锌对新生大鼠海马培养神经元生长发育的作用

采用无血清培养的新生大鼠海马神经细胞，观察锌对脑细胞生长发育的作用。结果表明，锌能促进体外培养海马神经元的神经突起生长，突起数增多；神经元的活存数和神经元胞体的直径和面积增加。用流式细胞术分析证明，神经元总蛋白含量增高。本结果提示，锌对海马神经元的生长发育具有促进作用     

rhIL—1β,rhIL—2和rhIL—6对体外培养海马神经胶质细胞c—fos表 …

采用免疫组织化学方法观察了重组人白细胞介素－１β、重组人白细胞介素－２和重组人白细胞介素－６对体外培养大鼠海马神经胶质细胞ｃ－ｆｏｓ表达的影响。结果证明，培养１２ｄ的海马神经胶质细胞与重组人白细胞介素－１β（１００Ｕ／ｍｌ）、重组人白细胞介素－２（２００Ｕ／ｍｌ）和重组人白细胞介素－６（２００Ｕ／ｍｌ）一起孵育２ｈ后出现ＦＯＳ－免疫反应阳性的细胞核，随着所给剂量的逐渐加大，ＦＯＳ反应阳性胞核数量也     

NMDAR1单克隆抗体抑制谷氨酸诱导的大鼠海马神经元Ca2+内流

目的观察人N-甲基-D-门冬氨酸受体(NMDAR,NR)主亚基(NR1)单克隆抗体mAbN1对谷氨酸诱导的大鼠海马神经元Ca2 内流的影响。方法建立谷氨酸介导的大鼠海马神经元兴奋毒性损伤模型,以mAbN1及MK-801分别预处理海马神经元,用Fluo-3/AM法,在激光扫描共聚焦显微镜下观察对细胞内游离Ca2 浓度([Ca2 ]i)的影响。结果mAbN1能显著抑制谷氨酸所致海马神经元[Ca2 ]i升高,此作用强于MK-801,且其本身对生理状态下神经元[Ca2 ]i无影响。结论mAbN1的抗兴奋毒性作用可能是通过改变NR的蛋白质二级结构从而影响兴奋毒性作用中的Ca2 内流实现的。     

一种低成本、低本底的免疫细胞化学反应方法

为了探讨一种适合培养细胞的低本底、低成本免疫细胞化学方法 ,本研究将低浓度的 Triton X-10 0加入抗体稀释液和洗液中 ,观察了其对 ABC反应时的抗体和 ABC的使用浓度和反应效果的影响。结果证明 ,在抗体稀释液和洗液中加入 0 .1%Triton X-10 0可以增强细胞对抗体的通透性 ,在不减弱阳性信号的状况下使 -抗的使用浓度明显降低 ,使生物素化二抗和 ABC的使用浓度达到 1/ 10 0 0～ 1/ 40 0 0 ,并大大减弱染色本底。本研究结果提示 ,在这一稀释度明显低于目前试剂盒建议的使用浓度。在充分显示阳性信号的前提下 ,使抗体的使用浓度和量大幅度减少 ,从而实现了降低本底和实验成本的目的     

低氧预处理对大鼠海马神经元缺氧耐受性和Jun基因表达的影响

取培养 1 2天的神经元 ,置于缺氧环境中培养 4小时后取出 ,再置含 0 .1 0Ｌ ＬＣＯ2 和空气培养箱内复氧培养 2 4小时和 72小时 ,于不同时间取出 ,观察其存活数、Ｊｕｎ表达阳性和阴性的神经元数。结果发现缺氧前对照组和低氧预处理组神经元存活数未见明显变化 ;缺氧前两组海马细胞中Ｊｕｎ表达阳性细胞百分率分别为 1 0 .5 7%± 3 .45 %和1 0 .1 7%± 2 .84%。缺氧 4小时复氧 2 4小时～ 72小时后 ,神经元中Ｊｕｎ表达阳性百分率较缺氧前显著增多。经缺氧预处理的神经元缺氧———复氧后Ｊｕｎ表达阳性百分率明显低于对照组 ,神经元存活数明…     

人重组白细胞介素—6对缺氧对后海马培养神经…

用免疫组化方法，观察缺氧诱导体外培养大鼠海马神经细胞Ｆｏｓ表达及人重组白细胞介素－６（ｒｈＩＬ－６＿的影响。结果显示，经ｒｈＩＬ－６卵育的海马神经细胞缺氧后Ｆｏｓ免疫反应一胸核的百分率和Ｆｏｓ反应阳性胸核的平均光密度均明显低于对照组，表明缺氧能诱导体外培养海马神经细胞Ｆｏｓ的表达，ｒｈＩＬ－６能抑制缺氧神经细胞Ｆｏｓ的表达。提示ｒｈＩＬ－６可能参与脑缺氧损伤的调控。     

N-甲基-D-门冬氨酸受体重组肽抗血清对谷氨酸兴奋毒性导致神经元坏死和凋亡的保护作用

目的 观察N-甲基-D-门冬氯酸受体(NMDAR，NR)主亚基(NR1)M3M4环重组肽自身抗血清对不同浓度谷氨酸诱导的神经元死亡的保护作用。方法 用NR1 M3M4环重组肽免疫Balh／C(H-2^d)小鼠制备抗血清，用锥虫蓝染色法和原位末端标记(TUNEL)法观察抗血清对原代培养海马神经元兴奋毒性坏死和凋亡的保护效应。结果 在高浓度谷氨酸(500μmoL／L)条件下，阳性抗血清可以使神经元坏死减少16％；在低浓度谷氨酸(50μmol／L)作用下，阳性抗血清保护可使神经元凋亡率减少13％。结论 NMDAR重组肽自身免疫抗血清具有抗兴奋毒性作用，这一结论为免疫防治兴奋毒性脑损伤策略的建立提供了坚实的体外基础。     

同源盒基因Lhx4在PC12细胞缺氧损伤保护中的作用

目的:转染并筛选Lhx4高表达的PC12细胞株,观察Lhx4基因对PC12细胞的缺氧保护作用.方法:①用RT-PCR检测PC12细胞缺氧培养后Lhx4基因的表达变化;②Lhx4基因连接至pLXIN逆转录病毒载体,收集病毒上清,感染PC12细胞,G418筛选阳性克隆,PCR鉴定,所筛选的克隆缺氧培养;③通过台盼蓝染色和培养液中乳酸脱氢酶活性的检测评价PC12细胞的存活状态.结果和结论:PC12细胞缺氧培养4 h后Lhx4基因的表达明显上调;缺氧8 h后Lhx4基因表达开始下调.所筛选的Lhx4高表达转染细胞株表现出明显的缺氧耐受性,相同的损伤条件下,细胞的存活数目及生存状态明显优于对照组.说明Lhx4基因在PC12细胞的缺氧损伤保护中具有重要的作用.