利用Crispr/Cas9构建POMP基因组原位荧光报告系统及其应用

目的 利用Crispr/Cas9系统建立蛋白酶体成熟蛋白(proteasome maturation protein,POMP)基因组原位荧光报告系统.方法 构建POMP-2A-mCherry-T载体并转染HEK293(human embryonic kdiney 293 cell)细胞;流式细胞仪分选获取mCherry阴阳性细胞;实时荧光定量PCR(real-time fluorescent quantitative PCR)检测mCherry阴阳性细胞中POMP基因转录水平表达差异;Western blot检测mCherry阴阳性细胞中POMP蛋白表达差异以及Huh7细胞中JNK1/JNK2磷酸化水平;蛋白酶体活性试剂盒检测mCherry阴阳性细胞中蛋白酶体活性差异.结果 mCherry阳性细胞POMP蛋白表达水平比mCherry阴性细胞高1.3倍(P＜0.01),但其基因转录水平差异并不显著(P＞0.05);同时mCherry阴性细胞中泛素化水平比mCherry阳性细胞高1.2倍(P＜0.01);另外mCherry阳性细胞中蛋白酶体活性也显著高于阴性细胞(P＜0.01);低表达POMP的Huh7细胞中,JNK1和JNK2的磷酸化水平分别升高1.5倍和1.4倍(P＜0.01).结论 成功构建POMP荧光报告系统;将该系统用于Huh7细胞,发现POMP可改变JNK1、JNK2磷酸化水平,其可能通过JNK信号通路来影响细胞的增殖以及凋亡.     

脑血吸虫病CT误诊1例

患者男性，40岁。炸裂样头痛20天，伴恶心、呕吐，视物旋转。行头颅CT扫描：左小脑半球内边界不清片状低密度病灶，约2.5 cm×2.7 cm×4.0 cm大，CT值约25～30 Hu(见图1)。增强后病灶无强化，边界不清晰。环池及脑干均有受压，第四脑室变形向右移位(见图2)。     

中药组方作为血管栓塞剂的实验研究

目的：研究中药组方作为血管栓塞剂的有效性、安全性及相关特性，以期获得一种理想的肿瘤血管栓塞剂。方法：将根据药典提供的数味具有抗癌和促凝作用的中草药制成具有一定黏滞性、不透X线、易经各种介入用导管注入动脉的混悬液栓塞剂。对其进行一系列有关特性的研究和鉴定，并应用其对8头健康猪进行肝动脉栓塞实验。结果：该栓塞剂具有良好的血液相容性和组织相容性，无致热原性及毒性作用；栓塞部位主要是末梢小动脉，栓塞牢靠，维持时间可达5周，不易形成侧支循环；经光镜和电镜观察证明其对正常肝组织损伤轻微。仅出现栓塞部位的肝细胞空泡变性和细胞质灶性坏死。结论：中药组方栓塞剂具有良好的血管栓塞作用，使用方便、安全，是一种较理想的末梢型血管栓塞剂。     

中药组方作为血管栓塞剂栓塞肝动脉的实验研究

目的：研究中药组方作为血管栓塞剂的有效性、安金性及相关特性，以期获得一种理想的肿瘤血管栓塞剂。方法：根据药典提供的数味具有抗癌和促凝作用的中草药将其制备成栓塞剂。对其进行一系列有关特性的研究和鉴定，并应用其进行8头健康猪的肝动脉栓塞实验。结果：中药组方栓塞剂为一种混县剂，有一定粘滑性，不透X线，易经各种介入用导管注射；诙检塞剂具有良好的血液相容性和组织相容性。无致热原性及毒性作用；栓寒部位主要是末梢小动脉，栓塞牢靠，维持时间可达5周。不易形成侧枝循环；经光镜和电镜观察其对正常肝组织损伤轻徽，仅出现栓塞部位的肝细胞水变性和臆浆灶性坏死。结论：中药组方栓塞剂具有良好的血管栓寒作用，使用方便、安全。是一种较理想的末梢型血管栓塞剂。     

