CyPA对类风湿关节炎中性粒细胞的趋化和产生IL-8的作用及其意义

目的:观察细胞环亲素A(CyPA)对人中性粒细胞HL-60株和类风湿关节炎(RA)患者外周血中性粒细胞的趋化和产生IL-8的作用.方法:选择12例RA患者,分离外周血中性粒细胞,采用Boyden小室趋化实验比较CyPA和/或IL-8对HL-60和RA患者粒细胞的趋化作用,采用ELISA检测CyPA促进培养的粒细胞产生IL-8作用,并与健康人比较.结果:CyPA组、 IL-8组及CyPA+IL-8组较阴性对照组趋化性显著增强( P <0.05);与IL-8组相比,CyPA抗体+IL-8组趋化指数降低( P <0.05);与CyPA组或IL-8组相比,CyPA+IL-8组趋化指数有所增加.RA患者中性粒细胞培养上清中IL-8水平较健康人显著增加( P <0.05);经CyPA刺激后,RA患者中性粒细胞培养上清中IL-8水平较CyPA刺激前增加,差异有统计学意义( P <0.05);阻断CyPA后,RA患者中性粒细胞培养上清中IL-8水平较CyPA刺激前无明显差异.结论:CyPA影响IL-8对中性粒细胞的趋化作用并对其分泌有影响.     

细胞亲环素A对单核来源泡沫细胞功能的影响

目的:研究细胞亲环素A对单核来源泡沫细胞功能的影响,探讨细胞亲环素A(CypA)在动脉粥样硬化发病过程中的作用。方法:以氧化型低密度脂蛋白诱导,建立人单核细胞系(THP-1细胞)分化的泡沫细胞模型,采用油红O染色进行形态学鉴定。以不同浓度的重组人CyPA(50、100、200μg/L)刺激人单核来源的泡沫细胞,通过细胞黏附实验、基质侵袭实验和明胶酶谱实验检测在分化的过程中CypA作用前后,MMP的表达,细胞黏附和侵袭力的变化。进而用环孢素A(CsA)、HAb18 mAb、c7b8 f10以及HAb18 mAb联合c7b8 f10分别进行阻断实验,观察对泡沫细胞功能的抑制作用。结果:在单核向泡沫细胞分化的各阶段中,泡沫细胞MMP-2、9的表达,黏附基质和侵袭能力均较THP-1单核株和巨噬细胞显著增强(P<0.05);CyPA对泡沫细胞上述功能有促进作用,浓度100~200μg/L的作用效果最明显(P<0.05);以上拮抗剂均可不同程度阻断CypA作用于泡沫细胞前后的上调作用,其中以HAb18 mAb联合c7b8 f10的抑制作用最明显(P<0.05)。结论:CypA上调了动脉粥样硬化泡沫细胞MMP-2、9的表达及其活性,增强了泡沫细胞黏附、侵袭能力,其促进作用可被CypA和CD147的拮抗剂所抑制。这一作用机制可能与动脉粥样硬化斑块不稳定性的发病机制相关联,并为其治疗提供了新的理论基础。     

CD147分子通过VEGF促进类风湿关节炎滑膜组织中的血管新生

目的观察类风湿关节炎(RA)滑膜组织中CD147表达强度与血管内皮生长因子(VEGF)表达水平间的相关性,并探讨成纤维样滑膜细胞(FLS)表面CD147的水平变化对VEGF表达的影响。方法收集15例RA患者滑膜,以4例骨关节炎(OA)患者滑膜作对照,采用免疫组织化学SP染色方法检测滑膜组织中CD147和VEGF的表达;体外原代培养FLS细胞,分别加入CD147抗体,PI3K通路阻断剂,MAPK通路的ERK1/2、P38及JNK阻断剂等作用FLS细胞,ELISA检测细胞培养上清中VEGF的表达水平。结果与4例OA滑膜组织CD147和VEGF表达相比,15例RA滑膜组织中均有CD147、VEGF均高表达。其中,表达CD147的细胞主要为成纤维样滑膜细胞、单核-巨噬细胞和淋巴细胞;表达VEGF的细胞主要为成纤维样滑膜细胞、微血管周围成纤维样细胞及血管平滑肌细胞。滑膜组织中CD147和VEGF的表达强度间具有统计学意义。ELISA结果显示,在使用LY294002或抗HAb18GmAb阻断CD147表达后,VEGF的表达量显著下降(P<0.05);而MAPK阻断剂(PD98059、SP600125和SB203580)等对VEGF表达水平无统计学意义(P>0.05)。结论CD147经PI3K-Akt信号通路在RA滑膜组织中上调VEGF促进血管新生。提示CD147在RA血管新生和血管翳形成中有重要意义。     

