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目的:观察骨形态发生蛋白2、血管内皮生长因子。双基因转染的小鼠骨髓基质干细胞是否具有异位诱导成骨能力。方法:脂质体介导下将pIRES-BMP2-VEGF165导入小鼠骨髓基质干细胞,用RT-PCR和免疫组织化学法观察骨形态发生蛋白2和血管内皮生长因子165双基因在小鼠骨髓基质干细胞内的表达:将转染双基因的小鼠骨髓基质干细胞植入裸鼠大腿后群肌袋内,4周后用影像学和组织学方法观察体内诱导成骨效果。结果:转染pIRES-BMP2-VEGF165的小鼠骨髓基质干细胞扩增出1.2kb及590bp两条带,胞浆中有棕黄色颗粒阳性信号。该细胞植入裸鼠大腿后群肌袋4周后有大量异位骨形成。结论:转染骨形态发生蛋白2和血管内皮生长因子165双基因的小鼠骨髓基质干细胞具有较强诱导异位成骨能力。 相似文献
2.
〖目的〗评价磷酸钙骨水泥(calci umphosphate cement,CPC)强化和修复椎弓根螺钉的生物力学效果.〖方法〗6具新鲜成人尸体T11~L4共36个椎体,随机选取其中32个,分为4组(A,B,C,D),每组8个.A组:随机选择一侧椎弓根置入直径为6.5 mm的椎弓根螺钉,另一侧以直径为3.5 mm的钻头导孔,均不穿透椎体前侧骨皮质.在材料实验机上进行轴向拔出实验,拔出速率为5 mm/min.然后向两侧椎弓根孔道注入配制好的磷酸钙骨水泥3~5 ml,植入与前相同的椎弓根螺钉,体温下(37℃)放置24 h后,再行前述拔出实验.B组:应用聚甲基丙烯酸甲酯(PMMA)进行修复和强化,作为对照,操作方法同A组.C组:植入椎弓根螺钉,添加或不添加CPC,进行周期抗屈实验.D组:相同方法,应用PMMA作为对照.〖结果〗CPC对照组拔出力为(826.8±171.0)N,修复组为(1430.3±278.4)N,强化组为(1452.7±288.3)N;PMMA对照组拔出力为(839.7±181.1)N,修复组为(1846.2±342.1)N,强化组为(1946.9±359.4)N.CPC骨水泥强化组和修复组拔出力明显高于对照组,差异具有非常显著性意义(P<0.05),但分别小于PMMA强化组和修复组.周期抗屈实验中,添加CPC可使椎弓根螺钉在同等负荷(200N,800个周期)下仅产生较小的位移,但强化效果不及PMMA.〖结论〗在植入椎弓根螺钉时添加具有生物活性的磷酸钙骨水泥可显著提高其初始稳定性,虽其强化效果不及PMMA,但其潜在的开发前景已经使PMMA的临床应用受到了极大的挑战. 相似文献
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目的 建立单纯连续性小剂量糖皮质激素性骨质疏松兔模型,探讨糖皮质激素性骨质疏松症模型建立的新方法.方法 6月龄雌性新西兰大白兔42只,分成实验组和对照组,实验组甲基泼尼龙琥珀酸钠2 mg/(kg·d)臀肌注射4周,对照组等量生理盐水注射.在0、2、4、6周分批处死,同时检测血钙、磷、总胆固醇和甘油三酯的浓度;双能X射线吸收法测量股骨骨密度;micro-CT和HE染色分析股骨和腰椎的骨密度和骨小梁参数,并进行图像处理和统计分析;分析股骨、胫骨、腰椎的生物力学特性.结果 连续臀肌注射4周后兔体质量均明显下降.实验组与对照组比较,2周后胆固醇、甘油三酯差异有统计学意义(P<0.05),钙和磷4周时差异才有统计学意义(P<0.05);股骨骨密度、般骨近端及头部和腰椎大部分骨小梁参数2周、4周差异均有统计学意义(P<0.05);4周时股骨骨密度丢失达到基础对照值的2.5个标准差.结论 可以通过连续注射小剂量糖皮质激素4周复制出兔骨质疏松模型,糖皮质激素可导致骨质疏松,小剂量糖皮质激素建模可行. 相似文献
