真核表达载体pIRES2-EGFP-hBMP2的构建和鉴定

目的:构建并鉴定人hBMP2基因的真核表达载体pIRES2-EGFP-hBMP2。方法:采用RT-PCR方法从人成骨肉瘤细胞中克隆hBMP2基因,连接T载体并测序正确后与真核表达载体pIRES2-EGFP连接,并进行酶切鉴定,最后将pIRES2-EGFP-hBMP2转染入HEK293细胞中,利用荧光显微镜和Western blot进行表达鉴定。结果:成功克隆了人BMP2基因,酶切鉴定和测序均正确,构建的真核表达载体pIRES2-EGFP-hBMP2能够正确表达hBMP2蛋白。结论:构建了hBMP2基因的真核表达载体pIRES2-EGFP-hBMP2,为研究该基因的功能奠定了基础。     

复合重组人骨形态发生蛋白-2缓释微球的引导组织再生膜的制备

目的设计制备包含活性生长因子的引导组织再生生物膜(以下称功能性复合膜)。方法利用天然材料右旋糖酐(dextran,dex)合成甲基丙烯酸缩水甘油酯右旋糖酐(dextran-glycidylmethacrylate,dex-GMA)作为重组人骨形态发生蛋白-2(recombinedhumanbonemorphogeneticprotein-2,rhBMP2)新型缓释载体,采用乳化交联技术制备dex-GMA凝胶微球,考察其形态、溶胀系数、载药、释药及降解性能;以壳聚糖为材料,复合载rhBMP2的dex-GMA凝胶微球制备生物膜并对其进行生物学评价。结果dex-GMA在一定条件下可以成球;该凝胶微球溶胀、载药和降解性能良好,体外释药可达20d以上,利用简单的工艺就可以制备复合rhBMP2缓释载体的功能性复合膜,其理化性能与没有复合该缓释载体的生物膜没有变化。结论利用生长因子缓释载体可以制备功能性复合膜,其生物学性能有待进一步研究。     

人牙周膜细胞中内源性骨形成蛋白的流式细胞仪分析

目的：定量检测和分析人牙周膜细胞（ＰＤＬＣ）表达内源性骨形成蛋白（ＢＭＰ）的情况。方法：应用ＢＭＰ单克隆抗体，通过流式细胞仪和免疫组化ＡＢＣ的方法双重判定。结果：在离体培养的人ＰＤＬＣ中有一半左右的细胞能表达ＢＭＰ。结论：牙周膜细胞具有一定的合成和分泌ＢＭＰ的能力；可以进一步认为人的牙周膜细胞是具有成骨潜能的，在牙周组织再生中有积极作用。     

牙周引导性组织再生材料的结构及其对牙周膜细胞生长…

目的：观察引导材料结构特点和牙周膜细胞（ＰＤＬＣ）附着生长情况并分析初步效果。方法：本实验运用了细胞培养，扫描电镜和动物实验组织学观察等技术，结果：国产的膨体聚四氟乙烯（ｅ－ＰＴＦＥ）膜对ＰＤＬＣ无明显毒性或抑制作用，有较好的生物相容性，基本符合牙周引导性组织再生（ＧＴＲ）引导膜的要求，对牙周骨缺损的愈合有保护和促进作用，尤其在早期对结合上皮的根向迁移有明显的抑制作用。结论：该材料有利于新生牙槽骨     

载rhBMP2凝胶微球控释系统的设计与合成实验

目的:设计与合成rhBMP2新型控释载体,初步探讨其载药及降解性能。方法:用右旋糖酐 (dextran,dex)与甲基丙烯酸缩水甘油酯(glycidylmethacrylate,GMA)合成甲基丙烯酸缩水甘油酯右旋糖酐 (dex GMA),测定该凝胶微球溶胀系数Q,并对其载药、降解性能进行初步研究。结果:dex GMA在一定条件下可以成球,粒径与制备工艺密切相关;该凝胶微球溶胀参数 10. 9±5. 3;载药性能良好,在葡聚糖酶的作用下 20~40d内可以完全降解。结论:右旋糖酐基凝胶微球具有良好的溶胀性能,可生物降解,其粒径可控,作为生长因子载体,有望达到控释给药的目的,其制备工艺及理化性能有待进一步研究。     

