大气环境TSP污染物有机组份的遗传毒性分析

目的 了解某市大气环境总悬浮颗粒(TSP)污染物有机组份(EOM)的遗传毒性.为出生缺陷的预防和控制及环境保护工作提供基础资料.方法 利用大流量自动采样器对某市城西工业区、旧城区及城南高新技术开发区的大气环境呼吸带(1.2-2.0m)TSP污染物分别进行采样;TSP颗粒物中的有机成份(EOM)运用二氯甲烷法(DCM法)抽提,最后以DMSO定客;利用人体支气管上皮细胞(16HBE)接受3种不同浓度EoM(5μl/ml、10μl/ml、20μl/ml)的毒性攻击实验;以DNA的损伤程度作为EOM遗传毒性的指标.以常规单细胞凝胶电泳技术(SCGE)进行检测.结果 旧城区及城南高新技术开发区样本EOM未见明显DNA损伤效应,而城西工业区3种不同浓度的EOM可见16HBE细胞DNA损伤效应.结论 EOM是城西工业区大气环境污染物的重要毒性成份.     

3β-HSD基因高表达细胞株建立及其对DEHP致凋亡影响研究

目的构建3β-HSD高表达细胞株,研究3β-HSD高表达对塑化剂DEHP致凋亡的影响。方法根据GenBank上3β-HSD基因cDNA序列设计引物,PCR扩增该基因并将其克隆到慢病毒载体pLVX-CMV-ZSgreen-PGK-Puro,然后转染至MCF-7细胞中,对细胞株进行鉴定。用不同剂量DEHP对3β-HSD高表达细胞和MCF-7细胞染毒24h,在基因和蛋白表达水平上检测Bax、Caspase-3、Caspase-8的变化。结果基因测序验证本文构建的3β-HSD基因高表达载体基因序列与GenBank中的序列一致,荧光定量PCR结果显示3β-HSD基因表达水平升高105倍,western blot结果显示3β-HSD蛋白表达水平升高80%。DEHP染毒MCF-7细胞后,Bax、Caspase-3、Caspase-8基因表达水平比对照组分别升高28%~54%、13%~49%、21%~70%,BAX、CASPASE-3、CASPASE-8蛋白表达水平比对照组分别升高28%~61%、40%~48%、31%~84%。DEHP染毒3β-HSD高表达细胞后,Bax、Caspase-3、Caspase-8基因表达水平比对照组分别升高39%~75%、22%~30%、32%~45%,BAX、CASPASE-3、CASPASE-8蛋白表达水平比对照组分别升高8%~33%、19%~32%、10%~21%。结论本文成功构建3β-HSD基因高表达细胞株;DEHP可引起MCF-7细胞和3β-HSD高表达细胞凋亡基因及蛋白发生改变,本文结果提示3β-HSD基因在一定程度上促进DEHP的致凋亡作用。     

Graves病患者外周血中树突状细胞及相关细胞因子的变化

目的检测Graves病人外周血细胞因子和树突状细胞(DCs)不同亚群的数量和表达情况,初步探讨DCs细胞亚群在疾病中的作用。方法利用流式细胞仪检测30例Graves病患者和30名健康体检者的外周血树突状细胞亚群数量,同时利用ELISA检测肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、干扰素-γ(IFN-γ)、白细胞介素-2(IL-2)及IL-6等细胞因子的水平。结果测得Graves组髓样树突状细胞(p DC)和浆细胞样树突状细胞(m DC)值均高于正常对照组。ELISA检测细胞因子发现,Graves患者血清中TNF-α、IFN-γ、IL-6水平均高于正常对照组,其中TNF-α显著升高(P<0.01),而IL-2水平显著低于对照组(P<0.01)。结论 Graves病人中p DC和m DC水平升高,细胞因子分泌失调,Th1/Th2失衡,从而导致机体自身免疫反应的产生。     

MCF-7耐米托蒽醌细胞株甲基化结合蛋白表达

目的 研究乳腺癌细胞(MCF-7)经米托蒽醌诱导耐药后其甲基化结合蛋白(Methyl-DNA-binding protein,MBD)的表达变化,并分析在MCF-7细胞经诱导产生多药耐药性中与甲基化结合蛋白的关系.方法 利用耐米托蒽醌的MCF-7耐药株,并用未染毒的野生型MCF-7为对照,通过蛋白印迹法检测不同浓度米托蒽醌处理的细胞组乳腺癌耐药蛋白(breast cancer resistance protein,BCRP)和甲基化结合蛋白MBD1、MBD2及MBD4的蛋白表达水平.结果 跟野生型MCF-7比较,随着染毒浓度的增大,乳腺癌耐药蛋白BCRP的表达逐渐增加,而MBD1、MBD2、MBD4的表达均呈降低趋势,且MBD4的降低尤为明显,与对照组比较,其MBD4蛋白表达水平分别为(0.910±0.049)、(0.835±0.065)、(0.708±0.082)、(0.660±0.145)(P＜0.05).结论 在米托蒽醌诱导产生耐药的MCF-7细胞株中,MBDs的表达,尤其是MBD4,有可能参与了肿瘤耐药的形成.     

