临床研究用间充质干细胞的体外制备策略

目的探讨一种安全、有效并易于推广的临床研究用间充质干细胞的产业化制备策略。方法常规方法分离获得原代脐带间充质干细胞,P1~P3代以含小牛血清培养基进行稳定传代后,以无血清培养基对P4~P6代细胞继续培养和扩增,并以含血清培养基作为对照。倒置显微镜每天定时观察细胞生长状态,CCK-8法比较P4代和P6代细胞在两种培养基中的增殖能力,并对P4~P6代细胞的细胞裂解液和细胞培养上清中的牛血清白蛋白(BSA)残留量进行检测。结果对分离获得的原代脐带间充质干细胞进行传代培养,在含血清培养基中,P1~P3代细胞增殖能力稳定,以4×104/ml密度接种,3.5~4d可达到90%融合;细胞进入P6后,在无血清培养基培养条件下增殖能力与含血清培养基相近;BSA残留量检测结果显示,无血清培养基组中细胞的培养上清和细胞裂解液中残留的BSA量低于10ng/106细胞,满足《中国生物制品规程》对相关细胞治疗产品中BSA残留量的标准要求。结论含血清培养与无血清培养相结合的程序性培养扩增体系,可为临床提供数量充足、质量可控的间充质干细胞。     

Lgr5和CD44在肠息肉和结直肠癌中的表达及意义

目的探讨不同病理分型肠息肉与肿瘤发生相关的干细胞标志Lgr5和CD44的表达及其对息肉癌变的临床预测意义。方法经结肠镜活检获取结肠直肠息肉、腺瘤和癌组织145例,进行病理检测分型;应用免疫组化方法检测不同病理类型标本中肿瘤干细胞标志Lgr5和CD44的表达,分析比较其与结、直癌的发生和预后的关系。结果 CD44在结肠癌组织中的表达率为95.65%,显著高于正常粘膜5%、炎性增生性息肉22.58%、管状腺瘤性息肉55.26%及绒毛状息肉75.76%(P<0.05)。Lgr5在大肠癌组织中的表达高达95.65%(22/23),显著高于正常粘膜(无表达)和炎性增生息肉16.12%(P<0.05),而在管状腺瘤和绒毛状腺瘤中表达分别为86.84%(33/38)和93.94%(31/33),与大肠癌相比,两两差异不具有统计学意义(P>0.05)。相关性分析结果显示,CD44、Lgr5的表达强度与肠息肉癌变进展均呈正相关(rs=0.69377,P<0.0001;rs=0.81637,P<0.0001)。结论 Lgr5和CD44在大肠癌癌组织中高表达,它们的高表达与临床和病理的特征具有显著相关性;Lgr5和CD44的表达是区别大肠癌癌组织与正常肠粘膜组织的显著特点;与CD44相比,Lgr5表达与息肉癌变具有较强相关性,联合检测Lgr5与CD44在肠道早期病变诊断、尤其是肠息肉癌变预测中具有重要意义。     

胃息肉中Foxa2的表达及其与胃息肉癌变之间的相关性

目的 探讨叉头框蛋白A2(Foxa2)蛋白的表达与胃息肉癌变之间的相关性及其早期报警价值.方法 对解放军总医院2011年11月至2012年10月接受胃镜检查的患者,根据计算机随机号码抽取2000例患者,其中170例在胃镜检查时发现胃息肉样病变及可疑癌变病灶,进行内镜下活检,对所取组织进行病理学分型,其中正常胃黏膜30例、炎性或增生性息肉35例、胃底腺息肉42例、腺瘤性息肉31例、进展期胃癌32例.采用ABC免疫组织化学染色法和组织水平反转录-PCR方法,检测不同病理状态组织中Foxa2的表达水平,结合临床对结果进行相关分析.结果 Foxa2在正常胃黏膜中仅有少量表达,表达阳性率为3.6％±1.3％;在炎性或增生性息肉、腺瘤性息肉和胃癌组织中表达依次增高,分别为33.1％±8.0％、71.4％±1.7％和96.3％±0.9％,两两之间差异均有统计学意义(均P＜0.05);胃底腺息肉中Foxa2的表达阳性率为35.6％±5.6％,与炎性或增生性息肉组差异无统计学意义(P＞0.05),但明显高于正常胃黏膜组(P＜0.05),且低于腺瘤性息肉组(P＜0.05);对于胃息肉患者病变部位Foxa2的表达与临床相关资料分析结果显示,Foxa2的表达与患者性别、年龄、病变部位、幽门螺旋杆菌感染以及质子泵抑制剂使用均无明显相关性(均P＞0.05),而与息肉大小存在相关性(rs=0.69,P＜0.05).结论 不同类型胃息肉中Foxa2蛋白的表达水平不同,Foxa2蛋白的表达可作为息肉癌变风险预测的临床诊断指标.