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目的研究唑来膦酸对骨肉瘤LM8细胞株黏附、迁移、侵袭和基质金属蛋白酶(MMP-2、MMP-9)的影响。方法不同浓度的唑来膦酸处理LM8细胞,用CCK-8法检测细胞毒作用和LM8细胞的黏附力;细胞划痕试验检测LM8细胞的迁移力;transwell小室模型测定LM8细胞对细胞外基质(ECM)的侵袭力;采用酶联免疫吸附实验(ELISA)检测培养上清液中基质金属蛋白酶(MMP-2、MMP-9)的含量。结果经过6.25μmol/L、12.5μmol/L、25μmol/L的唑来膦酸处理后,LM8细胞的黏附、迁移和侵袭力均明显下调,培养上清液中的基质金属蛋白酶(MMP-2、MMP-9)的含量也明显下降。结论唑来膦酸可抑制骨肉瘤LM8细胞的体外黏附、迁移和侵袭力,并同时明显降低LM8细胞分泌基质金属蛋白酶。 相似文献
5.
背景:骨形态发生蛋白2(bone morphogenetic protein 2,BMP-2) 是已知的所有生长因子中对骨的形成作用最强的生长因子,被认为是最具有前途的骨诱导物质。
目的:构建人骨形成蛋白2真核表达载体并观察其体外表达情况。
设计、时间及地点:自身对照实验,于2005-07/2006-05在华中科技大学同济医学院分子生物中心实验室完成。
材料:pcDNA3.1(+)载体由华中科技大学同济医学院左石博士惠赠;成骨肉瘤组织由华中科技大学同济医学院附属协和医院骨科提供。
方法:从人成骨肉瘤细胞中提取细胞总RNA,利用反转录-聚合酶链反应方法扩增获得人BMP-2基因cDNA,将基因片断重组到pGEM-T质粒中构建pGEM-T- hBMP-2重组质粒载体,转化到大肠杆菌DH5α后筛选阳性克隆,利用限制性酶切和DNA序列分析鉴定重组质粒。分别用RcoRI和NotI双酶切pGEM-T- hBMP-2质粒和pcDNA3.1真核表达载体,将克隆载体中人骨形成蛋白2基因重组到pcDNA3.1真核表达载体,提取质粒作酶切电泳、聚合酶链反应鉴定及DNA测序后,用脂质体体外转染小鼠骨髓基质细胞,反转录-聚合酶链反应检测BMP-2的表达。
主要观察指标:①人骨肉瘤细胞总RNA 反转录-聚合酶链反应结果。②重组质粒pGEM-T-hBMP-2 和pcDNA3.1-hBMP-2的构建和酶切鉴定。③BMP-2在小鼠骨髓基质细胞内的表达。
结果:人骨肉瘤细胞总RNA经反转录-聚合酶链反应扩增后,获得1.2 kb条带。经酶切电泳、聚合酶链反应鉴定及DNA测序证实实验成功克隆BMP-2基因,重组质粒pcDNA3.1- hBMP-2构建正确;该重组质粒能在体外培养的小鼠骨髓基质细胞中有效表达BMP-2。
结论:实验成功克隆人骨形成蛋白2基因并构建了此基因的真核表达载体。 相似文献
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股骨头坏死的治疗一直是困扰骨科医师的一大难题,尽管许多手术方式的治疗效果比非手术治疗效果好,但仍未有哪一种手术方式让人们完全满意.究其原因有两点:(1)股骨头坏死的治疗效果与其所处的病理阶段密切相关,治疗效果的优劣可能更多的取决于患者就诊时的病理状态而不是所采用的手术方法;(2)由于不同的学者往往采用不同的分 相似文献
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人股骨头大孔径髓芯减压后支撑架植入生物力学分析 总被引:1,自引:1,他引:0
