口腔局部使用干扰素对小鼠唾液SIgA的调节

目的 :了解干扰素对口腔粘膜分泌SIgA的调节作用。方法 :以生物素 -ELISA法检测口腔使用干扰素前后小鼠唾液SIgA的水平。结果 :大、小剂量干扰素组在用药后 10天、2 0天和 3 0天都能增高唾液SIgA ,并同对照组相比有显著差异 (P <0 0 5 ) ;大剂量组SIgA的增高更多 ,特别是在 2 0天时明显高于小剂量组 (P <0 0 5 ) ;干扰素的调节作用持续至少 3 0天 ,小剂量在维持作用方面不亚于大剂量。结论 :干扰素直接作用于口腔粘膜 ,可提高局部的SIgA的分泌水平。     

静脉用丙种球蛋白治疗新生儿重症感染对细胞免疫功能的影响

应用静脉注丙球(IVIG),配合抗生素(An)治疗重症感染新生儿12例,在观察疗效及不良反应的同时,通过检测患儿治疗前后T细胞亚群及白细胞介素Ⅱ(IL-2)产生水平的变化,观察IVIG对细胞免疫功能的影响。结果显示:患儿CD_3~+、CD_4~+、CD_8~+细胞及IL-2产生水平均明显低于正常同龄新生儿。经IVIG+An及单用An治疗后,T细胞各亚群及IL-2水平均明显增高。IVIG组与An组比较,诒疗后IVIG组CD_4~+细胞明显高于An组,IL-2水平也较An组为高,但无统计学意义。疗效观察,中毒症状及原发病体征好转消失时间IVIG组较An组明显缩短。本文还就IVIG对细胞免疫功能影响的可能机制进行了讨论。     

人脐静脉内皮细胞产生IL—6的研究

本文在建立了人脐静脉内皮细胞体外培养的基础上，用ＥＬＩＳＡ双抗体夹心法检测了培养的人脐静脉内皮细胞产生ＩＬ－６的情况。结果表明：Ｗ本外培养的人脐静内皮细胞可自然分泌少量的ＩＬ－６，而在ＬＰＳ、类脂Ａ、ＨｒＴＮＦα，ＨｒＩＬ－１β等炎性因子刺激下，其产生ＩＬ－６的能力明显增强，且呈剂量依赖。同时还发现，上述因子诱导内皮细胞产生ＩＬ－６的能力不同，ＬＰＳ类脂Ａ明显低于ＨｒＴＮＦα和ＨｒＩＬ１β，而以Ｈ     

ConA诱导人T抑制细胞活性的微量检测法——K562细胞测定法

抑制性T细胞(Ts)在免疫反应及各种免疫疾患的发生发展中均起着重要作用,测定其功能,有助于探讨这些疾病的发病机理并指导治疗。常用的测定方法是ConA诱导抑制细胞(ConA-SC)活性测定法。传统的方法有不少缺点,我们对其进行了改进,建立了一种PAK562细胞为靶细胞进行微量测定的方法,现简要报告如下。 材料与方法 常规分离人外周血单个核细胞(MNC),与ConA(对照管不加ConA)共育48小时后,用Hanks液洗3次,以培养液配成浓度为     

抗AFP重链可变区单域抗体融合蛋白的构建、表达及初步鉴定

目的 构建抗甲胎蛋白(AFP)重链可变区(VH)单域抗体融合蛋白基因在大肠杆菌中的表达,并初步鉴定表达产物的活性.方法 从已构建的抗AFP单链抗体(ScFv)的载体中,经PCR扩增出VH 单域抗体基因,再克隆到融合蛋白表达载体pET32a( )中进行表达;用SDS-PAGE及Western-blot鉴定表达产物;并通过竞争抑制ELISA分析TrxA-VH融合蛋白的结合活性;细胞免疫组化染色分析其内化及结合情况.结果 VH 单域抗体基因全长339 bp,将其克隆到pET32a( )中,转化大肠杆菌可获得高效表达,Western-blot证实在相应分子质量处,有TrxA-VH融合蛋白的显色条带.经初步纯化和复性后,获得抗AFP的VH单域抗体融合蛋白.竞争抑制ELISA及细胞免疫组化证明,表达产物具有与AFP特异结合的活性.结论 成功构建了抗AFP的VH单域抗体融合蛋白,为临床的应用研究奠定了基础.     

