青藤碱对胶原诱导型关节大鼠滑膜细胞增殖及凋亡影响的研究

目的研究青藤碱对胶原诱导型关节炎(CIA)大鼠关节炎症,滑膜增生、凋亡及突变型p53的影响,揭示青藤碱抗类风湿关节炎(RA)可能的作用途径。方法采用牛Ⅱ型胶原混合弗氏不完全佐剂于W istar大鼠尾根部注射,足肿后随机分为造模加生理盐水组、甲氨蝶呤(M TX)治疗组和青藤碱(SIN O)治疗组,采用容积法和计分法分别评价后肢肿胀度和四肢关节炎症程度;左前肢和右后肢近端第3足趾关节苏木素-伊红(H E)染色,评价中性粒细胞、淋巴细胞、浆细胞浸润、滑膜细胞增生和纤维组织增生的情况;对足肿胀和病理各项指标进行回归性分析。碱性磷酸酶标记法检测大鼠滑膜细胞凋亡;免疫组织化学法检测突变型p53的表达。比较M TX和SINO灌胃治疗后各项指标的差异。结果CIA大鼠造模后,炎症迅速发展,1周内即可达到肿胀高峰,然后逐渐消退,在第21～25天后又出现第2个炎症高峰。药物治疗17d后抑制CIA肢炎症的作用逐渐显现出来。M TX和SIN O都可明显抑制第2个炎症高峰,后肢肿胀度和四肢肿胀积分在35d与造模加生理盐水组差异有统计学意义(P<0.01);病理结果中,CIA大鼠关节表现为单个核炎症细胞浸润(包括中性粒细胞、淋巴细胞和浆细胞的浸润),滑膜细胞增生、纤维组织增生;足肿与淋巴细胞浸润,滑膜增生呈直线回归关系,其中以滑膜增生为主(P<0.01     

通痹灵总碱对类风湿关节炎滑膜成纤维样细胞增殖的影响

目的：探讨通痹灵总旗对类风湿关节炎滑膜成纤维样细胞增殖的影响。方法：分离培养类风关患者滑膜成纤维样细胞，IL-1D刺激，不同浓度通痹灵总碱作用后，MTT法测定细胞增殖率。结果：通痹灵总碱能显著抑制滑膜成纤维样细胞增殖，并且抑制作用呈明显的量效关系。结论：通痹灵总碱可抑制类风关滑膜成纤维样细胞增殖。     

通痹灵总碱对LPS(脂多糖)刺激后的巨噬细胞产生炎性细胞因子的影响

目的：观察中药通痹灵（TBL）的有效部位-总生物碱对LPS（脂多糖）刺激后的巨噬细胞产生炎性细胞因子IL-1β、TNF-α的影响。方法：培养人类单核白血病细胞系——THP-1细胞，在PMA（Phorbol 12-mmstate 13-acetate）作用下分化为巨噬细胞。体外用LPS（Lipopolysaccharide）刺激分化的巨噬细胞，以MTX（甲氨喋呤）作为对照，培养有药物作用的细胞24小时后检测细胞上清液中炎性细胞因子IL-1β、TNF-α含量并用PR-PCR（逆转录-聚合酶链式反应）半定量测定IL—1β mRNA、TNF-α mRNA的表达。结果：LPS刺激PMA分化后的THP—1细胞，其IL-1β、TNF—α含量明显升高（与正常组比较P〈0．01），不同浓度的通痹灵总碱（200、100、50、25mg／L）及MTX明显抑制IL—1β、TNF-α的产生（P〈0．01），并下调IL-1β mRNA、TNF-α mRNA的表达。结论：通痹灵总碱抑制巨噬细胞分泌炎性细胞因子IL-1β、TNF-α，进而抑制了一系列免疫炎症反应造成的病理损伤。     

论"少阳枢"、"少阴枢"的理论及其临床应用

开、阖、枢是门户运动的三种状态。《黄帝内经》首先借用之以说明人体阴阳之气的出入升降，并有“太阳为开，阳明为阖，少阳为枢”及“太阴为开，厥阴为阖，少阴为枢”等说，具体结合《伤寒论》的临床应用来看，则小柴胡汤是调阳枢之代表方，四逆散是调阴机之代表方。     

