血管内皮生长因子受体启动子驱动双自杀基因联合survivin反义寡核苷酸对结直肠癌细胞及血管内皮细胞的特异性杀伤作用

目的探讨腺病毒介导血管内皮生长因子受体（KDR）启动子驱动的CDglyTK融合基因（AdKDR-CDsbrTK）体系联合survivin反义寡核苷酸（ASODN）对结直肠癌细胞（sw620）及血管内皮细胞（ECV304）的特异性杀伤作用。方法将质粒pAdEasy—KDR-CDglyTK在293细胞内包装、扩增产生重组腺病毒。体外感染表达KDR的SW620、ECV304细胞株，同时用survivin ASODN转染同一细胞株，观察腺病毒的感染效率和ASODN的转染情况。应用RT．PCR和Western印迹检测CDglyTK和survivin基因的表达．MTT法测定两者联合应用对细胞株的杀伤效应和旁观者效应。结果survivin ASODN可转染重组腺病毒感染的细胞，并且两者的转染及感染效率无明显变化。CDglyTK可在SW620、ECV304细胞株高效表达。survivin ASODN可明显降低survivin蛋白表达。各基因治疗组细胞存活率明显低于阴性对照组（P〈0．001）。survivinASODN与AdKDR—CDglyTK基因联用后。随着前药浓度的增加，细胞存活率迅速下降，两者联合作用与单一基因作用相比，差异具有统计学意义（P〈0．05）。但在GCV100μg／ml、5-FC 2000μg／ml时，联合基因治疗组细胞存活率略低于单用AdKDR-CDglyTK，两者间差异无统计学意义（P〉0．05）。Survivin ASODN和AdKDR—CDglyTK联合作用，在前药浓度较低时表现为协同效应，并具有更明显的旁观者效应。结论KDR启动子调控的AdKDR-cDglyTK体系和survivin ASODN基因联合，较单一基因具有更强的特异性杀伤结直肠癌细胞及血管内皮细胞的作用。     

创伤性休克大鼠血浆AM与血管阻力变化的关系研究

目的 :观察创伤性休克大鼠血浆肾上腺髓质素 (AM)与血管阻力的变化 ,探讨 AM在创伤性休克病理生理过程中的作用。方法 :应用放射免疫法检测创伤性休克大鼠血浆 AM浓度 ,采用生物电阻抗方法测定平均动脉压 (MAP)、总外周血管阻力 (TPVR)和心脏指数 (CI)。结果 :休克复苏与未复苏组血浆 AM浓度分别为(1 4 6 .2 7± 9.83) ng/ L和 (6 8.34± 3.71 ) ng/ L ,均明显高于对照组 (32 .6 2± 7.5 5 ) ng/ L (P<0 .0 1和 P<0 .0 5 )。休克复苏组 TPVR为 (1 0 .5 7± 0 .35 ) k Pa· s· L- 1 ,明显低于休克未复苏组 (1 6 .75± 0 .2 3) k Pa· s· L- 1 (P<0 .0 1 ) ;CI明显高于休克未复苏组〔(2 1 5 .5 9± 1 .2 9) ml· min- 1· kg- 1比 (1 4 3.1 1± 0 .86 ) ml· m in- 1· kg- 1 ,P<0 .0 1〕。结论 :AM与血管阻力变化密切相关 ,并参与了创伤性休克的病理生理过程     

KDR启动子驱动的双自杀基因对人结肠癌细胞的特异性杀伤作用

目的探讨腺病毒介导的KDR启动子驱动的双自杀基因系统CDglyTK对人结肠癌细胞SW480的特异性杀伤作用。方法用腺病毒AdKDR-CDglyTK感染表达KDR的SW480细胞和不表达KDR的LS174T细胞,观察其感染效率并以RT-PCR方法检测重组腺病毒及转基因细胞CDglyTK的表达,然后给予不同浓度的前药5-FC及GCV处理,MTT法检测该系统对不同细胞株的杀伤效应和旁观者效应;用流式细胞术观察细胞内DNA含量和细胞周期的变化。结果携带双自杀基因和报告基因(GFP)的重组腺病毒载体,感染复数为100时,95%以上的受感染SW480和LS174T细胞中有GFP表达。RT-PCR检测发现SW480细胞有目的基因的表达,而LS174T细胞无表达。在前药应用下,已转染腺病毒的SW480和LS174T细胞表现出对前药不同的敏感性:表达KDR的SW480细胞对前药具有较高的敏感性,而不表达KDR的LS174T细胞对前药不敏感(P<0.01)。将感染腺病毒的细胞与未感染细胞以不同比例混合培养,观察到该系统有明显的旁观者效应。用流式细胞仪测定给药组出现典型的凋亡峰,细胞周期显示治疗组细胞G0-G1期比率增多,S期细胞...     

ERCP、EST联合LC治疗肝外胆管结石

目的：探讨内窥镜逆行胆胰管造影术（ERCP）、内窥镜下括约肌切开术（EST）、联合腹腔镜胆囊切除术（LC）治疗胆石症的疗效。方法：回顾性分析2006-03～2008-03开展的ERCP＋EST＋LC治疗胆囊结石合并胆总管结石136例。其中LC术前发现的胆总管结石134例,LC术后确诊的胆总管残留结石2例。ERCP术后约7 d行LC。结果：LC术前取石成功128例,其中107例采用取石网篮/气囊取出,21例采用碎石器/碎石网篮先碎石后取出。LC术前EST取石失败6例,行LC＋术中胆道镜取石成功1例,5例行开腹手术。LC术后发现胆总管残留结石2例,经EST切开取石成功。LC术全部成功,无手术并发症。全部病例术后行B超或MRCP检查,显示胆道内无残留结石。结论：按不同的病情合理选择、分次施行ERCP加EST加LC,使治疗所致的创伤最小,是目前治疗肝外胆管结石较为理想的选择。     

Survivin siRNA对肝癌细胞BEL-7402的增殖与对Survivin基因及蛋白表达的作用

目的:探讨小干扰RNA(siRNA)对BEL-7402细胞的生长抑制与生存素(Survivin)基因及蛋白表达的影响。方法:合成Survivin siRNA,以不同浓度转染BEL-7402细胞,MTT法测定细胞生长抑制率,RT-PCR、Western-Blot检测BEL-7402细胞Survivin mRNA及蛋白的表达差异。结果:BEL-7402细胞转染FAM荧光标记的siRNA后,细胞内有绿色荧光表达。分别以10、30、50nmol/LSurvivin siRNA转染细胞后,MTT测得的细胞生长抑制率分别为(38.80±1.71)%,(54.50±1.16)%,(66.79±1.10)%,RT-PCR测得的Survivin mRNA表达分别为0.42±0.02,0.28±0.01,0.12±0.01,Western-Blot测得Survivin蛋白表达分别为0.55±0.04,0.32±0.02,0.21±0.02,三项指标与空白对照组、阴性对照组、脂质体对照组比较有极显著性差异(P<0.01)。随着Survivin siRNA浓度的增加,细胞抑制率呈上升趋势,Survivin mRNA及Survivin蛋白的表达逐渐降低,呈浓度-效应关系。结论:Survivin siRNA能抑制BEL-7402细胞的增殖与Survivin基因和蛋白表达。