抗克伦特罗单克隆抗体杂交瘤的建立及其分泌单抗的免疫学特性鉴定

目的 :建立抗克伦特罗 (CL)单克隆抗体杂交瘤细胞系 ,制备CL单克隆抗体 ,并鉴定其免疫学特性。方法 :用重氮化法将半抗原CL偶联于载体蛋白BSA ,形成结合抗原BSA CL ;以BSA CL免疫BALB/C小鼠 ,应用杂交瘤技术建立分泌CL单克隆抗体细胞株 ;用体内诱生腹水法生产CL单抗 ,硫酸钠盐析法提纯。应用抗小鼠同种型抗体测定单抗的同种型 ,用竞争性ELISA和胶体金膜层析试验测定CL单抗的反应特异性和反应动力学。结果 :筛选出C 4G1、C 2H6、C 2D6和C 4C94株高敏感性和高特异性杂交瘤生产单抗 ,其单抗的间接ELISA效价分别为 5× 10 -5、3× 10 -4、6× 10 -4、2× 10 -5;同种型分别为IgG1/κ、IgG1/κ、IgG2a/κ、IgG2a/λ。C 4G1的亲和力常数K =1 6 8× 10 8L/mol,C 2H6的亲和力常数K =1 3× 10 8L/mol。经WestGold蛋白质印迹鉴定单抗与CL特异性结合。C 4G1单抗对CL的半数抑制浓度 (IC50 )为 7 94ng/ml,对沙丁胺醇 (Sb)的IC50 为 10 0 0ng/ml,对肾上腺素、去甲肾上腺素、异丙肾上腺素和来克多巴胺的IC50 均≥ 6 4 0 0ng/ml;C 4G1单抗与Sb的交叉反应性为0 79% ,与异丙肾上腺素的交叉反应性为 0 12 % ,而与肾上腺素、去甲肾上腺素、来克多巴胺、各类抗生素及多种维生素均无交叉反应性。结论 :用单克隆抗体杂交瘤技术     

猪瘟病毒C株E~(rns)/E2嵌合基因表达蛋白单克隆抗体的制备及其生物学特性的鉴定

目的:制备抗猪瘟病毒(CSFV)C株 E~(rns)/E2嵌合基因表达蛋白的单克隆抗体(mAb),探讨~(rns)/E2蛋白的分子结构和生物学功能.方法:在大肠杆菌 Rosetta~(TM)2(DE_3)中表达了猪瘟病毒(CSFV)C株 E~(rns)、E2蛋白主要抗原域的嵌合基因CSFV E~(rns)/E2蛋白;以纯化复性后的CSFV E~(rns)/E2为免疫原,按常规方法免疫BALB/c小鼠,应用淋巴细胞杂交瘤技术制备抗CSFV E~(rns)/E2 mAb;利用间接ELISA 、Western blot、Dot blot方法鉴定mAb生物学特性.结果:获得了1株稳定分泌抗CSFV Erns/E2融合蛋白的单克隆杂交瘤细胞系C8株,该株mAb的细胞培养上清效价为 1:6 400,小鼠腹水效价 1:2×10~5.其免疫球蛋白亚类为IgG1.间接ELISA和Western blot结果显示该株mAb不与猪瘟C株细胞毒、pET-32a标签蛋白反应,仅与融合表达的 CSFVE~(rns)/E2蛋白存在特异性反应.Dot blot结果表明其识别的抗原表位为E2蛋白的 RSGLCPFDTSPV氨基酸序列.结论:获得了一株能特异识别E2蛋白抗原表位的 mAb,为进一步研究 CSFV 的分子结构及功能奠定了物质基础.