circRNA_100395通过结合miR-31-5p抑制心肌细胞肥大相关基因的表达

目的:探讨环状RNA(circRNA)_100395对心肌细胞肥大表型的影响及其作用机制.方法:通过RT-qPCR检测健康器官捐献者(n=8)与心衰患者(n=14)心肌组织中circRNA_100395及其宿主基因Kelch蛋白样家族成员20(KLHL20)的表达水平.原代分离、培养乳小鼠心室肌细胞(NMVCs),分别...     

环状RNA circ＿0120051通过miR-144-3p/IDH2轴抑制心肌成纤维细胞的纤维化表型研究

【目的】研究环形RNA circ＿0120051对心肌成纤维细胞的纤维化表型的调控作用和机制。【方法】通过实时萤光定量PCR(RT-qPCR)检测健康器官捐献者（n=24）与心力衰竭（HF）病人（n=21）心肌标本中circ＿0120051及其宿主基因溶质载体家族8成员A1(SLC8A1)的表达水平。核糖核酸外切酶（RNase R）消化实验鉴定circ＿0120051的RNA稳定性。RT-qPCR检测circ＿0120051在人心肌细胞AC16中的核质分布情况。利用腺病毒在C57BL/6乳小鼠心肌成纤维细胞（mCFs）中过表达circ＿0120051,通过RT-qPCR和Western blot检测过表达circ＿0120051对mCFs中纤维化相关基因表达的影响,利用细胞划痕实验检测对mCFs迁移能力的影响。通过RNA免疫共沉淀技术（RIP）验证circ＿0120051与miR-144-3p间的结合作用,利用双萤光素酶报告基因实验鉴定miR-144-3p与靶基因异柠檬酸脱氢酶2(Idh2) 3’-UTR的结合位点。【结果】Circ＿0120051在心衰病人心肌中表达显著增加,而其宿主...     

CircRNA_005647通过结合miR-27b-3p抑制小鼠心肌成纤维细胞中纤维化相关基因表达

目的 研究环形RNA circRNA_005647对小鼠心肌成纤维细胞（CFs）纤维化表型的影响及分子机制。方法 利用血管紧张素Ⅱ 缓释泵[1.46 mg/ （kg·d）,2周]诱导建立小鼠高血压心肌纤维化模型,采用Masson染色观察心肌纤维化程度。实时荧光定量PCR检测发生纤维化的小鼠心肌及血管紧张素Ⅱ诱导的小鼠CFs中circRNA_005647的表达。利用放线菌素D和RNase R实验检测circRNA_005647的稳定性。利用重组circRNA_005647 腺病毒（rAd-circRNA_005647）感染小鼠CFs,检测CFs中纤维化相关基因Col1a1、Col3a1、Acta2 的mRNA和蛋白表达变化。双荧光素酶报告基因实验、RNA反义纯化实验及RNA Pulldown实验验证circRNA_005647与微小RNA miR-27b-3p的结合作用。结果 RT-qPCR结果显示,circRNA_005647在高血压诱导纤维化的小鼠心肌和Ang-II处理的小鼠CFs中表达增强（P<0.01）。放线菌素D和RNase R实验证实circRNA_005647比其宿主基因 Myo9a mRNA具有更好的稳定性（P<0.01）和抵抗 RNase R的降解作用。过表达 circRNA_005647可显著抑制小鼠CFs中纤维化相关基因 Col1a1、Col3a1和 Acta2表达（P<0.05）。双荧光素酶报告基因实验、RNA反义纯化实验及 RNA Pull down实验一致性地证实了circRNA_005647与miR-27b-3p之间存在特异结合作用,miR-27b-3p具有促进小鼠CFs的纤维化表型作用（P<0.05）,并可减弱circRNA_005647对小鼠CFs中纤维化相关基因表达的抑制作用。结论 CircRNA_005647在心肌纤维化中表达增强,并通过结合miR-27b-3p发挥抑制心肌纤维化作用。