P-gp基因突变与乳腺癌多药耐药的研究

目的研究乳腺癌中P-gp基因的突变与其多药耐药的关系。方法采用MTT法检测52例临床乳腺癌标本对四种抗癌药物的敏感性,PCR扩增P-gp基因中最常发生突变的250个碱基进行单链构象多态性（SSCP）分析,根据SSCP的结果,挑取12个样本,将其核苷酸序列与野生型P-gp基因进行比较。结果52例乳腺癌组织中有8例对4种抗癌药物都敏感;对1种抗癌药物耐受的有19例,只有1例P-gp基因发生点突变;对2种抗癌药物耐受的有16例,其中有2例P-gp基因发生了点突变;对3种抗癌药物耐受和4种抗癌药物耐受的乳腺癌组织分别是7例和2例,它们的P-gp基因都发生了点突变。在这12例标本中,891gly（GGC→GAC）asp突变为5例,1145位his（CAC→TAC）tyr的突变为7例。结论P-gp基因突变介导乳腺癌的多药耐药,P-gp基因产物891位gly（GGC→GAC）asp和1145位his（CAC→TAC）tyr的突变与乳腺癌多药耐药的关系密切。     

三氯乙烯诱导人L-02肝细胞适应性反应的差异蛋白质组学分析

目的研究三氯乙烯(TCE)诱导L-02肝细胞的适应性反应及蛋白质表达改变。方法利用噻唑蓝(MTT)比色法,以0.5%二甲基亚砜(DMSO)作为溶剂对照组,确定对细胞增殖无明显作用的1μmo.lL-1TCE作为TCE诱导L-02肝细胞适应性反应的预刺激浓度,预刺激时间12 h,预刺激后再刺激浓度(适应组)为30μmo.lL-1TCE,刺激时间24 h。然后选取0,1,30和1+30μmo.lL-1TCE(1μmo.lL-1TCE预刺激12 h后,再次接受30μmo.lL-1TCE刺激24 h)4组平行进行双向凝胶电泳分离细胞总蛋白,银染显色,图像分析后,挑选差异蛋白进行基质辅助激光解吸电离飞行时间串联质谱鉴定。结果1μmo.lL-1TCE预刺激L-02肝细胞后,能降低30μmo.lL-1TCE攻击产生的细胞毒性。与单独用30μmo.lL-1TCE攻击相比,细胞增殖能力增加明显,细胞死亡减少。分析比较4组二维电泳图谱,发现15个蛋白质斑点表达发生改变,对其中5个差异较明显的蛋白点进行质谱分析鉴定,分别为Ku 86自体抗原相关蛋白1、透明质酸蛋白(hyaluronan)介导细胞运动受体、谷胱甘肽转移酶ω1、白细胞弹性蛋白酶抑制剂和空泡ATP合酶亚单位B。结论TCE可诱导L-02肝细胞产生适应性反应,引起L-02肝细胞蛋白表达改变,差异蛋白大多参与机体保护。     

低剂量三氯乙烯诱导人正常肝细胞损伤耐受差异表达基因的研究

目的寻找低剂量三氯乙烯(TCE)诱导人正常肝细胞(L02)损伤耐受差异表达的基因。方法参照本实验室用MTT法所得的TCE对L02毒性剂量-效应关系,选择5μmolL的三氯乙烯为低剂量,40μmolL为高剂量,按以下方式对细胞进行染毒:空白对照、低剂量、高剂量、损伤耐受组(先用低剂量刺激24小时,再用高剂量刺激6小时),然后用荧光差异显示PCR(FluoroDDPCR)寻找不同方式刺激差异表达的基因,并对差异表达基因进行克隆、鉴定。结果按方法所示的方式处理细胞,处理完毕后提取各组细胞总RNA,进行荧光差异显示PCR,找到51个差异条带。对其中的11个差异条带进行克隆鉴定同源性比较,发现其中9个已知基因,2个新基因。结论用荧光差异显示PCR方法寻找TCE诱导L02损伤耐受过程差异表达的基因,通过鉴定基因,为进一步研究TCE诱导L02的损伤耐受的机理提供科学依据。     

某大型继电器生产企业职业病危害控制效果评价

目的对某大型继电器生产企业进行职业病危害控制效果评价,提出改善劳动环境和劳动条件的办法,帮助企业完善职业病防治工作。方法以继电器生产单元及辅助生产单元（注塑机生产单元、粉碎机生产线、清洗房生产线、冲压车间生产线）对该建设项目中可能存在的职业病危害因素进行分析评价,采取调查表法与现场监测法相结合的评价方法。结果噪声、三氯乙烯及有机粉尘存在超标现象,为该电子厂必须加强管理的生产环节,在整改建议的情况下,采取了相应整改措施。结论整改后,在防护措施到位的情况下,该厂职业病危害控制效果评价可以达到国家卫生标准。     

深圳市宝安区2007年338家五金类企业职业病危害情况分析

目的了解深圳市宝安区五金类企业主要职业病的危害因素,为制订相应行业职业病预防提供依据。方法收集2007年深圳市宝安区基本职业卫生服务现场职业病危害因素监测数据并进行统计分析。结果五金类企业主要职业病危害因素是噪声、三氯乙烯、正己烷,合格率分别为37.0%、68.9%、69.8%。结论噪声、三氯乙烯、正己烷等是深圳市宝安区五金类企业的重要职业病危害因素,应加强卫生监督监测,做好相应的防护工作。     

糖尿病肢端坏疽患者的护理体会

采用中西医结合方法护理糖尿病肢端坏疽患者,临床疗效肯定,可减少医疗费用,值得临床推广。