眼底动脉硬化风险预测模型的构建和验证研究

目的]开发和验证一个眼底动脉硬化风险预测模型。 [方法]选择2006—2013年在华东疗养院体检的非眼底动脉硬化者作为开发队列,采用Lasso方法筛选预测因子,Cox回归方法建立预测模型。模型以在线计算器呈现,内部验证采用Bootstrap法完成,选取2015—2021年在该医院的体检者进行时段验证。采用一致性(C)统计量来量化区分度,并通过校准图以及Kaplan-Meier方法比较预测的生存概率与观察到的生存概率的差异来评估模型的校准度。 [结果]开发和外部验证队列分别包括33 218例和53 863例体检者。Lasso回归交叉验证结果显示,系数不为0的变量有9个。最终的Cox回归模型包括年龄、体质指数、饮酒情况、舒张压、高血压、空腹血糖、糖尿病、甘油三酯和血清尿酸9个预测因子。在线计算器网址为:https://rui2022.shinyapps.io/DynNomapp/。内部验证的C统计量为0.841,外部验证的C统计量为0.856。在开发和外部验证队列中,校准度均表现良好。 [结论]建立的眼底动脉硬化风险预测模型在体检人群中有较好的预测能力。该模型只需医院常规获取的变量,因此可以应用于体检人群的个体化管理以及高风险者管理的决策支持。     

MSCT增强扫描与HRCT诊断周围型肺癌的临床分析

目的 探讨增强MSCT与高分辨率CT(HRCT)诊断周围型肺癌的临床诊断效能。方法 选择92例疑似周围型肺癌患者，均行MSCT增强扫描与HRCT扫描检查，以最终病理结果作为金标准，比较MSCT增强扫描与HRCT扫描检查周围型肺癌的影像学特征。结果 92例患者经病理检查最终确诊为周围型肺癌患者55例。HRCT对胸膜凹陷征、血管集束征、空泡征、棘突征、细支气管相、短毛刺征、分叶征检出率均高于MSCT，差异具有统计学意义（P<0.05）,MSCT诊断周围型肺癌的灵敏度明显低于HRCT，差异具有统计学意义（P<0.05），而二者的特异度、准确度、阳性预测值以及阴性预测值比较，差异无统计学意义（P> 0.05）。结论 MSCT增强扫描与HRCT扫描在诊断周围型肺癌方面均具有较高价值。     

三甲医院临床医师及药师的药物流行病学认知度调查

摘 要 目的:了解临床医师及药师对药物流行病学的认知度,为推进药物流行病学知识普及和应用研究提供建议。方法：采用便利抽样的方法,用自行设计的调查问卷对浙江、山东、河南、甘肃、四川五省共17所三甲医院的376名临床医师及药师进行问卷调查。结果：在抽查的临床医师和药师中,药物流行病学的知晓率为72.9%,有27.1%的被调查者从未听说过药物流行病学,而在实践中应用过药物流行病学方法的也只有19.1%。多因素Logistic回归分析结果显示,影响知晓率的因素为年龄越大(OR=2.262,95%CI:1.630～3.140）和学历越高（OR=1.858,95%CI:1.305～2.646）知晓率越高,在校期间学习过相关知识者的知晓率比没有学习者高(OR=11.463,95%CI:5.599～23.467）。结论：三甲医院临床医师和药师对药物流行病学的知晓和应用情况不理想,应加强药物流行病学知识的宣传和普及,提高临床医师及药师对药物流行病学的认知度以及临床上的应用,推动药物流行病学研究的进展。     

表达大鼠IL-2、B7-1基因CBRH7919细胞的建立

目的:研究携带大鼠IL-2、B7-1目的基因的CBRH7919细胞(即CBRH7919/IL-2/B7-1)体外表达目的基因的能力,方法:RT-PCR扩增Wistar大鼠IL-2、B7-1目的基因,分别克隆至重组逆转录病毒载体pBaBe-puro及pMSCV-neo,构建逆转录病毒载体pBaBe-puro-IL-2及p...     