SCID小鼠耳廓皮下滑膜移植模型的建立及其在英夫利昔疗效评估中的应用

目的:建立一种简便、可靠、易于给药及观察的小鼠荷人类风湿关节炎(BA)滑膜模型,为抗BA药物疗效及其机制的体内研究提供实验系统.方法:无菌获取4例RA患者膝关节滑膜组织,修剪成3mm2大小,移植入严重联合免疫缺陷小鼠(SCID)耳廓皮下,同时以2例OA滑膜作为对照.移植入4 wk后开始,给予TNF-αmAb体英夫利昔治疗4 wk,以无关抗人IsGl抗体作为对照.隔日观察,根据移植物红肿程度对炎症进行评分.移植入8 wk后,处死小鼠取出移植物,进行苏木素.伊红(HE)染色病理分析.结果:人滑膜在SCID小鼠体内存活至少8 Wk,移植后RA滑膜炎症大体评分高于OA滑膜组(P<0.05);移植前后RA滑膜病理特点无明显变化,经局部注射TNF-α抗体治疗后炎症评分降低(P<0.05),病理检测示滑膜增殖及淋巴细胞浸润评分降低(P<0.05).结论:SCID-HuRAg模型的病理特点与RA患者体内类似;经局部注射生物靶向药物英夫利昔后有相应改善,是对RA滑膜炎症机制进行体内研究的一种简便实用模型.     

肺心病对QT离散度的影响

为了探讨肺心病对QT离散度的影响,选择入院时同步■记12导联心电图100例肺心病。并以20例健康查体者为对照,测定Q—Td和J—Td。结果:(1)肺心病伴心肌缺血病人Q—Td和J—Td明显高于对照组,P<0.01。(2)肺心病死亡者Q—Td和J—Td较肺心病生存者明显为高,P<0.01。(3)单纯肺心病Q—Td和J—Td与对照组比较无差异,P>0.05。因此,肺心病伴心肌缺血及死亡病人,存在明显心肌复极异常。     

类风湿关节炎中性粒细胞中CD147分子的表达及意义

类风湿关节炎（rheumatoid arthritis,RA）是一种以滑膜增殖和骨质破坏为主要特征的慢性炎性疾病。在RA关节腔滑液中含量最丰富的细胞是中性粒细胞,它的代谢产物水平可以作为反映病情活动度的指标之一。而成纤维样滑膜细胞（fibroblast—like synovial cell,FLS）在空间占位的同时,也可以通过分泌大量的基质金属蛋白酶（matrix metalloproleinases,MMPs）达到破坏软骨的目的。     

两种类风湿关节炎滑膜侵蚀软骨联合免疫缺陷模型的建立及比较

目的 比较背部皮下与肾包囊内2种不同移植方式所建立的类风湿关节炎(RA)滑膜侵蚀软骨联合免疫缺陷(SCID)模型的病理学及血清学改变,为采用人滑膜和软骨进行RA炎症及软骨损伤机制和治疗的体内研究提供实验系统.方法 15只SCID小鼠随机分为皮下移植组、肾包囊移植组及空白对照组,无菌获取RA患者滑膜及人正常软骨,通过相应的移植方式共同植入各组SCID小鼠体内.分别于术后4、8周取移植组织,进行组织病理学分析;留取血清,用酶联免疫吸附试验(ELISA)检测人类风湿因子(RF)水平.结果 皮下移植组成活率及建模成功率较肾包囊组明显增高,两组滑膜中炎细胞浸润、滑膜增殖、软骨侵蚀评分及血清RF-IgM水平差异均无统计学意义(P>0.05).结论 与肾包囊移植相比,背部皮下移植建立的SCID-HuRAg在炎症及骨侵蚀及血清学改变上差异无统计学意义,且操作简便,成功率高,是进行人RA滑膜对软骨侵蚀机制和治疗体内研究的理想动物模型.     

CD4+CD25high调节性T细胞在类风湿性关节炎病程中的消长及其意义

目的研究类风湿性关节炎(RA)患者病情发展不同阶段外周血及滑液中CD4 CD25high调节性T细胞数量的差别,及其与类风湿性关节炎活动程度的相关性,探讨CD4 CD25highT细胞在RA发生发展中所发挥的免疫抑制和调节作用。方法分别选取未经过缓解病情抗风湿药(DMARDs)治疗的活动性RA患者11例,经DMARDs治疗病情缓解的RA患者12例,和DMARDs治疗后效果不佳的RA患者9例,以及正常对照8例,检测他们的外周血淋巴细胞,以流式细胞术检测CD4 CD25high调节性T细胞的百分率,并研究CD4 CD25highT细胞百分率与抗环瓜氨酸(CCP)抗体,C反应蛋白(CRP),血沉(ESR)及类风湿因子(RF)的相关性。对其中部分患者的血液和关节滑液同时进行分析。结果RA未经治疗组和治疗效果不佳组CD4 CD25highT细胞的百分率(分别是5.24%和6.43%)明显低于正常对照组和治疗后病情缓解组(分别是17.17%和11.79%,P<0.01)。RA患者CD4 CD25highT细胞的百分率与抗CCP抗体(58.0Ru/mL),ESR(38.8mm/h)及CRP(2.73μg/L)呈明显负相关(P<0.05),与类风湿因子(RF=14.4Iu/mL)无明显的相关性(P=0.054)。正常对照组的CD4 CD25highT细胞百分率与抗CCP抗体(均<5.0Ru/mL),ESR(4.67mm/h),CRP(0.15μg/L)及RF(1.37)无明显相关性(P>0.1)。RA患者关节滑液中CD4 CD25highT百分率明显低于强直性脊柱炎(ankilosing spondylitis,AS)关节积液患者(P<0.05)。结论试验结果表明未经缓解病情治疗和治疗后效果不佳者的外周血中,CD4 CD25high调节性T细胞相对减少,且与病情活动程度负相关,这可能是RA发生和发展的一个重要因素。     

