人胚神经干细胞移植治疗实验性自身免疫性脑脊髓炎大鼠的实验研究

目的:研究侧脑室注射人胚神经干细胞(hNSCs)移植治疗实验性自身免疫性脑脊髓炎(EAE)大鼠的有效性及hNSCs在EAE大鼠脑内的状况。方法:从自然流产的孕9～15周的人胚脑组织中分离、培养神经干细胞。用豚鼠全脊髓匀浆免疫Wistar大鼠制备EAE大鼠模型,分别在免疫后10、15、21天经侧脑室注射移植未分化的hNSCs入大鼠体内,观察hNSCs对EAE动物模型神经功能评分、脑内脱髓鞘病灶数目的影响,免疫组化方法观察移植后的hNSCs在EAE大鼠脑内存活、迁徙、分化的状况。结果:从人胎脑中成功培养出hNSCs,培养条件下呈悬浮状态生长,形成神经球。绝大多数细胞表达神经干细胞的标记物神经巢蛋白(nestin)。hNSCs移植组各时间点大鼠脑组织切片中均可见Brdu、nestin、NSE、GFAP、CNPase染色阳性细胞,CNPase阳性的少突胶质细胞比例随时间的延长而逐渐增多;hNSCs移植组大鼠自免疫后30天起其神经功能评分显著低于对照组(P<0.05);移植后20、30天脑内脱髓鞘病灶数目明显少于对照组(P<0.05)。结论:hNSCs体内体外均具有多向分化潜能,受炎症部位微环境信号的影响分化成神经元、星型胶质细胞、少突胶质细胞。hNSCs移植能有效改善EAE动物的神经功能评分,减少病灶数目。     

以冻结步态为首发症状的运动障碍性疾病临床分析和文献复习

目的：探讨以冻结步态为首发症状的一组运动障碍性疾病的临床特点。方法：对8例早期出现冻结步态的患者进行前瞻性研究。结果：8例患者经过1～3年的临床随访，2例临床诊断为进行性核上性眼肌麻痹（PSP），1例为路易体痴呆（DLB），1例为帕金森综合征（PS），1例为正常压力脑积水（NPH），3例为原发性进行性冻结步态（PPFG）。结论：冻结步态可以是多种运动障碍疾病的早期突出表现。     

可乐定生长激素刺激试验在鉴别多系统萎缩和原发性帕金森病的临床应用研究

目的:探讨可乐定生长激素刺激试(CGHST)在鉴别多系统萎缩(MSA)和原发性帕金森病(IPD)的应用价值.方法:对11例MSA-P和14例IPD患者清晨空腹仰卧安静状态下静脉采血,测定患者基础生长激素(GH)浓度,15 min以后口服盐酸可乐定300 ug,以后每隔30 min连续采血4次测定血清GH浓度.根据ROC曲线确立最佳的截断值,计算其敏感度和特异度.结果:IPD患者口服可乐定后血清GH浓度显著增加,60 min时最为明显,平均值达(5.4±0.9)ng.μL-1(P<0.001);而MSA-P患者服用可乐定以后血清GH基本保持稳定,最大增加值仅为(2.1±0.5)ng·μL-1(>0.05);比较两组间服用可乐定后30、60、90 min血清GH水平,MSA-p患者血清GH增加值均显著低于IPD组(P<0.05);CGHST 对MSA-P的敏感度和特异度分别是81.8%和85.7%.结论:CGHST可以作为MSA-p和IPD鉴别诊断的一种有效手段.     

东菱克栓酶对急性脑梗死患者血液流变学的影响

东菱克栓酶是由生物合成的一种高纯度类凝血酶样物质,能通过降解血中纤维蛋白原,增强纤溶系统活性,抑制血栓形成。我院于2006年9月至2008年1月应用东菱克栓酶治疗急性脑梗死并进行疗效观察,结果报道如下：     

银杏叶提取物对脑干听觉诱发电位的影响

目的：从电生理学角度探讨银杏叶提取物（ＧＢＥ）对缺血性神经细胞的保护作用。方法：采用脑干听觉诱导电位（ＢＡＥＰ）检测６０名椎基底动脉供血不足（ＶＢＩ）患者口服ＧＢＥ前后各波潜伏期、峰间潜伏期及双耳差值的变化。结果：服药后患者ＢＡＥＰ各波潜伏期、峰间潜伏期均逐渐恢复至基本正常水平。双耳差值亦同时逐渐减少，接近正常范围。结论：（１）ＢＡＥＰ是ＶＢＩ的辅助诊断、动脉观察和判断预后的可靠指标；（２）双耳差     

