Ⅰ型干扰素受体1单核苷酸多态性与结核病易感性的关联性

目的 探究Ⅰ型干扰素受体1(typeⅠinterferon receptor 1,IFNAR1)单核苷酸多态性(single nucleotide polymorphism,SNP)与结核病易感性的关系。方法 应用病例-对照研究方法,以深圳市第三人民医院1 533例活动性结核病患者(包括1 432例肺结核、101例肺外结核)作为病例组,1 445例健康人群作为对照组。运用MassARRAY飞行时间质谱技术,通过检测Ⅰ型干扰素(interferon,IFN)基因rs72552343、rs2834191、rs1012334、rs17875752、rs2843710、rs1041868位点基因型,分析两组间SNP等位基因频率差异,同时进一步比较肺结核与肺外结核病患者rs72552343 TCC/Del位点等位基因频率差异。结果 用MassARRAY飞行时间质谱技术可以有效地检测6个SNP位点基因型。在6个SNP位点中,发现仅rs72552343 TCC/Del位点等位基因频率在活动性结核组和对照组中差异有统计学意义(P<0.05),结核病患者rs72552343 TCC/Del位点TCC等位基因频率显著增高(OR=0.46;95%CI=0.31~0.70;P=0.0002),其他5个SNP等位基因频率在两组之间差异无统计学意义(P>0.05)。另外,发现肺外结核病患者rs72552343 TCC/Del位点TCC等位基因的频率与肺结核病患者差异无统计学意义(OR=0.88;95%CI=0.20~3.74;P=0.86)。结论 IFN基因rs72552343 TCC/Del位点 SNP与结核易感性相关,其TCC等位基因为结核易感基因,但携带TCC等位基因的个体患活动性肺结核与肺外结核的风险一致。     

白细胞介素1α基因单核苷酸多态性与甲型H1N1流感易感性的关系

目的 探讨白细胞介素1d(IL-1α)基因单核苷酸多态性(SNP)与甲型H1N1流感易感性的关系.方法 从IL-1α基因启动子区域中选取4个SNP位点rs1800587、rs2856836、rs2856838、rs3783525,针对以上位点建立基于飞行时间质谱分析技术(TOF-MS)鉴定SNP的方法,对167例H1N1流感患者(H1N1组)和192例健康对照人群(对照组)进行检测.确定各SNP位点的等位基因和基因分型;对比两组等位基因和各基因型的频率.结果 rs1800587、rs2856836、rs2856838位点具有T和C两种等位基因,包括TT、TC、CC 3种基因型.rs3783525具有A和T两种等位基因,包括AA、AT和TT3种基因型.H1N1组和对照组rs 1800587位点的等位基因频率差异有统计学意义(x2=12.69,P=0.000,OR=2.424,95％CI=1.472 ～ 3.993),rs2856836,rs2856838,rs3783525等位基因频率在H1N1组和对照组中差异则无统计学意义.H1N1组rs1800587位点CC纯合子频率低于对照组[72.5％(121/167)比87.0％(167/192),P＜0.05],杂合子(TC)频率高于对照组[25.1％(42/167)比12.5％(24/192),P＜0.05],而两组TT纯合子频率差异则不具有统计学意义.H1N1组rs2856836位点杂合子(TC)频率高于对照组[25.7％(43/167)比17.2％(33/192),P＜0.05],TT基因型与CC基因型频率在两组间差异均没有统计学意义.rs2856838位点对照组TT纯合子频率低于H1N1组[4.2％(8/192)比10.8％(18/167),P＜0.05],其余2种基因型TC与CC在两组间差异没有统计学意义.H1N1组rs3783525位点TTT纯合子频率高于对照组[21.0％ (35/167)比13.0％(25/192),P＜0.05],两组间的另两种基因型TC与CC差异也没有统计学意义.结论 IL-1α基因多态性位点rs1800587、rs2856836、rs2856838、rs3783525与甲型H1N1流感易感性相关.     

