乙肝病毒外膜大蛋白检测在阿德福韦抗病毒治疗中的应用

目的 通过检测抗病毒治疗患者血清中乙肝病毒外膜大蛋白(HBV-LP)和病毒载量(HBV-DNA),探讨阿德福韦抗病毒治疗过程中HBV-LP与HBV-DNA的关系,观察HBV-LP用于评估抗病毒治疗效果的应用价值.方法 采用酶联免疫吸附试验(ELISA)方法对HBV-LP进行检测;采用荧光定量PCR方法对HBV-DNA进行检测.结果 抗病毒治疗有效组患者HBV-DNA和HBV-LP下降趋势一致;抗病毒治疗无效组患者HBV-DNA始终没有出现阴转,HBV-LP的含量维持在较高水平;抗病毒治疗效果反复组患者HBV-LP的含量维持较高水平或变化不明显,HBV-DNA则出现暂时阴转.结论 动态监测HBV-LP的含量可用于阿德福韦抗病毒治疗效果的评估.     

ELISA法检测SARS病毒特异性抗体

目的:研究SARS患者特异性抗体IgG、IgM动态变化规律,评价应用酶联免疫吸附试验(ELISA)在SARS诊断中的可靠性,为科学地防治SARS提供理论依据。方法:采用ELISA方法检测不同发病时间的临床确诊SARS病人234例420份血清,疑似病例127例和其他人群200例的血清SARS病毒抗体,并对45例SARS病人进行了长达1.5a的追踪。结果:在发病10d内抗体的阳性率较低,10d后阳性率较高;IgM的灵敏度是52.80%,特异性是99.40%,符合率78.82%。IgG的灵敏度是73.23%,特异性是98.10%,符合率87.15%。IFA法与ELISA法检测血清抗体的比较,IgM的符合率是68.60%,IgG的符合率是76.74%。对45例SARS患者追踪1.5a,SARS-IgG抗体的滴度仍维持较高的水平。结论:ELISA法适合于SARS发病10d后作为实验室辅助诊断方法。但对弱weak阳性的患者要注意追踪,排除假阳性。     

长期不进展人类免疫缺陷病毒-1感染者准种膜蛋白V3环氨基酸特点分析

目的 了解长期不进展HIV-1感染者HIV-1准种膜蛋白V3环氨基酸序列特征及变异特点.方法 应用终点有限稀释套式PCR方法,对5例长期不进展HIV-1感染者不同时间点单个HIV-1前病毒env基因c2-v3-c3区域进行扩增和序列测定,用序列确证分析技术分析env基因区V3环氨基酸序列特征.结果 5例患者不同随访时间点获得的准种序列中,V3环35个氨基酸中出现多样性的位点分别有1～10个不等,同一患者不同随访时间点准种优势株序列完全一致或仅有1～2个位点不同;4例患者V3环顶端四肽为GPGR,1例患者为GPGK,同一患者不同随访时间点V3环顶端四肽一致;根据V3环11和25位氨基酸及V3环的电荷推测HIV-1辅助受体均为趋化因子受体(CCR)5.结论 长期不进展HIV-1感染者V3环序列存在不同程度变异,顶端四肽稳定性高,感染的HIV-1毒株可能为非合胞体诱导型毒株.     

乙型肝炎病毒全基因组PCR扩增产物的直接测序

目的建立乙型肝炎病毒全基因组PCR扩增产物直接测序的方法并对序列进行分析。方法PCR法扩增乙型肝炎病毒全长基因,PCR扩增产物纯化后直接进行DNA序列测定;将已测定序列的PCR扩增产物用上述方法进行再测序以评价该方法的保真性;应用进化树分析及对齐比较等方法分析HBV基因型和YMDD变异情况。结果20例标本中有18例扩增阳性并得到全长基因组序列;保真性分析表明,本法引起的人为核苷酸突变率约为1‰;序列分析表明,18例标本中有10例为基因型B、8例为基因型C;2例出现耐拉米夫定的YMDD变异,均为基因型C。结论乙型肝炎病毒全基因组PCR扩增产物直接测序,方法简便,可满足临床和科研的需要。     