[目的] 观察钛合金支撑架植入对经转子大孔径髓芯减压后人股骨头力学强度的影响.[方法] 取新鲜人股骨头9对,随机分成3组,每组3对.其中2组随机选取每对中的一侧,分别模拟经股骨颈大孔径(D=16 mm)单纯髓芯减压、大孔径髓芯减压+钛合金支撑架植入治疗股骨头坏死的方法做成治疗后的状态,另一侧做正常对照,第3组随机选取其中一侧模拟经股骨颈大孔径单纯髓芯减压,另一侧模拟经股骨颈大孔径髓芯减压+钛合金支撑架植入,在AGS-10 KND万能生物材料实验机上进行力学性能测试,观察3组标本股骨头的力学刚度及强度,对每对标本的实验结果标准化后进行统计学分析.[结果] 单纯大孔径髓芯减压组和正常对照组力学曲线成单峰状,大孔径髓芯减压+钛合金支撑架植入组力学曲线呈双峰状.单纯大孔径髓芯减压组刚度及最大负载明显低于正常对照组(P<0.05),钛合金支撑架植入组初峰刚度及最大负载与正常对照组无明显统计学差异(P>0.05),次峰最大负载明显高于正常对照组(P<0.05).[结论] 经转子大孔径髓芯减压会明显降低股骨头负重区的力学强度.钛合金支撑架植入能给股骨头负重区软骨下骨提供足够的机械支撑力,起到防止股骨头塌陷,维持股骨头外形的作用,有利于坏死股骨头的再生和修复. 相似文献
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RNA干扰沉默PPARγ基因对小鼠骨髓基质干细胞成脂与成骨分化潜能的影响 总被引:1,自引:0,他引:1
目的 观察RNA干扰沉默PPAγ基因对小鼠骨髓基质干细胞成脂与成骨分化潜能的影响.方法 针对小鼠PPARγ基因,构建短发夹RNA(shRNA)真核表达载体并转染小鼠骨髓基质干细胞,逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)和免疫印迹沉淀(Wetem-blot)观察PPARγ的基因沉默效果.分别在成脂及成骨诱导培养基条件下,诱导培养14 d,采用油红O(Oil Red O)染色及茜素红染色鉴定分化结果.并与空载体转染组和未转染组比较.结果 测序证实成功构建PPARγ的shRNA真核表达载体pSilencer-shPPARγ,转染小鼠骨髓基质干细胞后,PPARγ基因表达在转录水平和翻译水平都显著受到抑制,与两对照组相比,抑制率分别为92%和90%.成脂及成骨诱导分化后,shPPARγ转染组小鼠骨髓基质干细胞的成骨分化率为56.46%±1.92%,明显高于pSilencer-neo空载体转染组和未转染组(P<0.01);成脂分化率为19.24%±0.98%,显著低于pSilencer-shPPARγ-neo空载体转染组和未转染组(P<0.01).结论 RNA干扰沉默PPARγ基因后,可增强小鼠骨髓基质干细胞的成骨分化潜能,抑制其成脂分化潜能. 相似文献
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微创脊柱外科的发展历程及研究进展 总被引:4,自引:0,他引:4
在脊柱外科领域,微创技术的发展经历了漫长的历程。随着医学模式的转变和科学技术的进步,微创技术的发展节奏不断加快,微创脊柱外科(minimallyinvasivespinesurgery)已成为21世纪脊柱外科发展的趋势。现就微创脊柱外科的发展历程及研究进展作一综述。1盲视下的经皮技术第一代微创技术可称作“盲视下的经皮技术(blindpercutaneoustechniques)”,包括髓核化学溶解术、经皮椎间盘切除术和经皮激光椎间盘切除术等。1.1髓核化学溶解术(chemonucleolysis,CN)髓核化学溶解术最早由Smith于1963年报道,目前用于临床的溶核酶包括木瓜凝乳蛋白酶和胶… 相似文献