131I标记抗表皮生长因子受体抗体靶向性纳米载体治疗胶质母细胞瘤的可行性实验研究

目的 构建¹³¹I标记抗表皮生长因子受体抗体(antiEGFR)靶向性的纳米载体,探讨其在细胞水平和动物体内用于胶质瘤治疗的可行性。方法 制备放射性碘(¹³¹I)标记的antiEGFR靶向性的纳米载体牛血清白蛋白聚己内酯复合物¹³¹I-antiEGFR-BSA-PCL。用共聚焦显微镜观察纳米载体能够与肿瘤细胞结合情况,用MTT法检测纳米载体的细胞毒性作用,摄碘率实验检测肿瘤细胞对放射性纳米载体的摄取。制备裸鼠种植瘤模型,通过瘤体内注射给药,观察裸鼠种植瘤的体积变化,通过SPECT显像观察药物在裸鼠体内的停留情况,并分析纳米载体在裸鼠体内的分布情况。结果 成功地制备了BSA-PCL及antiEGFR-BSA-PCL纳米载体。与BSA-PCL相比,antiEGFR-BSA-PCL更容易与肿瘤细胞结合。当放射性纳米载体的放射性活度达到0.925 MBq时,U251和U87细胞的生长抑制率¹³¹I-antiEGFR-BSA-PCL组均高于¹³¹I-BSA-PCL组(t=2.517、2.821,P<0.05),且均高于同组其他剂量(U251:t=2.148、2.693,P<0.05;U87:t=2.436、2.615,P<0.05)。裸鼠体内实验发现两种纳米载体瘤体内注射后均经过肝脏代谢。¹³¹I-antiEGFR-BSA-PCL组荷瘤裸鼠的种植瘤体积较¹³¹I-BSA-PCL组缩小更多(t=4.115,P<0.05)。结论 ¹³¹I-antiEGFR-BSA-PCL在体内外实验中均能够抑制胶质瘤生长,为胶质瘤的治疗和预后评估提供了一种新方法。     

hTERT和GFAP双启动子条件复制腺病毒介导放射性碘治疗脑胶质瘤的实验研究

目的 利用条件复制腺病毒Ad-Tp-E1a-Gp-NIS感染脑胶质瘤细胞,探讨其介导靶向性放射性碘治疗脑胶质瘤的可行性。方法 克隆人端粒反转录酶（hTERT）和神经胶质纤维酸性蛋白（GFAP）启动子,荧光素酶分析法检测启动子启动效率。构建并纯化条件复制腺病毒Ad-Tp-E1a-Gp-NIS,进行肿瘤选择性病毒复制实验。U87和U251细胞感染Ad-Tp-E1a-Gp-NIS后,进行Western blot分析蛋白质表达,¹²⁵I内流及外流和¹³¹I克隆形成实验。结果 荧光素分析实验证明,hTERT和GFAP启动子分别可以引导荧光素蛋白在U251和U87细胞中表达,表达效率为37.31%~49.00%（F=5.87,P<0.05）和59.75%~62.10%（F=11.89,P<0.01）。Ad-Tp-E1a-Gp-NIS能够在hTERT阳性和GFAP阳性实现肿瘤选择性复制,且在GFAP启动子引导下能成功表达hNIS基因。Western blot分析表明,hTERT蛋白和GFAP蛋白在U87和U251细胞中显示出相对分子质量为120×10³和49×10³的条带。感染Ad-Tp-E1a-Gp-NIS后,U87细胞摄碘能力提高78.80倍（F=2 914.58,P<0.01）,U251细胞摄碘能力提高92.48倍（F=2 275.91,P<0.01）。体外细胞克隆分析证明,感染病毒并在¹³¹I中孵育12 h后,超过90%的肿瘤细胞被杀死,而对照组细胞仅有65%（t=11.73~78.33,P<0.01）。结论 Ad-Tp-E1a-Gp-NIS能实现条件性复制并具有明确的肿瘤靶向性。在细胞水平实验中,能引导放射性¹³¹I杀死胶质瘤细胞。     

靶向性启动子携带报告基因NIS介导提高胶质瘤摄碘能力

目的 在细胞实验中探讨靶向性人端粒酶逆转录酶(hTERT)启动子携带人类钠碘转运体(hNIS)基因能否提高胶质瘤的摄碘能力.方法 检测在hTERT启动子引导下表达hNIS基因的腺病毒,使用该腺病毒转染U87和U251细胞系,然后使用Υ记数仪检测转染后细胞的摄碘能力.结果 实验组肿瘤细胞在转染Ad-hTERT-hNIS后...     

