半叶马尾藻多糖对辐射损伤小鼠免疫功能的保护作用

目的 探讨半叶马尾藻多糖[Sargassum hemiphyllum (Turner) C.Ag,SHP]对辐射损伤小鼠免疫功能的影响.方法 选取74MBq的32P-玻璃微球(32P-GMS)肿瘤内照射导致荷瘤小鼠辐射损伤,通过流式细胞术、分光光度法、酶释放法测定不同浓度的SHP对辐射损伤小鼠免疫功能的保护作用.结果 照射组荷瘤小鼠免疫功能明显低于正常对照组(P＜0.01);200,400,800 mg/kg SHP口服灌胃加照射组荷瘤小鼠免疫功能明显高于照射组(P＜0.01).结论 74MBq的32P-GMS肿瘤内照射可以抑制小鼠的免疫功能,SHP对辐射损伤小鼠的免疫功能有保护作用.     

老年冠心病患者血浆HCY、CRP和血脂水平变化及其与冠脉病变程度的关系

目的:探讨冠心病(CHD)患者血浆同型半胱氨酸(HCY)水平与冠脉病变程度及C-反应蛋白(CRP)、血脂水平的关系。方法:检测102例CHD患者和27例正常对照人群的血浆HCY和CRP、甘油三酯(TG)、总胆固醇(TC)和脂蛋白(a)[LP(a)]水平,并进行比较及相关性分析。结果:CHD组血浆HCY以及CRP、TG、TC、LP(a)水平显著高于正常对照组;CHD组血浆HCY水平与CRP、TG、TC、LP(a)无明显相关性(P>0.05),血浆HCY、CRP、TG、TC、LP(a)水平随着冠脉病变支数增加而增高,呈显著正相关。结论:高血浆HCY是CHD的独立危险因素,对CHD的预防和诊断具有一定的临床意义。     

shRNA介导的RNAi载体构建及对肝癌耐药细胞MDR1基因表达的抑制

目的:重组构建抑制多药耐药MDR1基因表达的shRNA真核表达载体,研究其对肝癌耐药细胞MDR1基因表达的抑制作用,以及对P-糖蛋白(P-gp)表达和功能的抑制作用.方法:根据MDR1基因序列,设计两段21个碱基的MDR1特异性靶序列作为shRNA目标序列(sh-MDR1-1,sh-MDR1-2),重组构建psh-MDR1表达质粒.采用脂质体介导转染肝癌耐药细胞SMMC-7721/R,用MTT法测定细胞对化疗药物阿霉素(ADM)的敏感性,流式细胞仪检测细胞膜表面P-糖蛋白(P-gp)表达和细胞内Rhdaming123(Rh123)的潴留.结果:PCR和DNA测序证实了psh-MDR1-1和psh-MDR1-2重组质粒的成功构建,均能有效地抑制细胞P-gp表达;转染细胞后均能够一定程度地恢复耐药细胞对化疗药物ADM敏感性,P-gp表达水平明显降低,细胞内的Rh123稳态积累量均明显增高;第1条序列更能有效的抑制MDR1基因表达.结论:体外完成shRNA RNAi载体的构建,能有效地逆转肝癌耐药细胞MDR1基因过度表达,抑制P-gp介导的多药耐药.从DNA载体产生的shRNA在肝癌耐药细胞内能诱导RNAi,能够序列特异性地抑制MDR1基因表达.     

辛伐他汀对IFN-γ诱导的人外周血单个核细胞CD40表达的影响

目的:探讨经IFN-γ刺激后,人外周血单个核细胞表达CD40的变化,以及经辛伐他汀干预后不同基因型单个核细胞表达CD40的影响。方法:随机选择42例健康志愿者,密度梯度离心法分离外周血单个核细胞并原代培养,用100μg/LIFN-γ及20μmol/L辛伐他汀对单个核细胞进行干预,流式细胞术检测单个核细胞培养24h后表达CD40的水平。聚合酶链反应限制性片段长度多态性(PCR-RFLP)检测这42位志愿者CD40-1C/T基因多态性,分析不同基因型个体外周血单个核细胞表达CD40的水平。结果:基础状态下单个核细胞培养24h后,CD40表达水平升高,且CC、CT、TT基因型单个核细胞CD40表达水平无显著差异(P>0.05);IFN-γ刺激状态下,单个核细胞CD40表达水平显著升高,且CC基因型升高的幅度显著高于CT、TT基因型(P<0.05);辛伐他汀和IFN-γ共同作用下,辛伐他汀可显著抑制IFN-γ诱导的CD40表达,但对CC、CT、TT基因型单个核细胞的抑制率没有统计学意义(P>0.05)。结论:CD40-1C/T多态性可以影响单个核细胞CD40表达水平,辛伐他汀可显著抑制IFN-γ刺激后CD40的表达,但对不同基因型单个核细胞的保护作用无显著性差异。     