通痹灵总碱对类风湿关节炎滑膜成纤维样细胞增殖的影响

目的：探讨通痹灵总旃对类风湿关节炎滑膜成纤维样细胞增殖的影响。方法：分离培养类风关患者滑膜成纤维样细胞，IL—ID刺激，不同浓度通痹灵总碱作用后，MTT法测定细胞增殖率。结果：通痹灵总碱能显著抑制滑膜成纤维样细胞增殖，并且抑制作用呈明显的量效关系。结论：通痹灵总碱可抑制类风关滑膜成纤维样细胞增殖。     

对《金匮要略》关节疼痛的探讨

关节疼痛是痹证的主要症状之一 ,痹证与现代医学的风湿性关节炎、类风湿性关节炎、骨关节炎等病的临床表现颇为相似 ,是常见病、多发病之一。在《金匮要略》(以下简称《金匮》)中对关节疼痛的论述主要在湿病、历节病等篇章。研究了《金匮》中对关节疼痛的有关论述 ,以指导临床实践。综观《金匮》全书 ,书中论述了关节疼痛的病因病机、伴随症状、治法及饮食宜忌等。感受风寒湿邪是关节疼痛的主要病因病机 ,饮食失调、正气亏虚亦可导致关节疼痛。其伴随症状有关节肿痛、关节功能障碍及一些全身症状 ,如头眩、短气、汗出、小便不利、大便反快等。就其治法而言 ,祛除风寒湿邪是主要治法 ,祛风湿兼清热是常用治法 ,扶正祛邪是重要治法。在饮食方面指出不宜过于偏嗜五味。     

通痹灵对滑膜细胞趋化因子RANTES、MCP-1影响的研究

目的：探讨通痹灵对类风湿关节炎滑膜产生趋化因子RANTES、MCP-1的影响。方法：分离培养类风关患者滑膜成纤维样细胞，IL—ID刺激，不同浓度通痹灵总碱、MTX作用后，ELISA法测定培养上清RANTES、MCP-1含量。取经通痹灵、MTX治疗后的CIA大鼠关节滑膜组织，提取总RNA，用RT-PCR法测定其中RANTESmRNA、MCP-1mRNA水平。结果：通痹灵总碱10mg／L可以非常明显减少RANTES产生，与IL—ID组比较，差异非常显著：MTX1mg／L也能减少RANTES产生，与IL-ID组比较，有显著性差异。通痹灵总碱和MTX各剂量组都能减少MCP-1产生。通痹灵能抑制滑膜组织中趋化因子MCP-1mRNA、RANTESmRNA的表达，MTX对MCP—1mRNA、RANTESmRNA的影响作用不明显。结论：通痹灵可抑制类风关滑膜趋化因予RANTES、MCP-1产生。     