HIV感染者/AIDS患者与肿瘤病人T淋巴细胞亚群数量的比较

目的　探讨艾滋病病毒 (HIV)感染者和艾滋病 (AIDS)患者与肿瘤病人CD+4和CD+8T淋巴细胞 (TH 和TS 细胞 )数量的变化并进行比较。方法　用流式细胞仪检测 78例HIV感染者 /AIDS患者和 37例肿瘤病人外周血中TH 和TS 细胞的数量以及计算TH/TS 的比值 ,组间比较采用双侧t检验。结果　HIV感染者 /AIDS患者TH细胞显著减少 ,且下降的幅度大 ,TH<5 0 0 / μl的占 83 3% ,其中 <2 0 0 / μl的占 5 6 4 % ,TH/TS 平均为 0 2 9;肿瘤病人TH 细胞计数也明显降低 ,TH<5 0 0 / μl的占 70 3% ,其中 <2 0 0 / μl的占 18 9% ,TH/TS 平均为 1 2 6。同一水平CD+4T细胞计数所对应的CD+8T细胞数量 ,HIV感染者 /AIDS患者高于肿瘤病人 ;两组病人TS 数量都随TH 数量的升高而增加。HIV感染者 /AIDS患者TH 细胞计数 <肿瘤病人 ,TS 细胞计数 >肿瘤病人 ,HIV感染者 /AIDS患者TH/TS 比值倒置 ,而肿瘤病人TH/TS 比值 >1。结论　HIV感染者 /AIDS患者和肿瘤病人存在不同程度的细胞免疫功能损害 ,T淋巴细胞亚群的检测可作为两者免疫诊断和免疫功能监测的指标之一 ,对于病人的治疗和预后有一定的意义     

合并HIV/HBV感染的肝细胞癌患者临床特征

目的分析合并人类免疫缺陷病毒(HIV)和乙型肝炎病毒(HBV)感染的肝细胞癌患者(HIV/HBV-HCC)和非合并HIV感染的HBV相关肝细胞癌患者(HBV-HCC)临床资料,总结HIV/HBV-HCC患者临床特点,以提高对该病的认识。方法收集2012年6月—2020年10月在广州医科大学附属市八医院首次确诊的27例HIV/HBV-HCC患者和随机纳入51例HBV-HCC患者资料,使用SPSS13.0软件对两组患者的临床数据进行统计分析,总结其临床特征。结果HIV/HBV-HCC组27例患者年龄低于HBV-HCC组,差异有统计学意义(P<0.05)。在27例HIV/HBV-HCC患者中,12例(占44.4%)在诊断HCC前已接受抗病毒治疗,平均抗病毒治疗时间为4.5(0.6~7.0)年,其中9例患者在诊断HCC时HIV RNA低于检测下限,6例HBV DNA低于检测下限。HIV/HBV-HCC合并肝硬化患者的构成比显著低于HBV-HCC组(P<0.05),但其他临床指标在两组差异无统计学意义(P>0.05)。巴塞罗那肝癌分期提示两组患者诊断HCC时均以晚期为主,两组患者肝癌分期差异无统计学意义(P>0.05)。结论HIV/HBV-HCC患者发病年龄更低,HIV/HBV-HCC患者即使进行有效的抗病毒(HIV和HBV)治疗,仍有可能进展为HCC。因此,HIV/HBV合并感染的患者应定期进行肝脏相关检查,警惕HCC的发生。     