131I标记纳米脂质体靶向治疗结肠癌的实验研究

目的 研究¹³¹I-antiEGFR-BSA-PCL对LS180细胞结肠癌裸鼠移植瘤内照射的治疗效果。方法 构建抗表皮生长因子受体(EGFR)标记的纳米脂质体及EGFR靶向性。通过荧光共聚焦显微镜、细胞摄碘实验观察纳米载体的靶向性及LS180细胞对其摄取情况。将裸鼠40只按随机数字表法分为4组,通过瘤体内注射的方式向移植瘤内分别注射74 MBq (740 MBq/ml) ¹³¹I-antiEGFR-BSA-PCL、¹³¹I-BSA-PCL、¹³¹I及相同体积的生理盐水。通过研究裸鼠体重、肿瘤体积、SPECT显像及组织病理学方法,观察纳米脂质体的抑瘤效果。结果 共聚焦实验显示,与BSA-PCL组相比,antiEGFR-BSA-PCL组细胞内绿色荧光较明显,其介导的胞吞效应显著。摄碘率实验中,LS180细胞对¹³¹I-antiEGFR-BSA-PCL的摄取率明显高于¹³¹I-BSA-PCL(t=2.77~5.40,P<0.01)。¹³¹I-antiEGFR-BSA-PCL组与¹³¹I-BSA-PCL组裸鼠肿瘤增殖均较慢,二者差异无统计学意义(P>0.05)。给药后72 h,¹³¹I-antiEGFR-BSA-PCL与¹³¹I-BSA-PCL的肿瘤摄取率分别为(21.61±1.01)和(20.58±0.65)% ID/g,均明显高于¹³¹I组(t=9.36、8.69,P<0.01)。SPECT显像显示纳米脂质体主要特异性积聚在肿瘤区。结论 ¹³¹I-antiEGFR-BSA-PCL对LS180结肠癌裸鼠移植瘤有明显的抑制作用。     

131I-RGD-BSA-PCL用于非小细胞肺癌荷瘤裸鼠SPECT/CT显像及抑瘤作用

目的 探讨¹³¹I-RGD-BSA-PCL核素纳米载体对非小细胞肺癌荷瘤裸鼠模型SPECT/CT显像效果及其对肿瘤的抑制作用。方法 构建纳米脂质体¹³¹I-RGD-BSA-PCL及¹³¹I-BSA-PCL,通过荧光共聚焦显微镜观察该载体在非小细胞肺癌细胞系H460的靶向性结合及细胞摄取情况;采用氯氨T法标记核素纳米载体;流式细胞术观察核素纳米载体对肿瘤细胞的杀伤作用。构建荷瘤裸鼠模型,研究核素纳米载体在荷瘤裸鼠体内的组织分布、肿瘤体积变化及各组荷瘤裸鼠SPECT/CT断层显像。结果 给药后1和8 h,H460细胞质和细胞核对RGD-BSA-PCL、BSA-PCL两种纳米载体均有明显摄取。Na¹³¹I、¹³¹I-BSA-PCL及¹³¹I-RGD-BSA-PCL对H460细胞的早期凋亡率分别为（33.3±12.5）%、（68.4±8.0）%和（70.5±12.2）%。荷瘤裸鼠体内实验中,给药后24和72 h,肿瘤¹³¹I-RGD-BSA-PCL摄取率均高于¹³¹I-BSA-PCL（t=9.53、5.03,P<0.01）。给药后23 d,¹³¹I-RGD-BSA-PCL肿瘤体积抑制最明显（t=126.44,P<0.01）。SPECT/CT显示,给药后21 d,¹³¹I-RGD-BSA-PCL在肿瘤内信号强度明显强于¹³¹I-BSA-PCL。结论 ¹³¹I标记的纳米脂质体¹³¹I-RGD-BSA-PCL对H460细胞裸鼠移植瘤具有明显的抑瘤作用,且¹³¹I-RGD-BSA-PCL能较长时间停留在肿瘤中。