转染bcl-2反义寡核苷酸诱导宫颈癌Hela细胞凋亡的体外实验研究

目的 :体外研究bcl- 2反义寡核苷酸对人宫颈癌Hela细胞凋亡的影响 ,旨在寻求提高肿瘤细胞放射敏感性的方法。方法 :(1)免疫组化、半定量RT -PCR法鉴定ASODN的有效性。 (2 )Giemsa染色、流式细胞术凋亡指数 (AI)、DNALadder检测细胞凋亡。结果 :(1)转染后 ,免疫组化结果示Bcl- 2蛋白表达降低 ;半定量RT -PCR结果显示bcl- 2mRNA表达较对照组明显减弱 (P <0 0 5 )。 (2 )转染后 ,Giemsa染色可见凋亡小体 ;流式细胞术结果显示转染后AI为 :6 6 0± 0 70 % ,明显高于对照组 1 79± 0 19% (P <0 0 5 ) ;DNALadder呈现具有凋亡特征的梯带。结论 :(1)本实验所设计的ASODN能有效地抑制bcl- 2基因的表达。 (2 )转染ASODN (bcl-2 )能够显著增加Hela细胞凋亡。进而有望通过转染ASODN提高肿瘤细胞的放射敏感性。     

重组人生长激素对烧伤患者供皮区愈合的临床评价

目的:探讨重组人生长激素(rhGH)对烧伤患者供皮区愈合的作用。方法:第1部分将28例大面积烧伤患者,随机分为rhGH治疗组和对照组。rhGH组于切削痂手术后(供皮区为头皮)1 d开始每天皮下注射rhGH 9μ,共7 d,对照组未用药。第2部分将35例烧伤患者,随机分为rhGH治疗组和对照组,rhGH组于切削痂手术后(供皮区为大腿)1 d开始每天皮下注射rhGH 9μ,共10～15 d,对照组未用药。观察供皮区愈合时间。结果:rhGH组供皮区愈合时间明显优于对照组(P<0．01)。结论:烧伤病人早期应用rhGH,能加快供皮区愈合,利于反复多次供皮。     

重组人生长激素对老化皮肤胶原蛋白代谢的作用

目的:探讨哺乳动物细胞源性生长激素抗皮肤老化的作用机制。方法:实验于2004-03/12在复旦大学附属金山医院动物实验室完成。选择18～20月龄健康SD大鼠90只,随机数字表法分为3组,重组人生长激素0.08U/kg组,重组人生长激素0.12U/kg组,生理盐水对照组,每组30只。每组又分为用药前及用药后4,6,8,10,12周6个时间点,每个时间点5只。重组人生长激素0.08,0.12U/kg组:0.02U/mL重组人生长激素悬液分别行皮下注射0.08,0.12U/kg,3次/周,共12周。生理盐水对照组:以生理盐水皮下注射。另选取10只2～3月龄正常SD大鼠为空白对照组。于各时间点切取大鼠背部标记区的皮肤组织,行Masson染色并测定皮肤胶原厚度,反转录-聚合酶链反应检测皮肤转化生长因子βⅠ型和Ⅱ型受体mRNA的表达。结果:纳入动物100只,均进入结果分析。①大鼠皮肤胶原厚度:重组人生长激素0.08U/kg组注射8周胶原开始增厚,重组人生长激素0.12U/kg组第6周胶原开始增厚,厚度明显大于生理盐水对照组犤分别为(787±18),(766±20),(649±50)μm,P<0.05犦,与空白对照组比较差异无显著性意义(P>0.05)。②重组人生长激素0.08,0.12U/kg组转化生长因子βⅠ型和Ⅱ型受体mRNA的表达高于生理盐水对照组(以注射4周为例,转化生长因子βⅠ型受体分别为0.321±0.011,0.534±0.013,0.000±0.000;转化生长因子βⅡ型受体分别为0.297±0.009,0.541±0.025,0.000±0.000,P<0.05)。结论:重组人生长激素可上调皮肤转化生长因子βⅠ型和Ⅱ型受体mRNA的表达,促进胶原增殖而发挥抗皮肤老化作用。     

