生殖器疱疹疫苗的研究进展

生殖器疱疹的发病率逐年升高,是HIV经性传播感染的主要促进因素之一,已成为严重的公共卫生问题.疱疹病毒疫苗是预防生殖器疱疹感染的重要措施,随着基因工程技术的发展,越来越多的手段用于疫苗的研制.综述减毒活疫苗、复制受限疫苗、DISC疫苗、亚单位疫苗、DNA疫苗的研究进展.     

TOPO定向克隆和表达Ⅱ型单纯疱疹病毒gG基因的免疫优势表位片段

目的 通过基因工程技术,克隆和表达Ⅱ型单纯疱疹病毒gG基因的免疫优势表位片段。方法 以PCR法扩增HSV-2的gG基因的免疫优势表位片段;将PCR产物与TOPO定向表达载体连接;然后鉴定含有目的基因的重组表达载体;并转化BL21Star^TM菌株诱导表达目的蛋白;以免疫印迹法检测表达的目的蛋白。结果 PCR法扩增出616bp的DNA片段;通过PCR法及测序法证实重组质粒中含有616bp的DNA片段,其中99.5%序列与目的基因序列一致。SDS-PAGE结果显示重组蛋白在3h时的表达产量最高。免疫印迹法通过抗gG的单克隆抗体,证实重组蛋白在大肠杆菌中的表达。结论 Ⅱ型单纯疱疹病毒的gG免疫优势表位基因片段的成功表达,为制备国产的HSV-2血清诊断试剂提供资料。     

生殖器疱疹疫苗的研究进展

生殖器疱疹的发病率逐年升高，是HIV经性传播感染的主要促进因素之一，已成为严重的公共卫生问题。疱疹病毒疫苗是预防生殖器疱疹感染的重要措施，随着基因工程技术的发展，越来越多的手段用于疫苗的研制。综述减毒活疫苗、复制受限疫苗、DISC疫苗、亚单位疫苗、DNA疫苗的研究进展。     

免疫层析法在性传播感染即时诊断中的应用

性传播感染(STIs)给全球特别是发展中国家的公共卫生健康带来严重危害.其中,艾滋病病毒(HIV)、梅毒、沙眼衣原体以及淋球菌危害最大.为了预防和控制STIs,世界卫生组织(WHO)要求STIs的试剂价廉、敏感、特异、使用方便、快速和可靠、无需设备以及普及性强,因此,我们阐述了免疫层析方法在性传播疾病中的应用.     

肺结核即时诊断技术研究进展

肺结核给全球特别是发展中国家和地区的公共卫生健康带来严重危害.潜伏期、耐药性肺结核的检测,以及患者依从性差给全球肺结核的预防和控制提出了新的难题.WHO要求对结核病检测成本低廉、使用方便、快速可靠、无需设备,且普及性强.因此,本文总结了现有的基于免疫血清学和分子生物学开发的肺结核诊断产品,以及即时诊断(point-of-care testing,POCT)技术的最新研究进展,以期为将来开发新型高效的结核病POCT技术和产品提供思路.     

基因芯片技术检测生殖器溃疡性性病病原体

目的建立检测引起生殖器溃疡性性病病原体的基因芯片技术。方法设计并合成各病原体特异性探针，用点样仪将合成的特异探针点于玻片介质上，并经过点样后处理制备成基因芯片；荧光标记各病原体标准株及临床标本的特异靶基因，进行基因芯片杂交、扫描并分析结果。结果各病原体均可见特异的基因芯片荧光杂交信号：单一病原体出现一种特异荧光信号；混合病原体的不同组合出现相应组合的特异荧光信号。对40例生殖器溃疡临床标本进行芯片杂交检测，并与暗视野显微镜 聚合酶链反应(PCR)及HSV培养 PCR结果比较，具有较好的一致性(K值分别为0．882和0．947)。另外发现混合感染2例。结论本研究初步建立的基因芯片技术具有准确、特异及同时检测多重感染的特点。     