PDGFR单克隆抗体的制备和鉴定

目的 通过谷胱甘肽转硫酶偶联的血小板衍生因子受体氮端的融合蛋白(GST-PDGFR-N)制备有生物活性的单克隆抗体.方法 用GST-PDGFR-N融合蛋白作为免疫原,通过杂交瘤技术制备抗PDGFR的单克隆抗体,用间接ELISA、Western blot、免疫组化等方法对抗体的抗原结合特性进行鉴定.结果 获得两株能稳定分泌抗PDGFR单克隆抗体的细胞3B12F5和3C6H7C11,亚类鉴定两种单抗均为IgG1.间接ELISA法测定两株细胞腹水抗体的效价分别为1:102400为和1:25600.Western blot法显示PDGFR单克隆抗体特异性地识别免疫原和胶质瘤细胞株U251中的抗原成分.细胞免疫组化显示此单抗可以特异的识别胶质瘤细胞株U251和膀胱癌细胞株BIU87中表达的PDGFR抗原.结论 成功制备PDGFR单克隆抗体,为研究PDGFR的表达情况和临床检测提供了一个有用的工具.     

重组人L型丙酮酸激酶N末端单克隆抗体的制备与鉴定

目的 制备抗人L型丙酮酸激酶N末端(PK-N)的单克隆抗体并对其特异性进行鉴定.方法 以PK-N-GST-tag表达蛋白作为免疫原免疫BALB/c小鼠,取其脾细胞与SP2/O细胞融合,经多次筛选及克隆化,建立能稳定分泌抗PK-N单克隆抗体的杂交瘤细胞株.用ELISA、Western blot、免疫组化对此单克隆抗体特性进行鉴定.结果 筛选到两株能稳定分泌抗PK-N单克隆抗体的细胞株,亚类鉴定重链为IgGzb,轻链为kappa链.ELISA法测定腹水效价分别为1:409600和1:102400,抗体相对亲和力分别为3.54×108L/mol和2.72×108:L/mol.Western blot显示抗体能特异识别免疫原和人肝细胞株HL-7702中的天然丙酮酸激酶蛋白.免疫组化进一步显示了其在细胞及组织中的定位,均匀的分布于细胞的胞浆中.结论 成功制备了抗PK-N单克隆抗体.     

改良MTT法检测自然杀伤细胞的活性

采用经作者改良的ＭＴＴ比色测定自然杀伤细胞（ＮＫＣ）活性。结果显示：在效应细胞（ＥＣ）和靶细胞（ＴＣ）活性均≥９５％，ＥＣ≥３．０×１０２／Ｗｅｌ、ＴＣ≥１．６×１０２／Ｗｅｌ时，细胞还原ＭＴＴ产生的甲瓒溶解后的ＯＤ５７０ｎｍ值与细胞数成线性相关（ｒｅ＝０．９４，ｒｔ＝０．９７，Ｐ＜０．００１）。本法在测得ＥＣ∶ＴＣ为４０∶１时，正常人外周血ＮＫＣ活性为４５．６４％。用本法和３Ｈ－ＴｄＲ掺入抑制试验同时测定１０份白血病患者外周血ＮＫＣ活性，分别为３４．８６±７．８０％和３５．１６±８．４０％，两者呈良好的正相关（ｒ＝０．８７６，Ｐ＜０．００１）。本法简便、稳定可靠，是一种很有价值的测定ＮＫＣ活性的方法。     

重症肌无力患者外周血单个核细胞白细胞介素6活性变化

探讨白细胞介素 6(IL -6)在重症肌无力 (MG)发病机理中的作用及其临床意义。　　方法　采用3H -TdR掺入法检测 40例正常对照及 42例MG患者外周血单个核细胞IL -6分泌活性。　　结果　MG患者组IL -6活性显著高于正常对照组 ,且IL -6活性变化与乙酰胆碱受体抗体产生以及与MG临床类型、病情、预后密切相关。　　结论　IL -6在MG发病机理中起着重要作用 ,检测IL -6活性对区分MG临床类型、判断病情、推测预后、指导治疗有重要的参考价值。     

重组IL-1受体拮抗剂单克隆抗体的鉴定

采用点印迹法与Ｗｅｓｔｅｒｎｂｌｏｔｉｎｇ技术对ｒＩＬ－１ｒａＭｃＡｂｓ进行了鉴定。结果表明：抗ｒＩＬ－１ｒａＭｃＡｂ２Ｅ４在点印迹中识别信号为阳性（＋＋），经转移电泳后可在ＮＣ膜上特异性识别ｒＩＬ－１ｒａ（２０ｋｄ）；ＰｃＡｂ对照识别结果进一步表明Ｗｅｓｔｅｒｎｂｌｏｔｉｎｇ技术的高度敏感性及ＭｃＡｂ２Ｅ４的高度特异性。此株单抗的鉴定成功将有助于进一步认识ＩＬ－１的生物学活性，特别是在炎症疾病中的病理作用，以指导ｒＩＬ－１ｒａ治疗炎症的临床应用