肝肿瘤标志物与肝癌早期诊断研究

原发性肝癌（primary hepatocellular carcinoma,HCC）是我国最常见的恶性肿瘤之一,对其肿瘤标志物及其相关基因的检测,将有助于原发性肝癌的早期发现和诊断,提示肿瘤的严重程度,为选择治疗方案提供依据。从原发性肝癌的肿瘤标志物、肿瘤相关基因及抑癌基因二三个层面,选择与原发性肝细胞癌有密切关系的IGF-Ⅱ基因p3启动子DNA多态性、抑癌基因p16的甲基化和被公认的肿瘤标志物蛋白脚,联合分析原发性肝癌早期诊断的可行指标,提出了早期诊断原发性肝细胞癌的实验室诊断标准。     

RNA干扰Survivin基因在人神经母细胞瘤SH-SY5Y细胞中的作用

目的利用RNAi技术沉默人神经母细胞瘤SH-SY5Y细胞Survivin基因。方法应用RNAi技术,以pGCsi/U6质粒为载体构建Survivin-siRNA重组质粒,体外转染SH-SY5Y细胞,通过RT-PCR检测Survivin基因的表达。结果重组质粒转染SH-SY5Y细胞后其生长明显受抑制;Survivin基因的表达明显低于对照组(P0.01),达到了抑制效果。结论 RNAi可明显降低人神经母细胞瘤SH-SY5Y细胞中Survivin基因的表达,从而抑制细胞生长,促进凋亡。     

人骨髓间充质干细胞体外定向诱导分化为神经元样细胞

背景:文献报道体外诱导骨髓间充质细胞定向分化为神经元样细胞多应用神经生长因子类多肽制剂,选择纯化学诱导剂尚不多见.目的:建立人骨髓间充质干细胞分离培养体系,体外定向诱导人骨髓间充质干细胞分化为神经元样细胞.方法:密度梯度离心、贴壁培养法和消化时间控制相结合分离纯化人骨髓间充质干细胞并鉴定,采用B一巯基乙醇和二甲基亚砜诱导分化为神经元样细胞,观察细胞形态,通过尼氏染色、NSE和NF-200免疫细胞化学染色对已分化的神经元样细胞进行鉴定和分化率分析.结果与结论:分离得到的骨髓间充质干细胞为成纤维样细胞,可见多个核仁,β-巯基乙醇和二甲基亚砜诱导后,间充质干细胞分化为神经元样细胞,伸出较长轴突样和树突样突起且有分支,诱导后的神经元样细胞胞质中存在着深蓝色颗粒状的尼氏小体,NSE、NF-200免疫荧光细胞化学染色均呈阳性,阳性率分别为(85.6±6.7)%和(73.2±5.6)%.结果证实采用密度梯度离心、贴壁培养法和消化时间控制相结合能够成功分离和培养人骨髓间充质干细胞,人骨髓间充质干细胞能够在诱导剂β-巯基乙醇和二甲基亚砜的诱导下体外诱导分化为神经元样细胞.     

化学发光法检测保健食品中SOD活性的研究

目的：建立保健食品ＳＯＤ活性检测的标准。方法：采用化学发光法测定保健食品（花粉、茶等）中ＳＯＤ活性，及其试验条件的研究。即黄嘌呤氧化酶、次黄嘌呤、鲁咪诺、温度等因素对ＳＯＤ活性测定体系的影响，进行该方法的精密度试验，其ＣＶ（％）为２．３。结果：方法重现性好，灵敏高度，操作简便，检测迅速。结论：是监测ＳＯＤ型保健食品ＳＯＤ活性的可靠方法。     

ASD,VSD和MS患者SOD活力的研究

目的：检测房间隔缺损（ＡＳＤ）、空间隔缺损（ＶＳＤ）和二尖瓣狭窄（ＭＳ）的患者红细胞中ＳＯＤ活力，分析术后ＳＯＤ活力的变化。方法：应用四氮唑蓝法（ＮＢＴ法）。结果：ＡＳＤ、ＶＳＤ和ＭＳ患者红细胞中ＳＯＤ活力明显低于正常人，术后可见ＳＯＤ活力逐步提高，患者年龄愈小，ＳＯＤ活力增加幅度愈大。结论：ＡＳＤ、ＶＳＤ和ＭＳ患者术后可使ＳＯＤ活力增加，有利于保护心脏正常功能。     

