长链核酸扩增技术评价病毒灭活效果的研究

目的:探讨用长链核酸扩增技术评价病毒灭活效果的可行性.方法:针对伪狂犬病毒(pseudorabies virus,PRV)糖蛋白gD基因前后的保守区设计预计产物长短不一的5对引物,用半巢式PCR技术扩增经低pH法(4.0±0.1)、巴氏消毒法[(60±1.0)℃]和s/D法(有机溶剂/洗涤荆)处理后的PRV核酸,同时以细胞感染法做平行对照.结果:低pH对PRV核酸有破坏作用,处理时间越长,核酸损伤程度越明显,处理60 min时,6.62 lgTCID50的PRV完全被灭活.5条不同长度PCR扩增产物中,只有3.9 kb的长片段检出与细胞培养结果一致.7.25 lgTCID50的PRV经(60±1.0)℃处理20 min后即被完全灭活,7.13 lgTCID50的PRV经s/D法处理1 h后被完全灭活,但各长度核酸片段扩增均为阳性,与细胞感染试验结果不符.结论:低pH对PRV核酸的损伤程度随处理时间的延长而增加;用长链PCR(3.9 kb)技术来评价经低pH法灭活病毒的效果是可行的,而该法不适合评价巴氏消毒法和S/D法灭活病毒的效果.     

肺炎克雷伯菌突变株ΔrcsB的构建及其菌株超粘性与生物膜表型

目的 构建肺炎克雷伯菌rcsB基因缺失的无痕突变株和回补株,通过对突变株的超粘性和生物膜表型进行分析,探讨转录调控子RcsB对细菌超粘性和生物膜形成能力的影响.方法 首先构建突变株ΔrcsB,PCR扩增rcsB基因上下游同源臂片段,克隆到质粒pKO3-Km上,将重组质粒导入肺炎克雷伯菌NTUH-K2044中,经同源重组后筛选得到无痕突变株.然后构建回补株,扩增rcsB基因片段,克隆到质粒pBAD33上,将重组质粒导入突变株ΔrcsB中,得到回补株.测定野生株、突变株、回补株的超粘性和生物膜形成能力.结果 成功构建rcsB基因缺失的无痕突变株ΔrcsB和回补株C-ΔrcsB.与野生株相比,突变株超粘性和生物膜形成能力均减弱,回补株介于野生株和突变株之间.结论 转录调控子RcsB对肺炎克雷伯菌超粘性和生物膜形成具有正向调控作用.     

运用温病学说辨治病毒性肝炎的思路与设想

史定文氏等报道:病毒性肝炎同祖国医学的温病从发病特点、流行病学、传播途径各方面都十分相似,因而作者认为把该病归纳在温病学理论体系,命名为“肝瘟”比较妥贴。同时提出,应运用卫气营血和三焦对     

辨证论治面临的挑战与对策

作者郝朴等认为:由于当今科学技术的飞速发展,中医学的辨证论治面临着客观临床实践的挑战,诸如四诊主要凭医生感官搜集病情,客观定量标准不足;病人临床表现不典型或无临床症状,将会形成无证可辨情     

中医药治疗原发性肝癌110例临床观察

王泽光氏等报道,以中医辨证分型为主,配合中医药免疫疗法治疗本病,具体分型如下:1.肝气郁滞,用抗癌1号(柴胡、白芍、当归、郁金、鳖甲、三棱、青皮、青黛、半枝莲);2.血淤气滞:用抗癌2号(生牡蛎、郁金、穿山甲、蜈蚣、(麻虫)虫、三棱、莪术、元胡、赤芍、芫花、露蜂房);     

中医诊法研究之管见

王德春氏报道,中医诊法是中医学理论和临床的重要基础,近三十年来对此研究取得了令人鼓舞的成果,为不断完善与提高奠定了基础,作者从两个方面谈了自己的看法。1.三十年来研究现状分析:研究内容上以舌脉为重点,兼及腹诊,小儿指纹诊等进行了广泛研究;研究方法上传统的文献整理渐为临床观察、实验研究所代替,特别是中医四诊客观化之研讨,代表了国内、外研究之主要方向,但也存在着仍未摆脱三个指头,一个枕头的现状的问题。2.今后研究的设想:认为应在全面分析中医诊法特点、充分了解各种研究手段的适用范围、对各种研究结果作出正确评价的前提下,消除门户之见,运用一切新的科学技术来为中医诊断服务。     

尖吻蝮蛇类凝血酶基因的克隆及生物信息学分析

为了获得蛇毒类凝血酶基因，本研究根据不同蛇毒类凝血酶cDNA5’和3’保守性序列设计了引物；通过RT—PCR从尖吻蝮蛇毒腺总RNA中扩增到1个808bp特异性片段，将该cDNA重组到pMD18-T载体中，利用生物信息学的方法对测序结果进行了分析。结果表明：该特异性片段中有一个783bp的开放阅读框架．其编码蛋白质序列与蛇的类凝血酶序列有98．5％的同源性，也具有蛇毒类凝血酶的典型特征。结论：本实验获得了一个新的尖吻蝮蛇类凝血酶基因。     

中医急诊昏迷病人的临床证候初探

张汉梁氏报道:由于昏迷是临床上常见的严重证候之一。笔者通过对临床收集的132例病例的病因、病变部位、宿疾、年龄等因素的分析认为:不同的病因均可共同作用于大脑中枢神经系统而出现昏迷,故应列为诊     

应用TaqMan荧光定量PCR技术建立HIV前病毒检测方法

目的建立HIV前病毒荧光定量PCR检测方法。方法常规培养8E5／LAV细胞，收集后计数，提取HIV前病毒核酸，运用实时荧光定量PCR法扩增晚期逆转录基因片段（HIVFL）。结果建立的实时荧光定量PCR技术检测灵敏度可达1拷贝，扩增结果稳定可靠。结论成功建立了HIV前病毒检测方法，为今后筛选和鉴定潜伏感染细胞以及评价抗-HIV药物的治疗效果奠定基础。     

超高压(等静水压)灭活血浆病毒的研究

目的超高压技术作为一种有效的灭菌消毒的物理手段,对灭活血浆中模型病毒的条件及灭活效果探讨。方法取正常人血浆按10%的比例分别加入PRV、PRV、VSV、PV1、PPV等指示病毒混匀,放在超高压试验机的样品仓中,以不同的压力和不同的时间进行处理。用微量细胞病变法检测超高压处理前后各组样品的病毒滴度。结果 600 Mpa处理10 min、500 Mpa处理20 min、400 Mpa处理60 min、350 Mpa处理90 min可灭活PRV、PRV、VSV等3种脂包膜指示病毒达4 lgs以上。结论该方法能够有效灭活的病毒是HBV和HCV的指示病毒。符合"血液制品去除/灭活病毒技术方法及验证指导原则"中病毒灭活工艺有效的要求。