TLR2对小鼠IL-17分泌的影响及其在抗结核免疫中的作用

目的通过检测TLR2-/-小鼠和WT小鼠脾脏CD4+T淋巴细胞在TLR2结核菌配体刺激下IL-17的表达水平,阐明TLR2对Th17细胞的作用及其在抗结核免疫的意义。方法选取TLR2-/-小鼠和WT小鼠各6只,分离出小鼠脾脏淋巴细胞与TLR2结核菌配体(19KD脂蛋白、Mtb、Pam3Cys-SK)共刺激培养3 d,通过流式细胞技术检测CD4+T细胞IL-17的表达水平。结果在TLR2结核菌配体刺激下,WT小鼠的CD4+T细胞分泌的IL-17高于TLR2-/-小鼠,在Mtb刺激下两者之间有统计学差异(P<0.05)。结论结核菌通过TLR2直接影响IL-17表达,从而发挥抗结核免疫作用。     

肺结核患者外周血单个核细胞中CD32和CD64的表达及意义

目的检测CD32和CD64在肺结核患者外周血单个核细胞(PBMC)中的表达,探讨其在结核病发病中的作用及诊断价值。方法应用Illumina Solexa高通量测序技术和荧光定量PCR检测健康者(HD),结核潜伏感染者(LTBI)和肺结核患者(TB)PBMC中CD32和CD64的表达情况。结果肺结核患者PBMC CD32和CD64表达明显高于健康人和结核潜伏感染者。结论肺结核患者PBMC高表达CD32和CD64,CD32和CD64可能在抗结核免疫中起到重要作用。     

结核患者外周血PBMC中T-bet和Eomes表达的检测

目的初步探讨T-bet和Eomes的表达与结核病发生的关系。方法分析比较结核患者(TB)与健康对照(HC)、结核菌潜伏感染者(LTBI)以及细菌性肺炎患者(PN)外周血PBMC中T-bet和Eomes的m RNA表达水平,并观察结核患者在抗结核治疗前及抗结核治疗3、6、9和12个月后,外周血PBMC中T-bet和Eomes的m RNA表达水平的变化。结果结核患者(TB)外周血PBMC中T-bet和Eomes的m RNA表达水平显著低于健康对照(HC)、结核菌潜伏感染者(LTBI)以及细菌性肺炎患者(PN)(P0.05)。同时,在抗结核治疗12个月后,T-bet的表达水平较治疗前显著升高(P0.05),Eomes的表达水平较治疗前升高,但差异无统计学意义(P0.05)。结论 T-bet和Eomes两个基因表达水平的下降可能与结核病的发生有关。     

花生四烯酸代谢产物12-HETE与结核病发生发展的相关性

目的 检测结核病患者血浆中12羟基二十烷四烯酸（12-HETE）的含量以及治疗前后其含量的变化,明确12-HETE与结核病发生发展的关系。方法 收集结核病患者（TB）、结核病潜伏感染者（LTB）、健康对照（HD）和非结核感染疾病（Non-TB）的血浆标本,同时收集结核病患者组病例经抗结核治疗3个月、6个月、12个月的随访血浆标本,以ELISA检测12-HETE的含量,比较不同组别和抗结核病治疗不同时间12-HETE的含量的差异;收集结核病患者的肺泡灌洗液标本,ELISA检测12-HETE的含量并计数肺泡灌洗液中的中性粒细胞数量。结果 12-HETE在结核患者血浆中为（277.3±23.2）ng/mL,在健康对照血浆中为（233.4±25.1）ng/ mL,差异具有统计学意义（P<0.01）。经过抗结核药物治疗3个月、6个月、12个月后,12-HETE的含量逐渐降低,与治疗前的含量相比差异具有统计学意义（P <0.01）;在肺泡灌洗液中,12-HETE的含量与中性粒细胞的数量呈显著正相关（r=0.619,P <0.001）。结论 结核菌感染诱导的12-HETE代谢失调是结核病发生发展的重要原因。     

xCT基因rs13120371位点单核苷酸多态性与肺结核易感性的相关性

目的 通过大样本病例与对照研究明确xCT基因功能性SNP与结核病易感性的相关性,明确其调控结核病发生发展的分子机制。方法 从健康对照和结核患者的全血样本中提取基因组DNA,采用TaqMan探针技术对xCT基因rs13120371位点进行基因分型并对基因频率进行关联性分析,结核菌特异性抗原IFN-γ斑点形成细胞的数量和放射影像学分数反应不同基因型与临床指标的相关性,Real-time PCR方法检测健康对照和结核患者外周血单个核细胞中xCT基因及其相关的CXCL1、CXCL2、IL1B基因的表达水平。结果 等位基因位点基因频率分布符合Hardy-Weinberg平衡定律(χ²=0.678,P>0.05),选择的样本具有群体代表性。rs13120371位点的单核苷酸多态性与结核病的易感性相关,其中结核患者组等位基因A的基因频率为70.2%,等位基因G的基因频率为29.8%;健康对照组等位基因A的基因频率为66.8%,等位基因G的基因频率为33.2%,两组之间的等率基因频率差异具有统计学意义(P=0.02,OR=0.86)。AA基因型患者的结核菌特异性刺激分泌的IFN-r斑点形成细胞数量及炎症反应指标明显高于基因型GG的患者,基因型AA的细胞xCT基因的表达水平也明显上调。结论 xCT基因rs13120371位点的单核苷酸多态性与汉族人群结核感染的易感性相关,并且rs13120371位点是功能性SNP,等位基因A可能增加结核菌感染的风险。     

