原发性肝癌患者外周血中AFPmRNA检测的临床意义

通过定量检测AFPmRNA在原发性肝癌（PHC）患者外周血中的表达,探讨AFPmRNA作为PHC患者早期诊断和微转移指标的可能性。建立荧光定量聚合酶链式反应（FQ-PCR）,检测58例外周血AFPmRNA的表达量。其中,30例PHC患者中19例AFP≥20ng/m l,23例外周血中AFPmRNA有表达;肝癌患者外周血中AFPmRNA的基因拷贝数与肝癌患者有肝内外转移有明显相关,而肝炎及健康对照组外周血中AFPmRNA均未表达,肝硬化组有一例表达。应用荧光定量PCR检测PHC外周血中AFPmRNA表达情况,可以作为早期反映PHC患者外周血中是否存在肝癌细胞和发生微转移的早期灵敏指标。     

高压液相色谱法检测全反式维甲酸微囊在体内的缓慢释放

目的 将全反式维甲酸与全反式维甲酸微囊在体内的释放过程进行比较.方法 应用高压液相色谱(HPLC)技术,测定了全反式维甲酸(ATRA)的标准曲线.结果 5只家兔在1次口服20mg的裸氏全反式维甲酸后,药物在血浆中达到高峰浓度时间(Tpeak)约为1 h,峰浓度(Cpmax)为0.081 μg/mL,血浆清除半衰期(t...     

全自动血培养仪常规检测时间的探讨

目的评价全自动血培养仪（BacT／Alert，简称EA）检测时间设定4d的临床应用情况。方法用BA全自动血培养仪检测2466份血标本，观察细菌阳性检出率及其检出时间。结果2466份血标本中BA报警阳性346例，分离出333株细菌，阳性率为13．5％，最快检出时间为2h，1d内检出的阳性数占75.1％，2d内检出的阳性数占95．2％，3d内检出的阳性数占99．1％．4d内检出的阳性数占100％。假阳性率为4.0％，假阴性率为0．5％。结论应用BA有较高阳性检出率，常规孵育时间可以设定为4d。     

大鼠肝脏F蛋白基因的克隆和表达

目的获得大鼠肝脏F蛋白基因克隆(F-protein’s cDNA);利用原核(大肠杆菌)表达系统表达大鼠肝脏F蛋白。方法提取大鼠肝脏总RNA,对其进行反转录和PCR(RT-PCR)扩增出目的基因(F-protein’s cDNA),然后将其与pUCm-T载体进行连接获得克隆质粒pUCm-T-F并转化到大肠杆菌DH5α中;将测序结果正确的克隆片断重新与表达载体pET-15b连接,获得F抗原表达质粒pET15b-F并将其转化到表达菌株BL21(DE3)pLysS中,用1mmol/L IPTG诱导其表达。结果RT-PCR扩增出的目的基因(F-protein’s cDNA),经测序证明与Gene-bank上提供的F蛋白cDNA序列完全一致;表达后的全菌蛋白进行SDS-PAGE电泳检测,目的蛋白分子量大小约为43 kD,与预期值相符,表达量可达全菌总蛋白量的40%。结论表达的目的蛋白经His-tag柱进行亲和层析纯化,SDS-PAGE检测得到了不含其他杂蛋白的单一F蛋白条带,与豚鼠抗人F蛋白抗血清反应成阳性,说明我们经基因工程方法得到的纯化的F蛋白有免疫活性。     

预测急性心肌梗死患者转归的血清代谢物谱研究

目的采用液-质联用代谢组学研究平台寻找能在急性心肌梗死(AMI)患者入院时即预测患者转归的特异性代谢物。方法运用超高效液相色谱串联质谱(UPLC-MS/MS)代谢组学研究平台分析48例心绞痛患者、24例AMI好转者、24例AMI死亡者及48名体检健康者(正常对照组)代谢物数据,对代谢轮廓数据的变异性进行分析,构建疾病区分模型。采用受试者工作特征(ROC)曲线评估特征代谢物的临床诊断效能。结果成功构建了"正常对照组-心绞痛组-AMI好转组-AMI死亡组"的主成分分析(PCA)模型(R2X=40.2%,Q2=13.9%)及正交偏最小二乘判别分析(OPLS-DA)模型(R2X=79.0%,R2Y=83.2%,Q2=65.0%)。验证结果显示模型的预测准确度达100%。筛选并鉴定出10种可用于AMI预后判断的代谢物离子,其中4-羟基-6-二十二烷酮、N-乙酰-白三烯、溶血磷脂酰胆碱(LPC)[18:2(9Z,12Z)]、LPC(18:0)、LPC(P-16:0)、LPC[P-18:1(9Z)]、LPC[20:1(11Z)]、LPC[20:2(11Z,14Z)]在AMI死亡患者的血清中水平较低,L-苏氨酸、3-甲基-2-丁烯-1-硫醇水平较高,与AMI好转患者比较差异均有统计学意义(P0.05)。结论采用代谢组学分析方法找到的特征代谢物具有很好的预测AMI患者预后的能力,可作为潜在的疾病转归标志物进一步研究。     

磺基水杨酸-硫酸钠比浊法测定尿蛋白的应用

[目的]建立简便的双试剂磺基水杨酸-硫酸钠(SS-S)比浊法测定尿蛋白,并对该方法进行应用性评价.[方法]在TBA120FR全自动生化分析仪上,确立SS-S比浊法测定尿蛋白的参数,评价该法的重复性、线性范围及干扰能力,并与氯化苄甲乙氧铵法(BEC)进行比较.[结果]批内的变异系数(CV)为1.39%、1.81%、1.10%;批间的变异系数(CV)为1.61%、1.97%、0.99%.线性范围为0.04～2.99 g/L.与氯化苄甲乙氧氨法比较YBEC=1.0733XSS-S+0.042 9,相关系数r=0.993 7.[结论]SS-S法测定尿蛋白简便、试剂稳定,具有较高的准确性和精密度,且适合自动化分析.     

双纸片增效试验筛查金属β-内酰胺酶

目的：建立简便的双纸片增效试验,筛查产金属β-内酰胺酶的铜绿假单胞菌.方法：3组不同底物的双纸片增效试验检测金属β-内酰胺酶,比较其结果.结果：75株耐亚胺培南的铜绿假单胞菌分别应用亚胺培南、头孢他啶、氨曲南和其EDTA复合纸片检出金属β-内酰胺酶阳性株分别为13,11,10株,阳性率分别为17.3%,14.7%和13.3%;联合应用3组底物,检出阳性株18株,阳性率为24.0%.结论：双纸片增效试验可作为金属β-内酰胺酶的初筛试验.