基质衍生因子在大鼠腹主动脉移植术后介导的修复重构机制

目的 探讨基质衍生因子-1（SDF-1）在大鼠腹主动脉移植术后介导的修复重构机制。方法 雄性Wistar大鼠为供者，雄性SD大鼠为受者，建立腹主动脉原位移植模型。免疫组织化学技术检测受者移植动脉内皮细胞上SDF-1的表达以及血管内膜的厚度；逆转录-聚合酶链法（RT-PCR）检测移植动脉血管中SDF-1受体CXCR4的表达。结果 受者移植的腹主动脉内皮细胞上持续表达SDF-1，且其表达水平与术后血管内膜增生厚度密切相关。结论 SDF-1能动员干细胞至移植的腹主动脉，并分化成平滑肌样细胞。SDF-1可能成为预警血管硬化、慢性移植物功能丧失发生和发展的指标。     

脓毒症肺损伤小鼠血清内皮微颗粒的变化

目的 探讨脓毒症相关肺损伤小鼠血清中内皮微颗粒(endothelial-derived microparticles, EMPs)的变化及意义。方法 C57BL/6J 小鼠随机分成结扎盲肠头尾端穿孔术(cecal ligation puncture procedure, CLP)组和假手术(Sham)组。术后24h CLP组存活的小鼠和假手术组小鼠心尖取血,离心后测定血清IL-1β、IL-6、TNF浓度,流式细胞仪检测血清中CD144⁺EMPs浓度水平。取各组肺组织测定肺湿重/干重比值(W/D),光镜下观察肺组织学的改变,电子显微镜下观察肺组织超微结构改变。结果 CLP组小鼠血清中IL-1β、IL-6、TNF浓度均高于Sham组(P<0.01);CLP组小鼠肺组织W/D高于Sham组(P<0.01)。病理学检查显示CLP术后24h小鼠出现急性肺损伤,肺泡内皮细胞损伤明显。CLP组小鼠血清中CD144+EMPs浓度高于Sham组(P<0.01)。结论 CLP术后24h小鼠发生了急性肺损伤,是较好的肺损伤的模型。内皮微颗粒浓度的升高和脓毒症相关性肺损伤密切相关,内皮微颗粒可能参与了急性肺损伤的过程。     

p38信号通路在呼吸机相关性肺损伤中的作用

呼吸机相关性肺损伤（ventilator-induced lung injury,VILI）是由机械通气产生的严重并发症,VILI的类型主要包括：气压伤（baratrauma）、容积伤（volutrauma）、肺萎陷伤（atelectrauma）、生物伤（biotrauma）,目前临床上仍无有效的治疗策略。丝裂原活化蛋白激酶家族可以在一系列细胞外刺激下参与细胞应答,在哺乳动物中,已经发现了ERKs（extracellular signal-regulated kinase）、JNK/SAPK（c-jun N-terminal/stress-activated protein kinase）、ERK5/BMK1（ERK/big MAP kinase 1）以及p38四个亚家族。随着对VILI的不断深入研究,p38通路被认为参与了VILI的发生机制,深入研究p38信号通路在VILI中的作用,可为临床提供新的治疗靶点。     

川芎嗪对脓毒症急性肺损伤的保护作用

目的研究中药川芎嗪（Tetramethylpyrazine,TMP）对大鼠脓毒症相关急性肺损伤（acute lung injury,ALI）的保护作用。方法取健康雄性SD大鼠24只,随机分为空白组、LPS干预组（LPS组）、TM P治疗组（TM P组）,每组8只。LPS组和TMP组分别给予腹腔注射LPS 20 mg/kg,空白组腹腔注射等量生理盐水,TMP组大鼠注射LPS 30 min后立即予TMP 80 mg/kg腹腔注射。4 h后,3组大鼠均经颈内动脉取血,后脱颈处死留取肺组织标本。测定动脉血气及肺组织湿/干重比,H-E染色观察肺组织病理形态,流式细胞术检测血浆中CD31＋循环内皮微粒的表达水平,ELISA法检测血清中TNF-α水平,Western印迹法检测肺组织ROCKⅡ蛋白表达。结果 LPS组氧合指数均小于200,较空白组和TMP组均明显降低（P〈0.05）,TMP组较空白组减低（P〈0.05）。肺组织切片HE染色光镜下可见LPS组肺泡结构紊乱,并可见弥漫性肺泡间隔增厚,而TM P组上述病理表现较LPS组明显减轻。TM P组平均肺泡壁厚度、肺组织湿/干重比值、血浆中CD31＋内皮微粒表达量、血清中TNF-α水平及肺组织ROCKⅡ蛋白表达量均低于LPS组,差异有统计学意义（P〈0.05）;与空白组相比,差异无统计学意义（P〉0.05）,而LPS组上述指标均高于空白组,差异有统计学意义（P〈0.05）。结论川芎嗪减轻LPS所致急性肺损伤大鼠肺渗出性病变,减轻肺组织炎症因子释放,对肺损伤起到积极保护作用,其对减轻肺渗出的作用可能与下调ROCKⅡ基因表达有关。     