实验性自身免疫性脑脊髓炎小鼠模型的基因芯片研究

目的 用4096点基因芯片筛选实验性自身免疫性脑脊髓炎小鼠模型有表达差异的基因。方法 将4096条基因cDNA产物按微矩阵排列点样在玻片上。以髓鞘蛋白脂质蛋白多肽139-151及福氏佐剂为抗原免疫SJL小鼠，取免疫后3-4周急性发病的小鼠及同代正常小鼠各6只，每一只急性发病的小鼠及其对照为一组，分别取全脑组织，于-80℃冰箱保存。提取小鼠全脑组织总RNA，RT-PCR逆转录成cDNA。标记cDNA探针，分别用cy3-dUTP、cy5一dUTP标记正常小鼠和实验性自身免疫性脑脊髓炎小鼠的cDNA。将基因芯片和杂交探针变性后杂交，洗干。用Scan Array 4000扫描芯片，GenePix Pro3．0软件分析cy3、cy5两种荧光信号的强度和比值。结果1-6组中筛选出差异表达的数据分别为43、30、176、76、294和129项。这些基因在与两种探针杂交时表现出一定的差异。6个组中一致发现表达异常的基因涉及了免疫相关基因、细胞骨架蛋白基因、细胞周期相关基因、能量代谢相关基因、蛋白质合成相关基因、信号转导及离子通道相关基因等广泛的基因变化。结论 除免疫相关基因外，细胞骨架蛋白相关基因、能量代谢相关基因、蛋白质合成相关基因、细胞周期相关基因、离子通道相关基因等可能参与了自身免疫性脑脊髓膜炎的发病。     

不同剂量巴曲酶对脑缺血沙土鼠的脑保护作用

目的　探讨巴曲酶对脑缺血沙土鼠脑保护作用的最佳剂量。方法　80只沙土鼠随机分为假手术组、对照组、巴曲酶治疗组(又分为1BU/kg、2BU/kg、4BU/kg、8BU/kg、16BU/kg、32BU/kg组),每组10只。制作完全性前脑缺血再灌注沙土鼠模型,制作模型前3h给予对照组沙土鼠腹腔注射生理盐水;巴曲酶组腹腔注射相应剂量的巴曲酶。用原位末端标记(TUNEL)法染色检测沙土鼠海马CA1 区凋亡细胞,光镜下计算海马CA1 区的神经元凋亡率。结果　巴曲酶8BU/kg、16BU/kg、32BU/kg组海马CA1 区细胞凋亡率明显减少,与对照组及巴曲酶1BU/kg、2BU/kg、4BU/kg组比较差异有显著性(均P<0. 01), 8BU/kg、16BU/kg、32BU/kg组之间差异无显著性(均P>0 .05)。结论　巴曲酶具有抗脑缺血后的细胞凋亡作用;巴曲酶8BU/kg为对脑缺血沙土鼠脑保护作用的最佳剂量。     

一氧化氮在大鼠脑缺血及再灌注损伤中的作用

目的：研究一氧化氮（NO）在大鼠脑缺血及再灌注损伤中的作用和梗死侧大脑半球内一氧化氮合酶（NOS）活性的变化。方法：运用线栓法建立大鼠脑缺血及再灌注模型,采用液体闪烁法检测NOS活性和计算机图像分析技术测量海马CAI区梗死灶体积,并运用t检验对数据结果进行分析。结果：脑缺血2h后,NOS活性较正常大鼠明显增高（P＜0．01）,腹腔注射L－硝酸精氨酸（L－NA,60mg/kg）后,NOS活性显著降低,海马CA1区梗死灶体积缩小（P＜0．01）。缺血再灌注2h后,NOS活性和缺血2h时相比再次增高（P＜0．01）,注射L－NA后,NOS活性明显受到抑制,海马CA1区梗死灶体积扩大（P＜0．01）。结论：NO可能具有双重作用,既可以加重缺血性脑损伤,又对缺血后的脑损伤具有保护作用。     