胶原膜治疗Ⅱ～Ⅲ度根分叉区病变的临床观察

目的:对引导组织再生术(GTR)治疗Ⅱ～Ⅲ度根分叉区病变的短期临床疗效进行评价,分析影响其疗效的因素.方法:选取Ⅱ～Ⅲ度根分叉区病变的患牙21颗,胶原膜治疗11颗,翻瓣术治疗10颗,术后3月通过观察牙龈指数、附着水平、根分叉垂直与水平探诊深度的变化;实验室检测龈沟液量(GCF)及龈沟液碱性磷酸酶(GCF-ALP)活性水平的变化;计算机测量分析根尖片,对2种手术方法的临床疗效进行比较.结果:术后3月①自身前后比较,2组的牙龈指数均无显著性差异(P＞0.05),根分叉垂直与水平探诊深度与GTR组的牙周附着水平,均有明显改善,且有显著性差异(P＜0.05),翻瓣组临床附着水平变化则无显著性差异(P＞0.05);胶原膜组与翻瓣组相比较,除牙龈指数外各项临床指标均具有显著性差异(P＜0.05).②实验室观察:自身前后对照比较.2组GCF量均无显著性差异(P＞0.05),GCF-ALP浓度均减少,且有统计学意义(P＜0.05).胶原膜组与翻瓣组相比较,GCF-ALP浓度减小幅度较大,有显著性差异(P＜0.05).③根尖片的测量:2组根分叉区骨密度均增高,GTR组与对照组相比较,垂直向骨高度增加明显,具有显著性差异(P＜0.05).结论:胶原膜治疗Ⅱ～m度根分叉区病变,可获得良好的短期临床疗效.     

犬IGF-I编码区cDNA克隆及其序列分析

目的：克隆犬胰岛素样生长因子(IGF—Ⅰ)编码区基因，构建重组真核表达载体。方法：从犬左心室组织中提取总RNA，通过RT—PCR获取IGF—1 cDNA编码区全序列，将其与pcDNA3．1( )质粒载体连接，构建重组真核表达载体pcDNA3．1( )／IGF—1，转化大肠杆菌DH5α后，随机挑选数个克隆，提取质粒DNA，通过限制性酶切和核苷酸序列鉴定阳性克隆。结果：重组质粒pcDNA3．1( )／IGF—1的酶切图谱和序列分析结果与国外文献报道一致。结论：克隆到IGF—1编码区基因，成功构建重组真核表达载体pcDNA3．1( )／IGF—1。     

牙龈卟啉单胞菌对人脐静脉血管内皮细胞生物学活性的影响

目的:观察牙龈卟啉单胞菌(porphyromonas gingivalis,Pg)对人脐静脉内皮细胞(HUVECs)增殖和凋亡的影响,并探讨Pg对人脐静脉内皮细胞的毒性作用.方法:厌氧培养饴,原代培养HUVECs,用四甲基偶氮唑盐微量酶反应比色法(MTT)观察HUVECs的增殖情况;用凋亡试剂盒检测HUVECs凋亡状态.结果:Pg可以明显地抑制HUVEC的增殖,并可以引起HUVEC的凋亡.结论:Pg可以通过损伤人脐静脉内皮细胞而加重局部的炎性反应,可能是牙周炎诱发心血管疾病的病理机制之一.     

基质细胞衍生因子-1（SDF-1）与牙周组织自体（原位）再生

牙周炎是成年人牙齿丧失的首位原因,如何使破坏的牙周组织再生是人们关注的焦点。植骨术、引导性组织再生技术（GTR）、生长因子应用等是目前研究较多的牙周组织再生技术,其中植骨术和GTR虽然在临床实践中已广泛应用,