miR-129-5p调控MC3T3-E1细胞成骨分化的体外研究

背景 微小RNA(microRNA,miR)是一种非编码的小分子化合物,在成骨分化等生命过程中发挥重要调控作用.目的 探讨miR-129-5p对小鼠成骨前体细胞(preosteoblast cell line,MC3T3-E1)成骨分化功能的影响及相关作用机制.方法 体外培养MC3T3-E1细胞后,分别转染慢病毒载体(miR-control、miR-129-5p mimic和miR-129-5p inhibitor),以过表达或敲低细胞miR-129-5p水平.成骨诱导分化培养细胞后,使用碱性磷酸酶(alkaline phosphatase,ALP)染色试剂盒检测碱性磷酸酶的活性,茜素红(alizarin red staining,ARS)染色观察钙结节形成情况,以检测细胞成骨分化水平.实时荧光定量PCR(qRT-PCR)法和Western blot法检测成骨分化基因Runx2和OCN的mRNA及蛋白表达水平.生物信息学方法预测miR-129-5p靶基因,并用双荧光素酶基因报告实验验证.结果 转染慢病毒载体的MC3T3-E1细胞进行成骨诱导分化后,与miR-control组相比,转染miR-129-5p mimic的MC3T3-E1细胞7 d后碱性磷酸酶染色增强,成骨早期标志物Runx2表达增加,14 d后成骨晚期标志物OCN表达升高,21 d后茜素红染色显示钙化结节较大且量多(P<0.05).而转染miR-129-5p inhibitor慢病毒的MC3T3-E1细胞与miR-control组相比,碱性磷酸酶活性低,钙结节较小且少,成骨标志物Runx2和OCN表达下降(P<0.05).通过Targetscan网站(生物信息分析)预测miR-129-5p的靶基因为BMP通路负向调控蛋白Smad6;双荧光素酶报告实验验证Smad6为靶基因,过表达miR-129-5p后Smad6蛋白表达水平下调.结论 miR-129-5p通过靶向抑制Smad6的表达对MC3T3-E1细胞成骨分化产生促进作用.     

交感神经系统-肾上腺素能受体对骨改建的调节作用

骨组织终生处于改建中,交感神经系统(SNS)对骨组织和骨细胞的神经支配是其调控骨代谢的组织学基础。肾上腺素能受体与其对应的配体结合后,激活多条信号转导通路,完成其对成骨细胞和破骨细胞的调控,调节骨代谢。对于成骨细胞,SNS既可以通过激活α1受体促进骨形成,也可以通过激活β2受体抑制骨形成;对于破骨细胞,SNS既可直接作用于破骨前体细胞,促进其分化成熟,还可以通过调节成骨细胞分泌促破骨因子核因子-κB受体活化因子配体,间接促进破骨细胞活性。在骨生理病理改建方面,SNS通过调控破骨活动参与牙槽骨在力学刺激下的骨改建。SNS与骨质疏松症的发生发展密切相关,阻断SNS信号对预防骨质疏松等以病理性骨量丢失为特征的疾病具有重要的临床意义。     

骨改建中miR-134-5p通过靶向Itgb1抑制小鼠破骨细胞形成的研究

背景 微RNA(microRNA)是一种内源性非编码RNA,在生命活动的各个方面都拥有不可忽视的地位,尤其在骨改建中发挥着重要作用.其中,miR-134-5p及其靶基因整合素β1(integrinβ1,Itgb1)在破骨细胞中发挥的相互作用尚未见报道.目的 研究miR-134-5p靶向Itgb1对小鼠破骨细胞形成的影响...