人乳头瘤病毒cp6108的序列研究

目的 对尖锐湿疣中人乳头瘤病毒(HPV)cp6108进行序列研究。方法 应用TA克隆后测序和PCR产物直接测序进行HPV cp6108的基因序列测定。结果 5例HPV cp6108阳性的尖锐湿疣的模板DNA经TA克隆后测序和PCR产物直接测序结果显示,两种测序结果一致,BLAST比对结果显示,与基因库中HPV cp6108提交序列有99%的一致性,排在比对结果第1位,所有标本的cp6108的序列与网上提交序列对比后发现均有3处相同的密码子发生改变(以起始密码子GCA之G为第1位):第210位核苷酸G(鸟嘌呤,)突变为A(腺嘌呤),导致第70位密码子GAG→GAA,发生同义突变;第229位核苷酸G(鸟嘌呤)突变为A(腺嘌呤),导致第77位密码子GAT→AAT,编码的氨基酸由天冬氨酸(Asp,D)变为天冬酰氨(Asn,N),即发生D77N错义突变;第346位核苷酸A(腺嘌呤)突变为C(胞嘧啶),导致第116位ACT→CCT,编码的氨基酸由苏氨酸(Thr,T)变为脯氨酸(Pro,P),即发生T116P错义突变。结论 与基因库提交序列相比,本研究检测到的HPV cp6108序列中有3处突变,其中G70A为同义突变,D77N和T116P为错义突变。     

聚合酶链反应对一期梅毒患者的诊断

目的:建立聚合酶链反应(PCR)用于快速检测梅毒螺旋体。方法:根据梅毒螺旋体47ku膜蛋白基因序列,自行设计筛选一对特异寡核苷酸引物,建立梅毒螺旋体的PCR。同时对其进行实验室评价和临床标本的检测验证。结果:PCR对梅毒螺旋体能产生特异性扩增,片段大小为252bp,而对其他生殖道常见菌及人基因组DNA不能扩增出任何片段。检测65例临床标本,PCR检查阳性54例(83.1%),梅毒螺旋体明胶颗粒凝集试验(TPPA)检查阳性52例(80%),梅毒螺旋体暗视野显微镜检查阳性40例(61.5%)。PCR检测结果,与暗视野显微镜检查结果比较,差异有显著性(P<0.01);与梅毒血清学检查结果比较,差异无显著性(P>0.05)。结论:PCR可特异、快速地检测梅毒螺旋体,并具有较好的敏感性。     

尖锐湿疣皮损中人乳头瘤病毒基因分型研究

目的 采用反向杂交研究尖锐湿疣皮损中人乳头瘤病毒(HPV)的感染状况。方法 提取尖锐湿疣新鲜标本的HPVDNA,采用PGMY09/11引物系统进行聚合酶链反应(PCR)。PCR产物在标记有37种HPV型特异性探针的尼龙膜条带上进行HPVDNA杂交分型。所有DNA模板采用HPV6和11型特异性引物进行PCR检测验证。数据经SPSS11.0统计软件分析。结果 杂交结果显示201例标本HPVDNA均为阳性,共发现31种HPV基因型,其主要的HPV基因型名称及所占比例分别如下:HPV11(53.7%,108/201)、HPV6(43.8%,88/201)、HPV16(6.5%,13/201)、HPV52(6.0%,12/201)、HPV33和HPVcp6108(均为5.5%,11/201)、HPV42(5.0%,10/201)等。60.2%(121/201)的标本由单一型HPV感染,39.8%的标本由混合型HPV感染。HPV6和11型特异性引物PCR结果显示HPV6和11的阳性率分别为45.8%和56.2%,与杂交结果比较,一致性分别为98.5%和96.5%,资值分别为0.97和0.93,P值均<0.001。结论 至少有31种HPV基因型与尖锐湿疣相关。HPV11阳性率最高,HPV68、40、54、67、73、82、35、64和83在尖锐湿疣中少见,HPVcp6108在尖锐湿疣中首次发现,且阳性率较高(与HPV33并列第5位)。HPV26、69、70、71、72和IS39可能与尖锐湿疣不相关。尖锐湿疣中单一型和混合型HPV阳性率分别为60.2%(121/201)和39.8%(80/201)。     

PCR在阴道毛滴虫检测中的引物筛选和条件优化

目的 探讨PCR检测阴道毛滴虫的引物筛选和条件优化。方法 从文献中筛选TVA5-TVA6、TV1-TV2、TVK3-TVK73对引物进行比较,每种PCR对引物、Mg²⁺、dNTPs、Taq酶4个因素,每个因素取3个浓度水平,使用Taguchi法进行优化,筛选出每种PCR的较佳反应条件。在较佳反应条件下,比较3种PCR的敏感性。用培养法及PCR法检测阴道拭子标本,初步评价敏感性最高的PCR方法。结果 3种PCR法均具有较高的特异性,TVK3-TVK7PCR的敏感性最高。25份临床拭子标本中,培养法检测出7份阳性标本,TVK3-TVK7PCR方法检测出8份,所有培养法检测阳性的标本经PCR方法检测的结果均为阳性。结论 TVK3-TVK7PCR具有高度敏感性和特异性,是一种检测阴道毛滴虫感染的有效方法。