表达超抗原葡萄球菌肠毒素A的喉癌细胞的建立

目的:构建葡萄球菌肠毒素A(SEA)基因真核表达载体并建立其稳定表达的喉癌细胞系。方法:根据标准葡萄球菌菌株ATCC13565中SEA基因序列,人工合成其编码区序列,然后亚克隆至真核表达载体pIRES2-EGFP,构建pSEA-IRES-EGFP重组质粒,再将重组质粒转染至喉癌Hep-2细胞,G418筛选获得抗性单克隆,用RT-PCR和ELISA法鉴定SEA在喉癌细胞中的表达。结果:合成的SEA基因亚克隆至真核表达载体pires-EGFP后,测序证实克隆的SEA序列与GenBank中标准葡萄球菌菌株ATCC13565的编码区序列完全一致;重组质粒转染喉癌Hep-2细胞后,经筛选2周获得抗性单克隆,挑选单克隆,RT-PCR扩增获得特异的基因片段。经ELISA分析,发现细胞培养上清液中SEA蛋白的含量达pg级水平。结论:成功构建了超抗原SEA基因的重组真核表达载体,转染至喉癌Hep-2细胞后,SEA基因能够在细胞表达并持续分泌SEA蛋白。     

喉癌来源的MAGE-A3基因真核表达载体及其稳定表达模型的构建和鉴定

目的：克隆人黑色素瘤相关抗原MAGE—A3基因,构建真核表达载体,检测、鉴定其在细胞中的表达。方法：MAGE-A3基因进行PCR扩增,凝胶回收PCR产物片段并连接至pMDl8一T载体。测序后将MAGE—A3基因片段亚克隆至真核表达载体,构建成plRES2-EGFP／MAGE—A3重组质粒。经脂质体转染至293T细胞株后,荧光定量PCR、Western-blotting法鉴定MAGE—A3基因的表达。结果：MAGE-A3基因正确克隆在plRES2-EGFP／MAGE-A3,测序结果与GenBank公布的MAGE—A3序列一致。转染293T细胞后能检测到MAGE-A3基因和蛋白的表达。结论：成功构建plRES2-EGFP／MAGE—A3真核表达质粒,并能在293T细胞中有效表达MAGE—A3蛋白,奠定了其作为DNA疫苗应用的基础。     

喉淀粉样变性病11例诊治体会

目的进一步认识喉淀粉样变性病的发病机制、分类、临床表现、诊断及治疗。方法11例喉淀粉样变性患者，做间接喉镜下手术5例，支撑喉镜下手术1例，喉裂开术2例，垂直半喉切除声门重建术1例，未做手术2例。结果失访3例，术后复发2例，6例情况稳定。结论（1）Symmers分类方法具有临床价值。（2）诊断、鉴别诊断依据刚果红染色呈棕红色、偏光显微镜下呈双折光和绿荧光的特殊形态。（3）喉淀粉样变性确诊后，必须排除全身性、继发性淀粉样变性及多发性浆细胞瘤。（4）根据每个患者的严重程度，病情轻可以保守观察，病情重必须外科切除。（5）术后有复发可能，必须长期随访。     

喉淀粉样变性病的临床报告并文献复习

目的：进一步认识喉淀粉样变性病的发病机制、分类、临床表现、诊断及治疗。方法：11例喉淀粉样变性病患者，行间接喉镜下手术5例，支撑喉镜下手术1例，喉裂开术2例，垂直半喉切除声门重建术1例，未手术2例。结果：3例失访，2例复发，6例情况稳定。结论：①Symmers分类方法具有临床价值；②诊断、鉴别诊断依据刚果红染色呈棕红色，偏光显微镜下呈双折光和绿荧光的特殊形态；③喉淀粉样变性确诊后，必须排除全身性、继发性淀粉样变性及多发性浆细胞瘤；④治疗依赖患者的严重程度，轻者可以保守观察，重者必须外科切除；⑤可以复发，必须长期随访。     