IL-6R基因单核苷酸多态性与肺结核易感性的相关性研究

目的探讨白细胞介素-6受体（Interleukin-6R,IL-6R）基因多态性与汉族人群肺结核发病的关系。方法分析深圳汉族人群中96例结核病患者和96名健康对照的IL-6R基因rs1552481、rs4379670、rs3887104、rs2229238位点的多态性,分析基因多态性与结核病易感性的关系。结果 IL-6R基因rs4379670位点,病例组TA基因型频率（25.3）明显低于对照组（39.8）（P〈0.05）,病例组T等位基因频率（14.7）明显低于对照组（24.2）（P〈0.05）;rs2229238位点,对照组TC基因型频率（25.3）明显低于病例组（37.9）（P〈0.05）,病例组T等位基因频率（14.7）也明显低于对照组（24.2）（P〈0.05）;其他两个位点病例组和对照组之间无明显差异。结论 IL-6R基因rs4379670位点AA型和rs2229238位点CC型可能与肺结核发病相关,两位点中等位基因T可能为保护性基因。     

应用飞行时间质谱法研究甲型H1N1流感人群白细胞介素-1α基因单核苷酸多态性

探讨白细胞介素-1α(IL-1α)基因单核苷酸多态性(SNP)与甲型H1N1流感易感性的关系.方法:采用病例-对照研究方法,应用飞行时间质谱(time of flight mass spectrum)芯片技术,检测H1N1流感组(167例)和健康对照组(192例)IL-1α基因4个SNP位点(rs 1304037,rs16347,rs17561,rs2071373)多态性.结果:rs17561位点具有T和G两种等位基因,其中T等位基因频率在H1N1组为13.8％,对照组7.3％,差异具有统计学意义(P=0.004,OR=2.031,95％ CI 1.238-3.331);其他3个位点等位基因频率在两组人群中差异无统计学意义.结论:IL-1α基因rs17561位点多态性与甲型H1N1流感易感性相关,T等位基因是甲型H1N1流感易感基因.     

飞行时间质谱与TaqMan探针技术在结核病易感性相关基因单核苷酸多态性筛选中的应用

目的 对比分析飞行时间质谱技术（MALDI-TOF）和TaqMan探针筛选与结核病易感性相关单核苷酸多态性（SNP）位点的结果,以及联合应用的方法学和效果评价.方法 选取2010年10月至2011年4月在深圳市第三人民医院收治并确诊的结核病患者400例为结核病组,对照组为同时期收集的健康体检者300名,利用MALDI-TOF对选取的7个SNP位点（rs2227476、rs1800795、rs56077270、rs1800797、rs2227484、rs2227472和rs2227473）同时进行基因分型,初步筛选易感SNP位点;与结核病易感相关的单个SNP位点,采用基于TaqMan探针技术的实时荧光定量PCR对同样的标本再进行基因分型,比较两种方法的准确性与敏感度;以rs2227473位点为实例对分型结果的基因频率进行分析,确定肺结核的易感SNP.结果 MALDI-TOF分型成功率为99.7％（698/700）,TaqMan探针技术为98.4％（689/700）;在基因分型过程中,MALDI-TOF与TaqMan探针方法对1例标本的分型结果不一致,经过对此分型结果进行了测序验证,MALDI-TOF的分型结果正确,MALDI-TOF在准确性和敏感度比TaqMan法稍高.位点rs2227473基因频率分析中,结核病组G等位基因频率（90.3％,722/800）明显高于对照组（82.5％,495/600）（x2=6.911,P=0.009）.结论 上述肺结核易感基因的筛选方法是可行的;实例分析中,将两种方法联合应用,发现了IL-22基因rs2227473位点等位基因G可能与肺结核发病相关,两位点中等位基因A可能为保护性基因.