免疫突触对类风湿关节炎巨噬细胞凋亡的影响及亲环素A在其中的作用

目的 探讨类风湿关节炎(RA)患者外周血诱导分化的巨噬细胞作为抗原递呈细胞参与免疫突触的形成后对其自身凋亡的影响,并进一步研究亲环素A在此过程中的作用.方法 将人单核细胞系(THP-1)诱导分化的巨噬细胞经葡萄球菌肠毒素(SEB)(100 ng/ml)包被后,与活化的Jurkat T细胞共培养,促免疫突触形成后置于无血清RPMI-1640培养液中诱导凋亡,16 h后以Annexin V-碘化丙啶染色,流式细胞术检测巨噬细胞的凋亡情况.以单独无血清RPMI-1640培养液培养的巨噬细胞作为对照.同时,观察加或不加亲环素A(200 ng/ml)对突触调控的巨噬细胞凋亡的影响.临床收集10名健康对照及10例确诊的活动期RA患者外周血,采用免疫磁珠法分离CD4+T细胞,将其与诱导分化的巨噬细胞进行共培养.数据采用两样本t检验进行分析.结果 在细胞株、健康者及RA患者外周血参与免疫突触形成的巨噬细胞凋亡率分别为(32.9±2.8)%、(24.7±1.6)%、(14.5±1.2)%,较单独RPMI-1640培养液培养的巨噬细胞凋亡率(61.4±2.4)%、(45.5±2.6)%、(22.9±1.5)%显著降低(P<0.05).经亲环素A作用后,上述来源巨噬细胞的凋亡率分别进一步降至(27.2±2.1)%、(20.1±1.1)%、(12.9±1.0)%,与相应参与免疫突触形成的巨噬细胞的凋亡率比较差异有统计学意义(P<0.05).结论 RA患者体内参与免疫突触形成的巨噬细胞的凋亡率较单独培养的巨噬细胞的凋亡率显著降低,亲环素A能进一步促进该效应,以上结论 为RA患者体内巨噬细胞的生存时间延长从而分泌大量的细胞因子并导致炎症加剧和骨破坏提供了新的理论依据.

Abstract：

Objective To determine whether macrophages can behave as antigen presenting cells participating the formation of immunological synapse in rheumatoid arthritis (RA) and whether this process can affect the apoptosis. Moreover, this study was aimed to observe the function of cyclophilin A (CypA) in immunological synapse formation and its role in regulating the apoptosis of macrophages. Methods human acute monocytic leukemia cell line (THP-1) induced macrophages were coated with staphylococcal enterotoxin B(SEB) (100 ng/ml) and co-cultured with activated Jurkat T cells (human acute T-cell leukemia cell line), then incubated in the RPMI-1640 for 16 hours to induce apoptosis. The apoptosis of the macrophages were analyzed by flow cytometry by Annexin V-PI staining. The macrophages cultured in the RPMI-1640 alone were used as control. Meanwhile, CypA (200 ng/ml) were added to or not added in order to observe the apoptosis of macrophages. The function of CypA and the apoptosis of macrophages isolated from RA peripheral blood were also investigated through co-culture with CD4+T cells isolated by immunomagnetic beads. Comparisons between groups were performed by two-sample t-tests. Results In the peripheral blood of healthy people and RA patients, the apoptosis of macrophages which participated immunological synapse was (32.9±2.8)%, (24.7±1.6)%, (14.5±1.2)% respectively, which was significantly lower than the apoptosis of macrophages cultured alone [ respectively for (61.4±2.4)%, (45.5±2.6)%, (22.9±1.5)%, (P<0.05) ]. After CypA was added, the apoptosis of macrophages in cell lines, healthy people and RA patients decreased to (27.2±2.1)%, (20.1±1.1)%, (12.9±1.0)%, lower than the apoptosis of macrophages which participated immunological synapse formation (P<0.05). Conclusion In RA, the macrophages participate in the formation of immunological synapse by interacting with CD4+ T cells. They can significantly reduce the apoptosis on themselves. CypA can enhance this effect. These results provide a new theoretical foundation for prolonged survival of macrophages in RA, which can secrete a variety of cytokines to enhance inflammation and joint destruction.