变或衰老的组织器官。自1988年10月Gluckman进行了全世界第一例脐血干细胞移植治疗Fancolli贫血获得成功以来，脐血作为一种造血干细胞来源迅速成为医学研究中一个非常活跃的领域。脐血作为一种新的造血干细胞移植的供源，