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目的建立一种基于规律成簇的间隔短回文重复序列及其相关蛋白(CRISPR/Cas13a)的乙型肝炎病毒(HBV)共价闭合环状DNA(HBV cccDNA)检测方法。方法提取2017年6月至2020年10月于首都医科大学附属北京佑安医院就诊的4例乙型肝炎患者肝脏总DNA后,使用HindⅢ内切酶和质粒安全性ATP依赖DNA酶(PSAD)分别进行酶切;根据松弛环状DNA(rcDNA)和cccDNA的结构差异,设计特异性扩增HBV cccDNA的引物,对酶切后的产物进行滚环扩增(RCA)和PCR扩增;并筛选crRNA,建立基于CRISPR/Cas13a技术的HBV cccDNA检测新方法。结果利用α-1-抗胰蛋白酶(A1AT)和HBV表面抗原(HBsAg)引物对双重酶切后的产物进行扩增,验证产物中HBV基因组的存在;利用HBV cccDNA和HBV rcDNA引物对PSDA酶切后的产物扩增,验证了产物中只存在HBV cccDNA;利用RCA后的阳性样本作为模板梯度稀释,然后进行PCR扩增转录后使用CRISPR/Cas13a检测,计算出检测下限为10拷贝/μl。结论本研究建立了RCA-PCR-CRISPR-Cas13a的新型检测方法,可对HBV cccDNA进行高灵敏度和高特异性检测,为乙型肝炎患者抗病毒治疗评估、治疗终点的确定以及调整治疗方案提供了有效的监测手段。 相似文献
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2007年7月28日,丞燕国际机构(上海)总公司沈阳分公司,在太原金港大酒店举办了一场主题为"健康‘丞’献美丽‘燕’随"的大型健康生活展。此次生活展接待来宾500余人次,其中既有丞燕的老顾客也有刚刚结识不久的新朋友,他们中有的人专程从其它城市赶来,目的是答谢丞燕给自己的生活带来的改变,还有一些人是怀着好奇的心,专门来了解丞燕到底有什么"魔力",让那么多接触过她的人赞不绝口。 相似文献
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2007年7月28日,丞燕国际机构(上海)总公司沈阳分公司,在太原金港大酒店举办了一场主题为"健康'丞'献美丽'燕'随"的大型健康生活展. 相似文献
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