大鼠种植性CBRH-7919肝癌模型的MRI、数字减影血管造影及病理学表现

背景：大鼠种植性CBRH-7919肝癌模型是肝癌实验性治疗和影像学诊断研究重要的工具,但模型建立后如何对模型进行检测和验证鲜有报道。 目的：通过彩色超声、MRI及肝动脉血管数字减影血管造影检查的方法来检测和验证Wistar大鼠种植性CBRH-7919肝癌模型,并探讨大鼠种植性CBRH-7919肝癌模型的影像学及病理表现。 方法：CBRH-7919大鼠肝癌细胞瘤株接种裸鼠双侧肩胛部皮下,再将生成的肿瘤组织在开腹直视下移植接种于成年Wistar大鼠肝脏内,建立大鼠种植性CBRH-7919肝癌模型。模型建立4周后用彩超检查、筛选建模成功的Wistar大鼠进行MRI检查、肝动脉血管数字减影血管造影及病理学检查。 结果与结论：在建模成功的35只大鼠中,超声检查发现37个结节,MRI检查发现肝脏内共41个结节,较超声增加4个;最小的结节约3 mm,最大约8 mm。MRI扫描显示T1WI表现为低信号,T2WI及脂肪抑制序列表现高信号。肝动脉血管数字减影血管造影均表现由肝动脉供血的富血供结节。光学显微镜下观察可见肿瘤细胞呈巢状或条块状排列,周围伴行多条血管,肿瘤细胞体积大小不一致,核大而浓染,细胞质少,异型性明显。结果表明彩超和核磁共振扫描是大鼠肝癌检查简单而有效的方法,肝动脉血管数字减影血管造影可以了解肿块的供血动脉及其血供情况。通过对Wistar大鼠种植性肝癌模型的MRI及肝动脉血管数字减影血管造影表现能反映肿瘤的病理形态学和生物学行为改变。     

靶向前列腺干细胞抗原的嵌合抗原受体T细胞构建及其抗肿瘤作用

目的 制备表达靶向前列腺干细胞抗原(prostate stem cell antigen,PSCA)的嵌合抗原受体修饰的T细胞(chimeric antigen receptor T-cell,CAR-T),研究其嵌合抗原受体(chimeric antigen receptor,CAR)的表达及其对肿瘤细胞的体内外杀伤作用.方法 基因合成靶向PSCA的单克隆抗体的轻链和重链可变区(PSCA ScFv),利用酶切将其插入慢病毒载体中.病毒感染T淋巴细胞后,通过流式细胞术检测PSCA-CAR在T淋巴细胞中表达的阳性率.利用体外杀伤实验及ELISA实验分别检测PSCA-CAR-T细胞对PSCA阳性的HeLa细胞及PSCA阴性的T24细胞的杀伤效果、特异性及其细胞因子分泌情况.利用NOG小鼠背部皮下注射HeLa细胞建立移植瘤模型.结果 酶切结果表明慢病毒载体pL-PSCA-G4H-28TM-28 BBζ构建成功,DNA测序结果表明PSCA-CAR的载体序列正确;病毒感染T淋巴细胞后CAR表达阳性率为53.9％;获得的PSCA-CAR-T细胞不管是在高效靶比短时作用条件下还是低效靶比长时作用条件下,其对PSCA阳性肿瘤细胞的杀伤作用均明显强于PSCA阴性肿瘤细胞(P＜0.01);同时获得的PSCA-CAR-T在受到PSCA阳性肿瘤细胞刺激时,分泌的细胞因子量显著高于对照的T细胞(P＜0.01),而在受到PSCA阴性肿瘤细胞刺激时几乎不分泌细胞因子.体内实验证实PSCA-CAR-T细胞在体内有显著的肿瘤抑制效果(P＜0.01).结论 成功制备了靶向PSCA的CAR-T细胞,该CAR-T细胞能特异杀伤PSCA阳性的肿瘤细胞.