人骨髓MSC分离培养及诱导分化为脂肪细胞的实验研究

目的建立一种分离纯化,培养扩增人骨髓MSCs的方法,并探讨体外诱导骨髓间充质干细胞分化为脂肪细胞。方法密度梯度离心,贴壁培养和消化时间控制相结合,分离纯化人骨髓间充质干细胞,并用马血清诱导分化为脂肪细胞。结果MgCs原代培养呈均匀分布的集落样生长,呈梭形,细胞传代稳定,在体外连续传代培养9代,未发生形态学改变,无衰老征象;传代培养MSCs（P3）在20％马血清的L-DMEM培养液中分化为脂肪细胞。结论骨髓MSCs体外增殖和传代能力强,通过离体培养可使体内环境下低丰度的MSCs实现数量扩增;骨髓MSCs在体外可诱导分化为脂肪细胞。     

损伤肝组织匀浆诱导间充质干细胞甲胎蛋白和白蛋白的表达

目的 建立分离、纯化大鼠骨髓间充质干细胞(MSCs)的方法,探讨损伤肝组织匀浆对MSCs的诱导分化作用.方法 采用密度梯度离心、贴壁培养法分离培养大鼠MSCs,以10%损伤肝组织匀浆、10%FBS的L-DMEM诱导培养,并在不同时间点采用免疫组化方法(SP)检测甲胎蛋白(AFP)和白蛋白(Alb)的表达.结果 MSCs在含10%损伤肝组织匀浆的10%FBS L-DMEM培养基中培养,呈类上皮样细胞.诱导组在培养7 d时,大部分细胞呈AFP阳性表达(75.2%),与对照组比较有显著差异(P＜0.05); 诱导培养 14、21和28 d AFP 表达阳性率分别为35.2%、12.3%和2.0%,与对照组及不同时间点比较差异显著(P＜0.05);诱导组在培养7 d仅少数细胞Alb呈阳性表达(14.6%),诱导培养14、21和28 d Alb表达阳性率分别为67.6%、88.9%和95.6%,与对照组及不同时间点比较均差异显著(P＜0.05).结论 该方法可获得纯度较高MSCs,损伤肝组织匀浆可诱导MSCs表达AFP和Alb.     

CHD5基因与雌激素受体阴性乳腺癌相关因子的研究

目的比较正常乳腺细胞HBL-100与雌激素受体阴性乳腺癌细胞MDA-MB-231中CHD5表达水平。初步探讨CHD5基因与雌激素受体阴性乳腺癌发生发展的相互关系及分子机制。方法应用RT-PCR法检测CHD5基因在HBL-100细胞和MDA-MB-231细胞中含量的差异;设计合成靶向CHD5的小干扰序列,构建RNA干扰质粒pRNAT-U6．1/Neo-CHD5,抑制CHD5基因的表达,并检测乳腺癌相关基因HER-2的表达情况。结果CHD5基因在HBL-100中高表达,在MDA-MB-231中低表达。酶切鉴定、DNA测序证实表达质粒构建成功,无碱基突变。重组载体能干扰HBL-100细胞CHD5基因的表达。干扰后,HBL-100细胞中CHD5表达被抑制, HER-2表达升高,呈负相关性。结论 CHD5的缺失或低表达可能与雌激素受体阴性乳腺癌的发生发展有关,为CHD5基因可能成为雌激素受体阴性乳腺癌治疗的新靶点提供理论依据。     

脱氧核酶对肝癌细胞AFPmRNA表达的影响

目的 本研究针对AFPmRNA(甲胎蛋白mRNA)设计脱氧核酶,观察其切割AFPmRNA的有效性,探索脱氧核酶在肝癌基因治疗的可能性.方法 体外转录AFPmRNA底物,设计并合成DZ(脱氧核酶)、DZs(硫代修饰脱氧核酶,序列同DZ,但两侧各有两个脱氧核苷酸进行了硫代修饰)、ASO(反义寡聚脱氧核苷酸)、无关DZ对照.体外切割AF-PmRNA;经转染试剂将脱氧核酶转染入肝癌细胞HepG2,利用RT-PCR法检测AFPmRNA水平的变化;免疫细胞化学及图像分析系统检测AFP蛋白质表达情况;MTT法初步估计肝癌细胞的生长效应.结果 DZ与DZs在体外均可切割AFPmRNA底物;经转染DZ、DZs的细胞均下降AFPmRNA的水平,而且DZs的作用更强;经转染DZ与DZs的细胞均下降AFP的表达,ASO也略下降AFP的表达;DZ、DZs有抑制细胞生长的作用.结论 本实验设计的脱氧核酶能在细胞外有效切割AFPmRNA;在细胞内也能切割AFPmRNA、抑制AFP的表达、抑制肝癌细胞的生长,为肝癌的基因治疗提供可能性.