慢性鼻窦炎对中耳听阈的影响

目的 探讨慢性鼻窦炎对中耳听阈的影响。方法 对53例慢性鼻窦炎病人、10例健康成人行纯音测听。采用多状态Logistic回归模型，对慢性鼻窦炎可能影响听阈的因素进行评价。结果 ①53例中，正常听阈35例（66．04％），轻度聋16例（30．19％），中度聋2例（3．77％）。②各频率鼻窦炎组与对照组、鼻窦炎各分型之间听阈比较，有统计学意义（P〈0．05）。③慢性鼻窦炎对中耳听阈的影响因素中，经过多状态Logistic回归模型的逐步筛选，显示2项因素可能影响听阈，即筛窦CT分型呈硬化型，鼻窦炎分型分期较重时。结论 ①慢性鼻窦炎可影响听阈，随慢性鼻窦炎分型分期加重，听力损伤加重。②筛窦呈硬化型、鼻窦炎分型分期重时，可能影响最大。     

鼻黏膜表面活性物质、板层体和相关蛋白

鼻内存在着表面活性物质，主要由磷脂构成，磷脂酰胆碱是其主要的组成和活性部分。细胞内磷脂堆积形成板层结构，现在定义为板层体，即是表面活性物质的前体，分布在人体许多器官。鼻通过自主神经失衡、自身免疫破坏、感染、分泌性IgA缺乏等机制引起表面活性物质减少，引起原发性萎缩性鼻炎的发病。     

突发性聋与血液循环障碍的关系

突发性聋（SuddenDeafness，简称SD）指突然发生原因不明的感音神经性聋。目前认为病毒感染、血液循环障碍及园窗膜破裂等为其病因。循环障碍病因理论首先由DeKleyn（194年）提出，此后Fowler观察到SD患者球结膜血管有Sludge现象（病理性血管内红细胞凝聚现象），推测内耳血管系统有类似病变。至1956年Hallberg在178例的SD研究中才肯定血液循环障碍为SD主要原因、作者就此专题回顾了文献，并作综述。一、突聋与血液循环系统疾病的关系1．血液、脉管疾病；已经肯定血液、脉管疾病可引起SD，如Buerger氏病、巨球蛋白m症、深状贫血、白…     

鼻咽癌扩散方式的CT评价

对1987年1月到1988年间就诊的262例鼻咽癌(NPC)患者进行了CT检查。扫描范围包括颅底、鼻咽、咽旁隙,以了解鼻咽邻近结构、区域,尤其是颅底受累或破坏情况,以及肿瘤直接扩散或经淋巴结转移侵犯颈部上段的情况。为了更好地区别肿瘤与正常组织、显示颈动静脉,采用了对比剂快速静脉注射方法。以三条线估价咽旁隙的受侵程度:第一线从翼突内板游离缘向后外到颈动脉外界;第二线从翼突内板根部舟状窝向后外到茎突;第三线从翼突外板游离缘向后外下颌骨升支后缘。第一线为鼻咽与外侧咽旁隙的交界线;第二线划分茎突前     

超抗原活化淋巴细胞对喉癌Hep-2细胞系的抑制作用

目的 观察超抗原活化淋巴细胞后对喉癌细胞的抑制作用.方法 金黄色葡萄球菌肠毒素A与人淋巴细胞混合培养24 h,激活淋巴细胞,再加入人喉鳞状细胞癌Hep-2细胞混合培养72 h,通过MTT法观察喉癌细胞的抑制情况.结果 ①实验组金黄色葡萄球菌肠毒素A激活淋巴细胞后对人喉鳞癌Hep-2细胞的生长有明显的抑制作用,抑制率是42.68%,高于对照组4.82%(P＜0.01).②抑制作用呈现时间的依赖性.③金黄色葡萄球菌肠毒素A在不同浓度时对喉癌细胞的生长均有抑制作用,特别在浓度是1 μg/ml、72 h培养时抑制率最高,达82.83%.结论 超抗原活化淋巴细胞后明显抑制喉癌细胞的生长.     

咽鼓管咽口黏膜上皮的超微结构

目的观察咽鼓管咽口黏膜上皮的超微结构。方法取4例健康人咽鼓管咽口的组织做透射电镜标本，观察黏膜上皮的超微结构。结果咽鼓管咽口黏膜上皮为假复层纤毛柱状上皮，由纤毛柱状细胞、无纤毛柱状细胞、分泌细胞、中间细胞和基底细胞等组成，这些细胞的基部均贴附在基底膜上。可见亮颗粒分泌细胞。各类细胞可见表面活性物质板层体。黏膜下见弹性纤维和胶原纤维构成弹性纤维带。结论咽鼓管咽口黏膜上皮为假复层纤毛柱状上皮，可见亮颗粒分泌细胞，各类细胞可见板层体存在，分泌表面活性物质，弹性纤维带维持和形成咽鼓管咽口。