应用巢式RT-PCR扩增HA和NA基因片段并测序鉴定甲型H1N1流感病毒

目的 建立一种利用巢式RT-PCR特异扩增HA和NA基因片段并测序鉴定甲型H1N1流感病毒的技术.方法 设计两套共7条特异引物,通过巢式RT-PCR分别扩增甲型H1N1流感病毒HA和NA基因片段并测序,所得序列与人感染甲型流感病毒主要HA和NA亚型序列进行进化树分析以对结果作进一步鉴定,蛋白序列比对后分析其特征.结果 4例甲型H1N1流感患者流感病毒HA和NA基因RT-PCR扩增均分别得到442 bp和543 bp片段产物.核苷酸序列进化分析表明,该4例患者HA和NA序列分别与2009年爆发的甲型H1N1流感病毒HA及NA序列聚集在一起,与季节性H1、H2、H3、人禽流感H5亚型及季节性N1、N2、人禽流感N1亚型特异分开.蛋白序列分析表明,4例患者流感病毒HA蛋白裂解位点附近氨基酸序列均为PSIQSR↓GLF,不具有高致病性流感病毒的特性,NA蛋白第275位氨基酸为His,未出现H275Y的耐药变异.结论 本方法能特异扩增甲型H1N1流感病毒HA和NA基因片段,测序后可用于甲型H1N1流感病毒的进一步鉴定;同时,得到的序列也可用于流感病毒致病力及耐药性的分析.     

成人手足口病四例患者肠道病毒71型的检测及核苷酸序列分析

目的 了解成人手足口病的病原体,并分析肠道病毒71型(EV71)核苷酸序列特征.方法 RT-PCR技术对4例成人手足口病患者标本进行肠道病毒基因检测,并测定EV71核苷酸序列,所得序列通过BLAST程序作EV71序列的进一步确认,与基因库中不同基因型EV71核苷酸序列进行比对分析、同源性分析,并构建种系进化树.结果 4例患者肠道病毒通用引物和EV71特异性引物RT-PCR检测均阳性.经BLAST分析,测序所得4条核苷酸序列(分别命名为GZl9610、GZ99310、GZ99355和GZ46477)与EV71毒株序列同源.序列分析表明,4条核苷酸序列之间的同源性为96.O%～99.1%,与2008年初我国安徽省阜阳市暴发的手足口病疫情所分离的EV71毒株同源性最高.EV71序列遗传进化分析确定其均为EV71基因亚型C4,与阜阳、深圳、重庆、上海地区及2004年我国台湾地区流行毒株基因型一致,且距离最近.结论 成人也可感染EV71引起手足口病,与我国现在及既往流行病毒株相比,此次4例成人手足几病患者感染的EV71未发生大的变异;应加强对成人手足口病患者的隔离治疗,以免其传播病毒引起疾病更大的流行.     

检测HIV-1准种的终点有限稀释PCR技术的建立

R共获得65条c2-v3-c3准种序列、101条p17准种序列;HIV-1前病毒水平介于1.34～53.76拷贝/106个PBMC之间.c2-v3-c3及p17核苷酸序列系统进化树分析表明,不同患者的序列分开、同一患者的序列特异聚集在一起.氨基酸序列比对分析表明,HIV-1感染早期患者体内HIV-1准种序列比较单一,随着感染时间的增加,HIV-1准种趋于复杂化.结论 本研究建立的独特终点有限稀释PCR技术检测HIV-1准种灵敏度高、特异性好、高通量,可用于低水平病毒载量HIV-1感染者HIV-1准种研究.     

表面抗原和抗体双阳性乙型肝炎患者HBVS基因“a”决定簇序列分析

目的分析HBsAg和抗-HBs双阳性乙型肝炎患者HBVS基因“a”决定簇序列特征。方法巢式PCR法扩增4例HBsAg和抗-HBs双阳性乙型肝炎患者HBVS基因，PCR扩增产物直接进行测序和克隆后测序，对获得的“a”决定簇序列进行比对分析。结果PCR扩增产物直接测序表明，4例患者HBV“a”决定簇低保守区各有1个氯基酸位点显示多态性。PCR产物克降后测序表明，病例1S基因“a”决定簇126位点（s126）氨基酸可为苏氨酸（T）、异亮氨酸（I）和丝氨酸（S），s134氦基酸可为苯丙氨酸（F）和丝氨酸（S）；病例2s126氨基酸可为丙氨酸（A）和苏氨酸（T）；病例3s126氨基酸可为异亮氨酸（I）和天冬酰胺（N）；病例4术发现多态性位点。结论HBVS基因“a”决定簇序列的多态性可能是引起乙型肝炎患者HBsAg和抗-HBs双阳性的原因之一。