分化生长因子-8对大鼠移植腹主动脉肌纤维化的作用及其机制

目的探讨分化生长因子(GDF)-8对移植大鼠腹主动脉肌纤维化的抑制作用。方法建立雄性Wistar大鼠至雄性SD大鼠腹主动脉原位移植模型,实验动物随机分为两组:延长冷缺血组(PCI)和对照组,测定术后7、14、21、28 d血管内膜厚度,逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)检测移植血管GDF-8的表达,免疫组织化学(IHC)检测Smad4的表达。结果 PCI组内膜14 d开始增厚,28 d至(381．952±44．334)μm,对照组为(56．898±17．543)μm,差异有统计学意义(P<0．05), 术后PCI组GDF-8 mRNA为对照组的3．6％-33.8％,Smad4蛋白表达高于对照组。结论 GDF-8 在移植动脉肌纤维化过程中发挥重要作用,延长冷缺血时间可下调GDF-8的表达而加速肌纤维化进程。     

层流ICU病房对呼吸机相关性肺炎感染率的影响

目的观察层流ICU病房对呼吸机相关性肺炎（VAP）感染率的影响。方法选择ICU住院患者2142例,其中普通ICU为641例、层流ICU 1501例,分别观察两种ICU病房VAP的感染率及人工气道建立千导管日呼吸道感染率。结果普通ICU病房VAP感染225例,VAP感染率为10.50%,千导管日呼吸道感染率28.61‰;层流ICU病房VAP感染100例,VAP感染率为6.66%,千导管日呼吸道感染率19.44‰。层流ICU病房VAP感染率、千导管日VAP感染率明显低于普通ICU病房（χ2=662.19、7.88,P均〈0.05）。结论层流ICU病房可明显降低VAP的感染率。     

腹腔高压对急性肺损伤猪呼吸系统的影响

目的评价在急性肺损伤(acute lung injury,ALI)时腹腔高压(intraabdominal hypertension,IAH)对呼吸系统的影响。方法将6只家猪按实验过程中的不同状态分组,分为基础状态,ALI和ALI+IAH组,基础状态为ALI成模前状态,ALI是稀盐酸(pH<2.5)气管内灌注直至PaO2/FiO2≤150,IAH是通过气腹机注入氮气将腹内压提升至20 mmHg。观察以上三组维持机械通气1 h后的氧合指标和呼吸力学指标的变化。结果 (1)氧合:ALI+IAH组PaO2/FiO2为(84±10)mmHg明显低于基础状态(374±46)mmHg和ALI组(135±15)mmHg(P<0.05)。(2)呼吸力学:ALI+IAH组胸壁顺应性(Ccw)为(26.0±2.8)ml/cmH2O显著低于基础状态(117.1±6.4)ml/cmH2O和ALI组(86.7±5.6)ml/cmH2O,(P<0.05)。ALI和ALI+IAH的肺顺应性(Cl)分别为(15.1±1.1)ml/cmH2O及(13.0±0.9)ml/cmH2O,均明显低于基础状态(40.5±2.6)ml/cmH2O,(P<0.05)。ALI与ALI+IAH比较,差值无统计学意义(P>0.05)。ALI+IAH组呼气末跨肺压(Ptp)为(-3.5±0.8)cmH2O显著低于基础状态(-0.5±1.2)cmH2O和ALI组(-1.3±0.5)cmH2O,(P<0.05)。结论当ALI伴IAH时以胸壁顺应性显著下降为主,同时引起跨肺压进一步下降,在ALI伴IAH行机械通气时更应关注腹内压(IAP)对胸壁顺应性的影响及跨肺压的改变。