急性脑出血患者血清NSE的变化

近年来生物体液中神经元特异性烯醇化酶（Neuron—specific enolase，NSE）被认为是直接反映脑神经功能损害程度的一种灵敏的特异性指标。正常情况下，NSE占脑内全部可溶性蛋白的1．5％，外周血中NSE几乎检测不到。本文通过检测急性脑出血患者外周血NSE的变化，为NSE作为评定脑功能损害程度的依据之一积累资料。     

实时荧光定量PCR检测HBV DNA的线性范围与最低检出限的验证

目的 试用实时荧光定量PCR定量检测乙型肝炎病毒核酸(HBV DNA),求出其线性范围与最低检出限,从而对本实验室检测HBV DNA的主要性能进行验证。方法 参照相关的文件,通过系列稀释高浓度标本得到超过厂家申明线性范围的系列浓度标本,进行线性范围的验证;通过系列稀释低浓度标本得到超过厂家申明最低检出限的系列浓度标本,进行最低检出限的验证。结果 HBV DNA检测的线性范围为8.58×102~8.41×107 IU/mL,最低检出限为4.07×102 IU/mL。结论 实时荧光定量PCR检测HBV DNA的线性范围与最低检出限达到预期要求,检测方法和验证方案简便、可行。     

Sysmex UF-100全自动尿沉渣分析仪检测尿红细胞影响因素分析

Sysmex UF-100尿沉渣分析仪用于临床尿沉渣分析具有简便快速的优点.该仪器对尿液中有形成份直接进行荧光染色,利用流式细胞术和电阻抗原理,识别尿液中有形成份并进行计数.但工作中发现,尿液中大量结晶、细菌等存在对红细胞的检测有影响,本文对此进行分析.     

鄂西北地区汉族人群CD40基因单核苷酸多态性分析

目的研究CD40-E1SNP和E4SNP单核苷酸多态性在鄂西北部地区汉族人群中的分布,并探讨CD40基因单核苷酸多态性与血浆可溶性CD40水平的关系。方法 318例汉族人,其中男性187例,女性131例;平均年龄31.2岁。应用聚合酶链反应-限制性片段长度多态性(PCR-RFLP)及测序的方法,CD40-E1SNP和E4SNP并计算其基因型频率及等位基因频率,酶联免疫吸附分析检测血浆可溶性CD40浓度,并与文献报道不同种族人群比较。结果鄂西北地区汉族人群CD40-E1SNP基因型频率:CC型29.2%,CT型54.1%,TT型16.7%,C、T等位基因频率分别为56.3%、43.7%,这种多态性分布在男女间差异无统计学意义(P>0.05),与英国、波兰比较,发现不同种族间CD40-E1SNP基因型分布及等位基因频率差异均存在统计学意义(P<0.01);CD40-E1SNP各基因表型之间可溶性CD40含量分别为:CC(57.3±6.6)pg/mL,CT(34.2±4.5)pg/mL,TT(28.8±4.2)pg/mL,差异存在统计学意义(P<0.01)。在实验中未检测到CD40-E4SNP单核苷酸多态性。结论鄂西北地区汉族人群中存在CD40-E1SNP单核苷酸多态性,其基因型在不同种族间存在较大的差异,并且可能影响CD40的表达,而不存在CD40-E4SNP单核苷酸多态性。     

抑制MDR1基因表达shRNA RNAi系统的构建

目的构建抑制多药耐药基因(MDR1)表达的短发夹RNA(sh RNA)真核表达载体系统.方法根据MDR1基因已知序列,设计两段21个碱基的MDR1特异性靶序列,合成两对62nt 并含有编码shRNA序列的寡核苷酸,双链退火后,克隆到经过BamH I和Xba I双酶切后线性 PG E-1载体的U6启动子下游,重组构建RNA干扰(RNAi)质粒.结果对重新构建的pshRNA-MDR1载体经P CR扩增后行电泳分析,并对含有插入基因片段行测序分析.结果表明,62个碱基均成功插入到预计位点,并且序列完全一致.结论载体的成功构建为研究其对MDR1 基因表达的抑制作用打下基础,同时使我们发展了在体内合成siRNA的方法.