通痹灵总碱对胶原诱导型关节炎大鼠软骨及其细胞代谢的影响

背景中医对类风湿关节炎(rheumatoid arthritis,RA)的认识和治疗积累比较丰富的经验,尤其是经过近几年来的研究,取得了令人瞩目的进展,具有治疗方法多,疗效确切,毒副作用少的特点,因而从中医领域进一步探寻治疗RA更为有效的药物和方法,有着重要的科学意义和社会意义.而中药能否在RA发病中通过多途径、多靶点、多环节作用方式,抑制或阻止软骨和骨的破坏并促进他们的新陈代谢及其损伤的修复的研究更是少有报道.目的探讨中药通痹灵抗软骨破坏的作用机制.设计以实验动物为研究对象的完全随机设计,对照实验研究.单位一所大学金匮教研室.材料实验于2002-08/2003-12在广州中医药大学第一附属医院综合实验室完成.Wistar清洁级大鼠,雌性,体质量(110 ±20)g,35只.由解放军第一军医大学动物实验室提供,动物合格证号2002A041.将Wistar大鼠适应性喂养3 d后,随机分为正常组、造模组、通痹灵总碱组.通痹灵总碱由广州中医药大学热带病研究所植物化学分析室提取.方法以胶原诱导型关节炎大鼠为动物模型,分组灌胃治疗后,做大鼠趾关节病理切片,常规苏木精-伊红染色,观察软骨病变;培养软骨细胞,以rrIL-1β体外刺激软骨细胞导致软骨细胞基质降解作为药理模型,加用不同浓度的通痹灵总碱,并以地塞米松作为对照组,培养48 h后,收集细胞上清液,用阿利新兰法检测GAG含量;用硝酸酶还原法检测一氧化氮的含量.主要观察指标①主要结局通痹灵总碱对胶原诱导型关节炎大鼠趾关节软骨病变及对rrIL-1β诱导的软骨细胞基质降解的影响②次要结局通痹灵总碱对rrIL-1β诱导的软骨细胞生成一氧化氮的影响.结果①趾关节病理苏木精-伊红染色切片评价结果显示通痹灵总碱组软骨破坏程度小于造模组(P＜0.01);②不同浓度的rrIL-1β(1,10,100,500,1 000μg/L)促进了软骨细胞蛋白多糖的降解(P＜0.01),且呈量效关系.③不同浓度的通痹灵总碱(200,100,50,25 mg/L)及地塞米松可明显抑制软骨细胞蛋白多糖的降解(P＜0.01)及一氧化氮的产生(P＜0.01).结论通痹灵总碱可抑制胶原诱导型关节炎大鼠趾关节软骨破坏;体外实验结果显示通痹灵总碱可对抗软骨细胞蛋白多糖的降解,其作用途径可能是通过抑制一氧化氮的生成来实现的.     

通痹灵对胶原诱导型关节炎大鼠软骨及其细胞代谢的影响

目的探讨中药通痹灵(TBL)抗软骨破坏的作用机制。方法以胶原诱导型关节炎(CIA)大鼠为动物模型,分组灌胃治疗后,做大鼠趾关节病理切片,常规HE染色,观察软骨病变;培养软骨细胞,以鼠重组白细胞介素-1β(rrIL-1β)体外刺激软骨细胞导致软骨细胞基质降解作为药理模型,加用不同浓度的通痹灵总碱,并以地塞米松作为对照组,培养48h后,收集细胞上清液,用阿利新蓝法检测葡糖胺聚糖(GAG)含量;用硝酸酶还原法检测NO的含量。结果①趾关节病理HE切片评价结果显示:通痹灵总碱组软骨破坏程度小于造模组(P<0.05〉;②不同浓度的rrIL-1β(1、10、100、500、1000ng/ml)促进了软骨细胞蛋白多糖的降解(P<0.01),且呈量效关系;③不同浓度的通痹灵总碱(200、100、50、25mg/L)及地塞米松可明显地抑制软骨细胞蛋白多糖的降解(P<0.01)及NO的产生(P<0.01)。结论通痹灵总碱可抑制CIA大鼠趾关节软骨破坏;体外实验结果显示通痹灵总碱可对抗软骨细胞蛋白多糖的降解,其作用途径可能是通过抑制NO的生成来实现的。     

黄仰模辨治强直性脊柱炎经验

强直性脊柱炎 (ＡＳ)是一种发病机理不明 ,与感染、遗传、自身免疫功能障碍有关的 ,主要侵犯骶髂关节、脊柱和髋关节的全身结缔组织疾病 ,又称血清反应阴性关节炎 ,属于祖国医学痹症范畴。广州中医药大学黄仰模教授辨证治疗强直性脊柱炎有较丰富的经验 ,现介绍如下。1　病因病机黄师认为本病以中轴关节慢性炎症为主 ,病变部位主要在脊柱、腰尻 ,二者皆属肾与督脉。“腰为肾之府”、“督之为病 ,脊强而厥”。肾为五脏之根本 ,寄元阴元阳 ,督脉靠肾阳温煦 ,肾阴滋养 ,故先天禀赋不足 ,或后天失养 ,导致肾督亏虚 ,筋脉失濡 ,卫阳空疏 ,风寒湿热…