两种髓鞘蛋白脂质蛋白肽段诱导自身反应性脑脊髓炎实验动物模型的比较

背景：实验性自身免疫性脑脊髓炎小鼠模型是多发性硬化症的经典动物模型。目前国内的模型多呈现单向病程。应用髓鞘蛋白脂质蛋白139～151和髓鞘蛋白脂质蛋白178-19l诱导具有免疫易感性的SJL／J小鼠，有可能建立与多发性硬化不仅临床表现及病理反应接近，而且病程相似的复发缓解型自身免疫性脑脊髓炎的动物实验模型。目的：建立与多发性硬化不仅临床表现、病理接近，而且病程相似的较为理想的复发缓解型实验性自身免疫性脑脊髓炎模型。设计：完全随机设计的对照实验。单位：解放军总医院神经信息中心和神经病学研究所。材料：实验于2004-02／06于解放军总医院神经病理研究室进行。选用8～12周龄雌性SJL／J小鼠60只，随机分为髓鞘蛋白脂质蛋白139～151和髓鞘蛋白脂质蛋白178～191组各30只。千预：应用髓鞘蛋白脂质蛋白139～151和髓鞘蛋白脂质蛋白178～19l免疫雌性SJL／J小鼠，制作复发缓解型实验性自身免疫性脑脊髓炎模型，观察其体质量及神经功能评分的变化，应用苏木精一伊红，Luxol固蓝髓鞘染色等方法观察模型的组织形态学改变。主要观察指标：①两种髓鞘蛋白脂质蛋白肽段免疫的小鼠出现缓解-复发的特点以及明显的神经系统体征。②病理学及体质量和神经功能变化评分。结果：全部60只小鼠均纳入分析。①两种髓鞘蛋白脂质蛋白肽段免疫的小鼠发病均具有缓解-复发的特点，出现明显的神经系统体征；小鼠发病时脑和脊髓组织显示明显的血管鞘形成、卫星现象和炎性细胞浸润，以及脱髓鞘改变。②体质量变化：免疫前两组小鼠体质量为(17．84&;#177;2．59)，(17．88&;#177;0．52)g。髓鞘蛋白脂质蛋白178～191组发病早，恢复快，免疫后小鼠体质量增加减缓，60d内体质量增长到(23．52&;#177;2．37)g。髓鞘蛋白脂质蛋白139～151组发病晚，恢复相对较慢，免疫后小鼠体质量较免疫前略有下降，60d时体质量为(16．70&;#177;0．46)g。③神经功能评分：两组最高神经功能评分比较无差异(3．86&;#177;1．10，3．71&;#177;1．05，t=0．49，P=0．628)。结论：①髓鞘蛋白脂质蛋白的两种不同抗原肽段，均可以引起中枢神经系统的自身免疫反应。②两种模型虽然同样具有缓解一复发的特点，发作严重程度也无明显差别，但也有其不同点：髓鞘蛋白脂质蛋白178～19l组发病早，恢复快，而且体质量变化明显，而髓鞘蛋白脂质蛋白139～15l组发病晚，恢复相对较慢，发病期及恢复期体质量变化幅度较小，提示这可能与两种多肽的结构不同有关。     

小鼠实验性自身免疫性脑脊髓炎性别差异研究

目的探讨小鼠实验性自身免疫性脑脊髓炎(EAE)性别差异的原因。方法应用髓鞘脂质蛋白139 151 (PLP139 151)免疫诱导建立EAE模型,观察雌雄小鼠病情的差异,采用MTT、ELISA法,检测外周淋巴细胞对自身抗原反应的性别差异。结果雌性小鼠的平均发病时间(15±2.1)d,早于雄性的(22±4.3)d,病程有复发-缓解的特点,而雄性则多呈一过性发病;EAE雌雄小鼠的特异性淋巴细胞增殖反应和γ-干扰素分泌无显著性差异( P >0.05),雄性小鼠白细胞介素4(IL- 4)分泌明显高于雌性小鼠( P <0.01)。结论PLP139 151诱发小鼠EAE性别差异可能与雄性小鼠外周淋巴细胞分泌IL- 4水平较高,具有保护作用有关。